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寄生虫与医学昆虫学报 2021年第1期28卷 35-40页

作者：张强辉姜玉庭李超杰赵腾张恒端邢丹董言德李春晓赵彤言郭晓霞军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071

白纹伊蚊Aedes albopictus是登革病毒、寨卡病毒等多种病原体的重要传播媒介,广泛分布于我国温带和亚热带地区,以滞育卵越冬。一旦虫媒病毒扩散到我国北亚热带地区,非流行季节时期病毒的保存方式,将成为虫媒病毒研究中的重要问题。本研... 详细信息

白纹伊蚊Aedes albopictus是登革病毒、寨卡病毒等多种病原体的重要传播媒介,广泛分布于我国温带和亚热带地区,以滞育卵越冬。一旦虫媒病毒扩散到我国北亚热带地区,非流行季节时期病毒的保存方式,将成为虫媒病毒研究中的重要问题。本研究开展了白纹伊蚊滞育卵的生态学研究,发现在短光照下不同地理株白纹伊蚊滞育卵的滞育率从产卵后7 d逐渐上升到21 d,至40 d趋于平缓并达到最高,滞育率在滞育前期和滞育后期统计学上差异显著。在滞育中后期,北京株白纹伊蚊滞育率相比杭州株白纹伊蚊和广州株白纹伊蚊滞育率明显较高。卵孵化后,不同地理株白纹伊蚊的卵的孵化率在滞育前期和滞育后期有显著差异。在短光照下滞育后期北京株白纹伊蚊的卵孵化率(21.45%)明显比广州株白纹伊蚊的卵孵化率(8.15%)高,提示位于温带地区的北京株白纹伊蚊较位于亚热带地区的杭州株和广州株白纹伊蚊滞育率和孵化率更高,说明位于温带地区的白纹伊蚊品系的滞育卵更能在冬季不良环境如低温等下存活,有利于增加越冬存活率。通过白纹伊蚊以滞育卵实现种群扩散、定殖的重要生物学基础,为探索新型蚊媒的控制途径提供科学依据。

关键词：白纹伊蚊气候区滞育孵化率

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云南省边境地区埃及伊蚊和白纹伊蚊孳生特征调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2021年第3期28卷 159-164页

作者：王戈张恒端高剑郭晓霞邢丹李超杰张强辉刘源麻祖李春晓赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京市虫媒病与自然疫源性疾病重点实验室北京100071

埃及伊蚊和白纹伊蚊是登革热的主要传播媒介,蚊虫孳生情况的持续调查和分析,有助于对种群变化进行实时监控,从而为登革热的防治提供理论依据。2017—2020年,每年9—10月在云南省西双版纳州(勐腊县、景洪市、勐海县),临沧市(镇康县南伞... 详细信息

埃及伊蚊和白纹伊蚊是登革热的主要传播媒介,蚊虫孳生情况的持续调查和分析,有助于对种群变化进行实时监控,从而为登革热的防治提供理论依据。2017—2020年,每年9—10月在云南省西双版纳州(勐腊县、景洪市、勐海县),临沧市(镇康县南伞镇、耿马县孟定镇),德宏州(瑞丽市)共6个市(县)调查埃及伊蚊和白纹伊蚊孳生地类型并捕捞幼虫,对4龄幼虫分类鉴定以观察两种伊蚊特征。结果显示,此次在所调查的6个市(县)均发现两种伊蚊孳生地,共560个。孳生地类型以家用水桶类最多,占比44.82%。边境各地区居民区调查发现埃及伊蚊孳生地占比33.64%,商业区埃及伊蚊占比48.89%,两种调查地埃及伊蚊数量差异存在统计学意义,在商业区埃及伊蚊占比高于居民区。2017年西双版纳州和瑞丽市白纹伊蚊孳生地占比分别为75.51%和67.44%,2020年为36.67%和38.10%,说明两地白纹伊蚊构成比下降。两地区埃及伊蚊孳生地占比由2017年的18.37%和16.28%增长为2020年的43.33%和42.85%,说明埃及伊蚊构成比上升。结果表明,由于埃及伊蚊比白纹伊蚊传播登革热的能力更强,2020年的西双版纳州和瑞丽市较2017年,商业区较居民区暴发登革热的潜在风险更高。

关键词：埃及伊蚊白纹伊蚊孳生地调查云南

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实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测鼠疫耶尔森菌

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军事医学 2022年第7期46卷 487-492页

作者：白欣茹袁媛徐健皓辛文文康琳王菁李岩伟高姗赵宝华王景林河北师范大学生命科学学院石家庄050024 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 福建农林大学生命科学学院福州350000

