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军事医学 2018年第3期42卷 199-203页

作者：郝嘉男李晓峰徐炎鹏刘忠钰秦成峰安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对。选取细胞... 详细信息

目的分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对。选取细胞融合病毒Galveston株的全基因序列,通过体外基因合成的手段获得覆盖病毒全基因的3个DNA片段,并分别克隆至p BR002载体。利用限制性内切酶和T4连接酶将分片段基因组连入pACNR载体,最终获得含有pACNR的细胞融合病毒Galveston全长cDNA克隆。根据Galveston病毒株基因组序列和pBR002载体的序列,利用DNAstar及Oligo6软件设计5对引物,用来对其连接处进行测序及鉴定。结果与结论构建了细胞融合病毒系统发生树,明确了其进化地位和其他黄病毒的同源性关系。构建出细胞融合病毒Galveston株全长cDNA克隆,经过酶切鉴定和序列测定表明所获得cDNA克隆为该病毒的全长序列。

关键词：黄病毒细胞融合病毒基因合成全长cDNA克隆

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寨卡病毒包膜E蛋白糖基化的生物学功能研究

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军事医学 2018年第12期42卷 930-934页

作者：程梦丽黄星耀邓永强李晓峰秦成峰安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的明确寨卡病毒包膜E蛋白第154位氨基酸糖基化的生物学功能。方法采用反向遗传学技术在寨卡病毒E蛋白引入单氨基酸突变N154Q,通过间接免疫荧光和增殖曲线对突变病毒的生物学特性进行鉴定,通过糖基化实验确定突变病毒E蛋白的糖基化水平... 详细信息

目的明确寨卡病毒包膜E蛋白第154位氨基酸糖基化的生物学功能。方法采用反向遗传学技术在寨卡病毒E蛋白引入单氨基酸突变N154Q,通过间接免疫荧光和增殖曲线对突变病毒的生物学特性进行鉴定,通过糖基化实验确定突变病毒E蛋白的糖基化水平,利用多种小鼠模型分析突变病毒的神经毒力和神经侵袭力。结果与野生型病毒相比,突变病毒能够在不同细胞系进行复制,但其在哺乳细胞上的增殖能力明显降低。更重要的是,突变病毒的乳鼠神经毒力及其对A129小鼠的神经侵袭力均显著减弱。结论寨卡病毒E蛋白第154位突变后无法进行糖基化修饰,进而影响其复制和对小鼠的致病性,具有重要的生物学功能。

关键词：寨卡病毒包膜蛋白糖基化致病性

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1-辛烯-3-醇对我国稻田区主要媒介蚊种的引诱作用研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2019年第2期26卷 88-91页

作者：李春晓阎婷董言德褚宏亮黄谊赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 湖南省疾病预防控制中心湖南长沙410005

1-辛烯-3-醇对蚊虫等吸血昆虫具有广谱引诱作用。本研究通过调配引诱剂中1-辛烯-3-醇的含量,测试不同1-辛烯-3-醇浓度下引诱剂对我国稻田区主要媒介蚊种三带喙库蚊和中华按蚊的现场引诱效果。目的在于提高现有捕蚊装置对三带喙库蚊和中... 详细信息

1-辛烯-3-醇对蚊虫等吸血昆虫具有广谱引诱作用。本研究通过调配引诱剂中1-辛烯-3-醇的含量,测试不同1-辛烯-3-醇浓度下引诱剂对我国稻田区主要媒介蚊种三带喙库蚊和中华按蚊的现场引诱效果。目的在于提高现有捕蚊装置对三带喙库蚊和中华按蚊的引诱能力。结果显示,6.3%~20%1-辛烯-3-醇粉剂均可显著提高捕获器对两种蚊虫的捕获效率,其中15%的浓度可提高三带喙库蚊和中华按蚊的捕获效果达3倍以上,引诱效果明显,具有良好应用前景。

关键词： 1-辛烯-3-醇三带喙库蚊中华按蚊引诱剂

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腺病毒41型感染致儿童腹泻一例临床表现及病毒基因组学特征分析

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中国病原生物学杂志 2018年第11期13卷 1236-1242页

