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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第7期39卷 499-505页

作者：王月鹏李悄朱青杨裔郭彦周育森寇志华安徽医科大学北京微生物流行病研究所合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的比较MF59和铝佐剂在HIV-1多表位蛋白MEP1小鼠体内诱导的免疫应答的异同,确定一种能诱导高水平免疫应答的佐剂配方。方法将MEP1蛋白与MF59或铝佐剂制备成免疫原,肌肉注射BALB/c雌性小鼠,分别在初次免疫和三次免疫后10d分离血清和单... 详细信息

目的比较MF59和铝佐剂在HIV-1多表位蛋白MEP1小鼠体内诱导的免疫应答的异同,确定一种能诱导高水平免疫应答的佐剂配方。方法将MEP1蛋白与MF59或铝佐剂制备成免疫原,肌肉注射BALB/c雌性小鼠,分别在初次免疫和三次免疫后10d分离血清和单个脾细胞,通过间接ELISA检测小鼠血清特异性抗MEP1抗体及亚类,ELISPOT检测脾脏分泌IFN-γ及IL-4淋巴细胞数量,比较两种佐剂诱导的体液和细胞免疫应答的异同。结果单次免疫后,铝佐剂相较MF59能更快促进MEP1诱导早期的体液和细胞免疫应答;三次免疫后,铝佐剂和MF59在促进MEP1诱导Th2偏倚的体液免疫应答的同时,MF59促进MEP1诱导Th1/Th2平衡的细胞免疫应答。结论铝佐剂相较于MF59更适合作为HIV-1多表位蛋白MEP1的佐剂。

关键词： MF59 铝佐剂蛋白疫苗细胞因子抗体

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结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6融合基因DNA疫苗株的构建及免疫原性研究

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免疫学杂志 2020年第2期36卷 109-115页

作者：张真赵玲娜申梦王希良杨鹏辉包金风内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010059 中国人民解放军总医院第五医学中心北京100039 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取*** H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取*** H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65-Ag85B和PVAX1-Hsp65-ESAT6。重组质粒体外转染验证其表达后,免疫C57BL/6小鼠,检测特异性细胞免疫应答反应。结果Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株在体内外均能表达,Western blot结果显示,DNA疫苗株体外转染293T细胞,24 h可检测到特异性蛋白条带,48 h蛋白表达量达最高。小鼠体内实验表明,Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均可激发较强的免疫反应,可诱导机体产生分泌高水平TNF-α的Th型免疫应答,且Hsp65-Ag85B优于Hsp65-ESAT6。结论Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均具有较强的免疫原性,呈Th型细胞介导的免疫应答,推测Hsp65-Ag85B DNA疫苗的保护效力优于Hsp65-ESAT6,为新型结核DNA疫苗研制提供了实验依据。

关键词： DNA疫苗 Ag85B ESAT6 Hsp65 分枝杆菌

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细菌外膜蛋白A通用抗原表位预测及其抗体磁珠捕获病原菌效果的初步评价

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军事医学 2021年第5期45卷 336-339,353页

作者：王磊柯跃华栗业李怡璇杨瑞馥高波韩延平军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军32277部队新骝哈密839108 解放军疾病预防控制中心北京100071

目的利用革兰阴性细菌外膜蛋白A高度保守的特性,设计和制备可识别多种食源性革兰阴性细菌的免疫磁珠,并对该免疫磁珠的识别和富集效果进行评价。方法利用革兰阴性外膜蛋白A序列高度保守的特性,从国际生物基因数据库(NCBI)提取该蛋白的... 详细信息

目的利用革兰阴性细菌外膜蛋白A高度保守的特性,设计和制备可识别多种食源性革兰阴性细菌的免疫磁珠,并对该免疫磁珠的识别和富集效果进行评价。方法利用革兰阴性外膜蛋白A序列高度保守的特性,从国际生物基因数据库(NCBI)提取该蛋白的氨基酸序列进行同源比对;使用抗原表位预测工具"BepiPred"预测具有免疫原性的抗原表位;将预测的多肽序列分两组混合免疫大耳白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法对抗体进行评价,挑选出优质抗体偶联磁珠捕捉细菌,利用平板培养计数的方法检验抗体的有效性和广谱性。结果经间接ELISA筛选,制备的多抗可识别阪岐克洛诺杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157∶H7、弗氏志贺菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌6种常见食源性致病菌,识别灵敏度为25μg/ml;使用该抗体制备的500 nm羧基免疫磁珠对6种细菌的捕捉率为0.47%~2.03%。结论与传统的免疫磁珠相比较,该项目制备的多抗免疫磁珠具有广谱性的特点,可提高检验效率,是一种具有应用前景的检测思路。

关键词：革兰阴性细菌外膜蛋白A 免疫磁珠食源性致病菌快速检测

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ATP生物荧光法检测空气中细菌浓度的研究

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中国消毒学杂志 2020年第7期37卷 491-495页

作者：胡凌飞李娜张柯曹杰靳爱军李劲松军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究ATP生物荧光法检测气溶胶细菌浓度的方法,为其应用提供科学数据。方法采用人工气溶胶方法,对ATP生物荧光法检测不同试验菌人工气溶胶细菌浓度进行观察,同时与活菌计数法作比较。结果建立了粘质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃... 详细信息