目的建立基于实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)的鼠疫耶尔森菌快速检测技术。方法以鼠疫菌特异基因序列YPS723为靶标,设计实时荧光RPA引物探针并进行筛选;构建含有基因待检片段的重组质粒进行实时荧光RPA方法灵敏度的评价;将15种非鼠疫菌... 详细信息

目的建立基于实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)的鼠疫耶尔森菌快速检测技术。方法以鼠疫菌特异基因序列YPS723为靶标,设计实时荧光RPA引物探针并进行筛选;构建含有基因待检片段的重组质粒进行实时荧光RPA方法灵敏度的评价;将15种非鼠疫菌细菌基因组混合后进行实时荧光RPA方法特异性验证;将鼠疫菌基因组掺入人血清和小鼠全血中模拟自然感染状态,以评估实时荧光RPA检测的实用性。结果筛选出的实时荧光RPA引物、探针在39℃条件下15 min内即可在便携装置上获得检测结果,最低检测模板质粒浓度为10拷贝/μl,与其他细菌无交叉反应且重复性良好。实时荧光RPA对人血清模拟样本和小鼠全血模拟样本中鼠疫菌基因组的检出限为50 fg/μl,且在模拟样本盲测中正确率达100%。结论该研究开发了一种快速、便携、灵敏度高、特异性好的实时荧光RPA方法用于鼠疫菌的检测。

关键词：鼠疫耶尔森菌实时荧光RPA YPS723 检测

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3种MALDI-TOF MS微生物鉴定系统的比较研究

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军事医学 2022年第3期46卷 173-178页

作者：柳婷婷夏苏苏宋合兴佟雪梅辛文文王景林康琳河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 融智生物科技(青岛)有限公司山东青岛266109

目的比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的3个微生物鉴定系统[法国生物梅里埃公司的VITEK MS(包括IVD和RUO)、德国布鲁克公司的Biotyper和国内融智生物科技公司的QuanID]对各种致病微生物的鉴定效果。方法采用直涂法... 详细信息

目的比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的3个微生物鉴定系统[法国生物梅里埃公司的VITEK MS(包括IVD和RUO)、德国布鲁克公司的Biotyper和国内融智生物科技公司的QuanID]对各种致病微生物的鉴定效果。方法采用直涂法对33个属75个种共121株常见致病微生物菌株进行鉴定,每个菌株做3个平行鉴定。结果QuanID系统对121株菌株的种、属鉴定率分别达98.3%和100%,未鉴定率与鉴定错误率为0。Biotyper系统的种、属鉴定率分别达90.9%和95.9%,未鉴定率为0,鉴定错误率为4.1%。VITEK MS系统的IVD的种、属鉴定率分别为85.1%和88.4%,未鉴定率为9.1%,鉴定错误率为2.5%。RUO的种、属鉴定率分别为76.0%和86.8%,未鉴定率为13.2%,鉴定错误率为0.8%。结论QuanID与Biotyper数据库的容量优于VITEK MS,且对致病微生物的种、属鉴定准确率更高。这些数据库在质谱致病微生物学鉴定领域发挥着重要的作用。

关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 致病微生物鉴定数据库

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AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素A方法的建立

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军事医学 2020年第11期44卷 815-820页

作者：张力文陈萱郑玉玲江华刘鹏孔德聪律清宇姜永强安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的均相光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)。方法待测样本中的SEA与偶联有羊抗SEA多克隆抗体的受体微球、生物素化的小鼠抗SEA单克隆抗体发生反应,形成双抗体夹心结构,再与包被链霉亲和... 详细信息

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的均相光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)。方法待测样本中的SEA与偶联有羊抗SEA多克隆抗体的受体微球、生物素化的小鼠抗SEA单克隆抗体发生反应,形成双抗体夹心结构,再与包被链霉亲和素的供体微球形成复合体。680 nm波长荧光激发供体微球上的光敏剂产生单线态氧,触发受体微球发出615 nm波长荧光,多功能酶标仪检测信号值,信号值高低与待测样本中SEA的浓度呈正比。结果缓冲液中SEA的最低检出限(LOD)为0.1 ng/ml,线性范围0.2~50 ng/ml,相关系数R2为0.9941。检测体系不易受高糖、高盐和高蛋白等样本基质的影响,牛乳等液态模拟样本和10%(w/v)稀释的奶粉、豆干、火腿肠等固态食品模拟样本的LOD均为0.1 ng/ml。检测体系与其他4种肠毒素(SEB、SEC、SED、SEE)、A型肉毒毒素、蓖麻毒素、相思子毒素均无交叉反应,特异性较好。无论是缓冲液还是模拟样本检测,变异系数均小于10%,具有较好的重复性。结论该法操作流程简便,检测灵敏度高、特异性强,检测时间为25 min,在金黄色葡萄球菌性食物中毒的鉴别诊断中具有较好的应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A AlphaLISA 金黄色葡萄球菌性食物中毒