作者：王媛媛裴广倩赵飞扬范航张湘莉兰何鮦鮦王云飞米志强安小平黄勇陈名武童贻刚安徽医科大学安徽合肥230000 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院

目的针对消化道疑似感染病例,采用高通量测序技术筛查病原体,并测定其全基因组序列,阐明其基因组及进化特征。方法通过对原因不明腹泻患儿的粪便进行病原体高通量基因测序,然后拼接其全基因组序列,采用最大似然法(选择bootstrap为1000)... 详细信息

目的针对消化道疑似感染病例,采用高通量测序技术筛查病原体,并测定其全基因组序列,阐明其基因组及进化特征。方法通过对原因不明腹泻患儿的粪便进行病原体高通量基因测序,然后拼接其全基因组序列,采用最大似然法(选择bootstrap为1000)绘制主要抗原蛋白六邻体(hexon)、五邻体(penton)和纤维突蛋白(fiber)的进化树,分析进化特征;运用Recombination Detection Program version 4(RDP4)软件进行序列重组分析;使用软件CLC Genomics Workbench 9.0分析突变位点。结果患儿临床表现主要为发热、呕吐、腹泻伴抽搐,通过对腹泻患儿的粪便样品高通量测序,使用本实验室高通量测序数据分析程序检出41型腺病毒(HAdV-41)。进一步测序和拼接获得该病毒全基因组序列,其基因组全长34 138bp。序列比对显示该病毒核苷酸序列与已报道序列的最高同源性为99%(Human adenovirus 41isolate NIVD103),属于腺病毒F亚属。对该病毒六邻体、五邻体和纤维突蛋白进行进化分析,其六邻体与HAdV-41isolate NIVD103,HAdV-41isolate SH/2015/D16亲缘关系较近,五邻体与HAdV-41isolate NIVD103,HAdV-41isolate SH/2015/D16,HAdV41isolate SH/2015/D240,HAdV-41isolate SH/2015/D381亲缘关系较近,纤维突蛋白与五邻体相似;对全基因组序列进行重组分析,未发现明显的重组迹象,但突变分析显示引起此例腹泻的病毒株基因组有多处突变。结论从一例腹泻患儿粪便中检出的病原体为新的41型腺病毒,该病毒基因组与以往发现的41型腺病毒有较大差异,其流行态势、致病性及免疫原性值得关注。

关键词：高通量测序腺病毒41型六邻体五邻体纤维突

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驻西非3例华人特殊疟疾病例诊疗体会

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传染病信息 2019年第5期32卷 466-471页

作者：涂波储芳许彪田园左曙青赵光宇郑俊杰陈威巍中国人民解放军总医院第五医学中心感染性疾病诊疗与研究中心北京100039 中国人民解放军总医院青少年肝病诊疗与研究中心北京100039 中国人民解放军总医院重症医学中心北京100039 中国人民解放军总医院卫勤部北京100039 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所流行病学与病原微生物研究室长春130122 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

疟疾是对全球健康影响最大的传染病,西非是疟疾的高流行地区。本文通过报道我国援塞拉利昂军事医学专家组在塞拉利昂诊治的3例疟疾患者的经验和体会,以期为临床医生在诊治类似疾病时提供参考、借鉴。

关键词：疟疾疟原虫西非诊疗体会

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lncRNA XLOC006926抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

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免疫学杂志 2018年第5期34卷 412-420页

作者：樊红霞程思杰赵玲娜王科宇严锦刘思齐牛燕张绍庚任明姬杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010059 中国人民解放军第三0二医院肝胆外科中心北京100039 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-... 详细信息

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-8、克隆形成、划痕及transwell实验检测过表达或抑制lnc RNA XLOC006926对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时结合临床信息统计分析其与临床病理特征及患者预后的相关性。结果 lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞及肝癌组织中的表达显著降低,过表达lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,相反抑制lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力增强。结合患者临床信息分析,lnc RNA XLOC006926的表达量与肿瘤大小(P=0.007)、PVTT(P=0.024)具有显著相关性,其低表达预示着预后较差。结论 lnc RNA XLOC006926在肝癌发生发展中发挥了重要作用,参与调节肝癌细胞的增殖及迁移,有望成为肝癌发生发展的生物标志物和肝癌预防治疗的新靶点。

关键词：肝癌长链非编码RNA 增殖迁移侵袭

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基于荚膜多糖基因wzc可变区序列的肺炎克雷伯菌荚膜分型

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军事医学 2018年第8期42卷 637-640页

作者：王灿李璞媛苑鑫童贻刚高明明刘慧莹秦艳红米志强柏长青安徽医科大学解放军307临床学院北京100071 解放军307医院呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行... 详细信息

目的对分离培养的肺炎克雷伯菌菌株进行荚膜分型以判断不同荚膜型在其中的分布。方法对来源于北京地区的肺炎克雷伯菌菌株参照编码肺炎克雷伯菌荚膜多糖基因中一段wzc基因可变区(CD1-VR2-CD2)序列设计引物,运用PCR法扩增目的片段并进行测序,与已发表的荚膜型或NCBI数据库上比对测序结果,最终确定荚膜型别。结果在实验室保存的231株肺炎克雷伯菌中,有210株可用此法进行荚膜分型(分型率为90. 9%);在分出的40种不同的荚膜型中,K47为最常见的荚膜型别,占17. 1%(36/210);其次为K15型,占10. 5%(22/210),其他为K1和K2型,分别占5. 7%(12/210)和6. 6%(14/210)。结论基于荚膜多糖基因wzc可变区序列进行分型的方法操作简单,更有利于不同实验室之间的结果相互比较。另外,K47、K15、K1和K2型为临床肺炎克雷伯杆菌常见的荚膜型。

关键词：肺炎克雷伯菌荚膜分型聚合酶链反应

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鼠疫耶尔森菌201菌株中重要代谢相关基因特定突变与其小鼠毒力的关系研究

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军事医学 2018年第11期42卷 850-855页

作者：宋凯吕瑞辰冯欢肖丽生颜焱锋谭亚芳崔玉军杨瑞馥宋亚军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 东部战区疾病预防控制中心南京210002 兰州大学生命科学学院兰州730000 青海省鼠疫防控及研究重点实验室西宁811062

目的探讨布氏田鼠型鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌) 201株asp A和gln K的单核苷酸多态性位点(SNP)及fyu A三碱基缺失与小鼠毒力的关系。方法通过基于自杀载体p DS132同源重组的无痕突变技术,分别构建了鼠疫菌201株的asp A和gln K基因的SNP位... 详细信息

目的探讨布氏田鼠型鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌) 201株asp A和gln K的单核苷酸多态性位点(SNP)及fyu A三碱基缺失与小鼠毒力的关系。方法通过基于自杀载体p DS132同源重组的无痕突变技术,分别构建了鼠疫菌201株的asp A和gln K基因的SNP位点突变株(201-asp ATTG和201-gln KCCA)以及fyu A的GCA突变株(201-fyu AGCAdel)。随后采用腹股沟皮下注射方式对小鼠攻毒,通过生存曲线确定以上基因中的突变对小鼠毒力是否具有显著影响。结果生存曲线结果显示,201-asp ATTG和201-gln KCCA两株突变菌与野生型对小鼠毒力无明显差异; 201-fyu AGCAdel突变株在2周内不能对小鼠致死,与野生型毒力存在显著差异,且其质粒回补株对小鼠毒力恢复到野生型水平。结论该研究中所涉及的asp A和gln K的SNP突变不能使鼠疫菌201株对小鼠明显减毒,asp A和gln K的特定位点突变导致的蛋白活性差异可能与鼠疫菌201株对小鼠毒力无关,而fyu A的GCA缺失可导致鼠疫菌对小鼠的毒力明显下降,有必要对其内在机制进行深入研究。

关键词：耶尔森菌,鼠疫多态性,单核苷酸毒力突变

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2020-2021年度新型冠状病毒肺炎疫情发展趋势分析与应对

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疾病监测 2020年第12期35卷 1068-1072页