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机器学习在蚊虫及蚊媒传染病研究中的应用进展

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中国媒介生物学及控制杂志 2021年第4期32卷 503-508页

作者：孙燕群张守刚赵姗姗陆墨原张艳王冲李成国南京市疾病预防控制中心消毒与病媒生物防制科南京医科大学附属南京疾病预防控制中心江苏南京210003 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

该文主要介绍机器学习在全球蚊虫及蚊媒传染病研究中的应用进展,系统搜索国内外数据库进行文献调研,简单回顾了机器学习的主要方法,对机器学习在蚊虫及蚊媒传染病研究中的几大应用进行了系统总结,主要聚集在蚊虫和蚊媒传染病预测预警、... 详细信息

该文主要介绍机器学习在全球蚊虫及蚊媒传染病研究中的应用进展,系统搜索国内外数据库进行文献调研,简单回顾了机器学习的主要方法,对机器学习在蚊虫及蚊媒传染病研究中的几大应用进行了系统总结,主要聚集在蚊虫和蚊媒传染病预测预警、蚊虫图像和声音识别、蚊虫生物学等研究领域,为国内蚊虫及蚊媒传染病防制研究提供新的视角。

关键词：蚊媒蚊媒传染病机器学习研究进展

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鼠疫耶尔森菌吸入感染动物模型研究进展

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军事医学 2021年第7期45卷 553-557页

作者：蒋南周冬生杨文慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北部战区总医院超声科沈阳110016

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌感染引起的烈性传染病。在鼠疫已知的三种临床分型中,以气溶胶形式传播的肺鼠疫最为致命。开展肺鼠疫致病机制与防治研究需要稳定可靠的鼠疫耶尔森菌吸入感染动物模型。有报道构建鼠疫耶尔森菌吸入感染动物模型的... 详细信息

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌感染引起的烈性传染病。在鼠疫已知的三种临床分型中,以气溶胶形式传播的肺鼠疫最为致命。开展肺鼠疫致病机制与防治研究需要稳定可靠的鼠疫耶尔森菌吸入感染动物模型。有报道构建鼠疫耶尔森菌吸入感染动物模型的攻毒方式多种多样,不同攻毒方式下建立的各种肺鼠疫动物模型展现出不同的特点。该文综述了鼠疫耶尔森菌吸入感染动物模型的研究进展。

关键词：鼠疫耶尔森菌动物模型吸入感染

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我国不同地域蜱类自然感染MIV-2病毒的调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2021年第2期28卷 99-103页

作者：李洁王倩夏珞媛潘育生贾娜曹务春军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 山东大学公共卫生学院济南250000

为掌握Mini Virus-2(MIV-2)在我国的分布情况并了解其优势携带蜱种,本研究在我国云南、贵州、辽宁、黑龙江、吉林、广西和重庆市采集游离蜱614只,采用MIV-2特异性一步法逆转录荧光定量PCR检测MIV-2感染率。结果发现,携带MIV-2的阳性样本... 详细信息

为掌握Mini Virus-2(MIV-2)在我国的分布情况并了解其优势携带蜱种,本研究在我国云南、贵州、辽宁、黑龙江、吉林、广西和重庆市采集游离蜱614只,采用MIV-2特异性一步法逆转录荧光定量PCR检测MIV-2感染率。结果发现,携带MIV-2的阳性样本共67个,总阳性率10.91%。MIV-2在云南省和辽宁省的检出阳性率最高,分别为30.00%和20.83%。卵形硬蜱、长角血蜱等8个蜱种中均检测到MIV-2。

关键词： MIV-2病毒蜱流行病学

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基于致倦库蚊转录组的溴氰菊酯抗性相关基因分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第4期38卷 453-463页

作者：沈瑞鑫王意婷李春晓吴家红赵彤言陈艳贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵阳550000 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071

目的通过对致倦库蚊溴氰菊酯敏感株和抗性株进行转录组分析,筛选可能与抗性相关的差异表达基因。方法对致倦库蚊实验室敏感株(SS株)、海南株(HN株)和溴氰菊酯药筛抗性株(RR株) 3个不同抗性水平的株系进行生物测定,分别构建3个株系的cDN... 详细信息

目的通过对致倦库蚊溴氰菊酯敏感株和抗性株进行转录组分析,筛选可能与抗性相关的差异表达基因。方法对致倦库蚊实验室敏感株(SS株)、海南株(HN株)和溴氰菊酯药筛抗性株(RR株) 3个不同抗性水平的株系进行生物测定,分别构建3个株系的cDNA文库,提取RNA,进行转录组测序。基于FPKM值进行差异性分析,对差异基因进行GO和KEGG功能注释与富集分析。筛选出致倦库蚊不同株系中表达量有显著性差异的基因,并采用实时定量PCR验证。结果生物测定结果显示,与致倦库蚊SS株相比,HN株和RR株的抗性倍数分别达到了4 828倍和197 241倍,为高等抗性水平。RNA-seq测序结果显示,致倦库蚊SS株、HN株和RR株转录组共注释基因转录本197 079个。GO富集分析结果显示,在结合、催化活性、细胞过程、代谢过程、单一生物过程、细胞、细胞连接、细胞器中基因富集数量较多。KEGG富集分析结果显示,在富集度最高的前20个条目中,RR株主要富集于剪接体、核糖体等通路,HN株则主要富集于剪切体、RNA转运、hedgehog信号通路、细胞周期、核苷酸切除修复、DNA复制等方向。基于FPKM值的差异性分析结果显示,致倦库蚊RR株和HN株较SS株均上调的有5 357个,均下调的有10 978个。与溴氰菊酯抗性相关基因的靶向性筛选结果显示,与SS株相比,RR株和HN株注释的细胞色素P450基因、谷胱甘肽转移酶基因、气味结合蛋白基因、气味受体基因、视觉基因、核糖体蛋白基因和碳酸酐酶基因转录本中,均上调的分别为100、17、13、4、16、191和1个,均下调的分别为253、48、43、4、15、504和9个。从上调基因中挑选的12个基因(2个细胞色素P450基因、1个谷胱甘肽转移酶基因、1个视觉基因、1个核糖体蛋白基因、1个碳酸酐酶基因、1个核酸内切酶基因、2个气味结合蛋白基因、3个气味受体基因)进行实时定量PCR验证结果显示,在RR株和HN株中,这12个基因较SS株均显著上调,其中RR株较SS株上调1.62~80.26倍,HN株较SS株上调2.01~189.48倍。相关性分析结果显示,12个目标基因的RNA-seq结果与实时定量PCR结果在HN株和RR株中均呈正相关(r=0.802、0.710)。证明这12个目标基因的实时定量PCR结果与转录组测序结果趋势一致。结论基于高通量测序结果和定量PCR验证分析,致倦库蚊中的某些细胞色素P450基因、谷胱甘肽S转移酶基因、视觉基因、嗅觉蛋白基因可能在其对溴氰菊酯的抗性中起一定作用。

关键词：致倦库蚊溴氰菊酯抗性基因转录组测序实时定量PCR

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基于实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的金黄色葡萄球菌快速检测方法的建立

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军事医学 2022年第6期46卷 441-446页

作者：徐健皓李佳欣白欣茹李世青王亚茹袁媛王景林福建农林大学生命科学学院福州350002 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学石家庄050024 昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500

目的建立一种针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)辅助耐药基因femB的实时荧光重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测方法,并评价其灵敏度、特异性以及实用性。方法针对femB特异基因设计RPA候... 详细信息

目的建立一种针对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)辅助耐药基因femB的实时荧光重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测方法,并评价其灵敏度、特异性以及实用性。方法针对femB特异基因设计RPA候选扩增引物以及RPA荧光探针,设置同一浓度的阳性质粒浓度筛选出最优的RPA扩增引物,建立SA的实时荧光RPA(exo-RPA)检测方法,并设置SA基因组DNA浓度梯度测试该检测方法的灵敏度;选用11种其他致病菌基因组DNA测试方法特异性。最后模拟临床血液样本比较该法与qPCR检测方法的阳性检出率,评价方法的实用性。结果SA-exo-RPA检测方法在39℃反应温度下,5~10 min内可快速检出最低浓度为1 amol/L(3.82 fg)的SA基因组DNA,且特异性高,与其他致病菌无交叉反应。模拟临床血液样本阳性检出率与已发表文献中qPCR检测方法一致,不受样本中复杂成分的非靶标核酸干扰。结论该研究建立的SA-exo-RPA检测方法具有快速、高灵敏度和高特异性的优点,可应用于SA的现场快速检测。

关键词：重组酶聚合酶扩增金黄色葡萄球菌 femB 敏感性与特异性快速检测

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