作者：郭德银江佳富宋宏彬秦天李振军张定梅黄森忠舒跃龙徐建青姜世勃郑涛田怀玉郝荣章徐建国中山大学医学院感染免疫中心广东广州518107 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军疾病预防控制中心北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中山大学公共卫生学院流行病学系广东广州510080 南开大学统计与数据科学学院公共卫生与健康研究院智英健康数据研究中心天津300071 中山大学公共卫生学院(深圳) 广东深圳510006 上海市公共卫生临床中心/复旦大学生物医学研究院上海201508 复旦大学基础医学院上海200032 军事科学院军事医学研究院北京100071 北京师范大学全球变化与公共健康研究中心北京100875 首都医科大学公共卫生学院北京100069 南开大学公共卫生和健康研究院天津300071

新型冠状病毒(新冠病毒)具有自然疫源性和流感病毒的流行特性,病毒复制快、细胞嗜性广、存活能力强,而且其无症状感染者普遍、传播隐蔽,病毒已经在人群适应,控制难度大。在新冠病毒疫苗发挥广泛保护效应之前,2020—2021年度全球疫情可... 详细信息

新型冠状病毒(新冠病毒)具有自然疫源性和流感病毒的流行特性,病毒复制快、细胞嗜性广、存活能力强,而且其无症状感染者普遍、传播隐蔽,病毒已经在人群适应,控制难度大。在新冠病毒疫苗发挥广泛保护效应之前,2020—2021年度全球疫情可能进一步恶化,我国仍然面临境外多渠道持续输入和局部暴发或疫情重现风险。因此,应进一步开展我国疫情高发区人群携带新冠病毒状况和相应环境中新冠病毒的监测;建立国家超级可移动新冠病毒检测网络实验室,能够执行超大规模检测任务;实施差异化疫苗接种策略并密切跟踪监测疫苗接种的效果和效率;应继续强化戴口罩、勤洗手、保距离、常开窗、少聚会等行之有效的公共卫生措施。新冠病毒疫情再一次警告大家,野生动物源性未知病原体所导致的新发传染病病原不断地出现已经成为"新常态",必须前瞻性系统开展未知微生物发现和反向病原学研究,主动防卫和应对未来新发传染病疫情。

关键词：新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒自然疫源性疾病无症状感染者抗体依赖性增强

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金黄色葡萄球菌肠毒素B精制免疫球蛋白对小鼠中毒模型的免疫救治效果研究

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生物技术通讯 2019年第6期30卷 756-761页

作者：韩慧李敏杨晓岚段跃强谷宏婧范铁炯李鑫杨鹏辉刘媛闫芳郑源强石艳春赵忠鹏内蒙古自治区分子生物学重点实验室内蒙古医科大学内蒙古呼和浩特010058 病原微生物生物安全国家重点实验室军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 上海赛伦生物技术股份有限公司上海201707 解放军总医院第五医学中心北京100039 山西农业大学动物科技学院山西太谷030800

目的:研制金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)精制免疫球蛋白,即马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品,为SEB中毒的救治提供候选药。方法:利用传统的发酵和纯化工艺制备天然SEB纯品,并建立小鼠实验动物模型;利用分子克隆和蛋白质纯化技术,克隆、表达... 详细信息

目的:研制金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)精制免疫球蛋白,即马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品,为SEB中毒的救治提供候选药。方法:利用传统的发酵和纯化工艺制备天然SEB纯品,并建立小鼠实验动物模型;利用分子克隆和蛋白质纯化技术,克隆、表达、纯化重组SEB,加入适量弗氏佐剂充分乳化,免疫马匹,测定免疫马匹血清中和抗体效价后采血,分离血清,按照成熟的生产工艺制备治疗性抗体成品;对成品进行安全性检测及免疫救治效果评价。结果:纯化的天然SEB经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度大于90%,对小鼠腹腔注射的半数致死量为0.5μg/kg;纯化的重组SEB表达量超过2 mg/mL,经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度大于90%,对小鼠腹腔注射的半数致死量为50μg/kg;免疫马匹血清中和抗体效价达2000 U/mL以上时,采血并制备F(ab′)2成品,经SDS-PAGE和HPLC法测定纯度在80%以上,中和抗体效价超过2500 U/mL;安全性符合现行《中国药典》要求;对SEB中毒动物模型有很好的免疫救治效果。结论:建立了SEB精制免疫球蛋白制品生产工艺,制备的成品符合现行《中国药典》要求,为SEB中毒的救治提供了候选药。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B 免疫球蛋白动物模型

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