目的研究ATP生物荧光法检测气溶胶细菌浓度的方法,为其应用提供科学数据。方法采用人工气溶胶方法,对ATP生物荧光法检测不同试验菌人工气溶胶细菌浓度进行观察,同时与活菌计数法作比较。结果建立了粘质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及其混合菌液浓度与ATP发光值的关系曲线,线性回归分析得出各曲线的R2值均>0.9,显示在103~109cfu/m L范围内细菌浓度与生物发光强度有明显的正相关性。混合菌液气溶胶的模拟试验检测结果显示,ATP生物荧光法和平板计数法在气溶胶浓度较高时有较好的相关性,R2值为0.8613。ATP生物荧光法检测结果受细菌气溶胶浓度、不同的采样器和采样方式等因素的影响。结论ATP生物荧光法快速检测空气中细菌浓度的方法具有可行性,但结果会受到诸多因素的影响,尚需要进一步研究解决。

关键词： ATP生物荧光法平板计数法细菌气溶胶细菌浓度

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恙虫病实验室诊断研究进展

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传染病信息 2021年第6期34卷 490-493页

作者：牛华熊小路辛德莉苏州大学基础医学与生物科学学院 215123 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室 100050

恙虫病是经恙螨叮咬传播,由恙虫病东方体感染引起的一种致命性自然疫源性疾病,以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征,主要流行于东亚和东南亚地区。恙虫病的临床症状不典型,极易造成误诊和漏诊。精确和快速的实验室诊断... 详细信息

恙虫病是经恙螨叮咬传播,由恙虫病东方体感染引起的一种致命性自然疫源性疾病,以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征,主要流行于东亚和东南亚地区。恙虫病的临床症状不典型,极易造成误诊和漏诊。精确和快速的实验室诊断对于恙虫病的确诊和治疗具有非常重要的意义。本文对恙虫病常用实验室诊断方法及近年来的研究进展进行综述。

关键词：恙虫病恙虫病东方体实验室诊断

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肺炎克雷伯菌质粒p1512-KPC的测序及比较基因组学分析

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微生物学报 2019年第2期59卷 349-363页

作者：蒋昭芳赵亚超李曼莉周冬生朱天川谭小艳童贻刚龙军南方医科大学珠江医院广东广州510630 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】对多重耐药的肺炎克雷伯菌1512中的质粒p1512-KPC进行测序及比较基因组学的分析。【方法】利用16S rRNA基因测序进行菌种鉴定,根据7对管家基因(gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB)对菌株进行多位点序列分型(Multilocus se... 详细信息

【目的】对多重耐药的肺炎克雷伯菌1512中的质粒p1512-KPC进行测序及比较基因组学的分析。【方法】利用16S rRNA基因测序进行菌种鉴定,根据7对管家基因(gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB)对菌株进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)。利用PCR进行耐药基因的筛查,通过接合转移实验及电转化实验将质粒转入受体菌大肠杆菌EC600。采用改良Carba NP法检测细菌碳青霉烯酶的活性以及类型,使用VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪检测菌株最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。最后通过高通量测序技术结合生物信息分析手段明确菌株1512及质粒p1512-KPC的耐药基因谱,并通过比较基因组方法对质粒p1512-KPC的基本结构、耐药基因遗传环境及移动元件等结构基因组学特征进行分析。【结果】菌株1512为产A类碳青霉烯酶的多重耐药肺炎克雷伯菌,MLST分型结果显示该菌为ST11型。经PCR筛查,菌株1512包含bla_(KPC-2)、dfrA1和sul1耐药基因,其中bla_(KPC-2)基因位于不可结合转移但电转成功的质粒p1512-KPC上。测序结果显示,质粒p1512-KPC长度为117.69 kb,同时包含IncFII型复制子和属于Rep_3家族但类型未知的复制子repB,并携带耐药基因bla_(KPC-2)、bla_(CTX-M-65)、bla_(TEM-1)及rmtB。其中bla_(KPC-2)、bla_(CTX-M-65)及bla_(TEM-1)分别存在于截短的Tn6296、Tn6367及截短的Tn2的基因环境中。【结论】携带bla_(KPC-2)、bla_(CTX-M-65)、bla_(TEM-1)及rmtB基因的质粒p1512-KPC介导了肺炎克雷伯菌1512对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药,并能引起相应耐药基因的水平传播。此外,本研究还对IncFII型复制子和Rep_3家族复制子repB共存的质粒进行了比较基因组分析,为该类型质粒的多样性和进化提供了更深入的理解。

关键词：肺炎克雷伯菌 p1512-KPC 碳青霉烯酶 blaKPC-2

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基于镧系高敏荧光的生物毒素现场快速检测方法的研究

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军事医学 2021年第7期45卷 537-542,547页

作者：刘军波金志颖白雪欣万伟杨浩李岩伟吴俊清章健高姗王景林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024 成都微瑞生物科技有限公司成都611730

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效... 详细信息

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法。其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测。3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5~50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B_(1)、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景。

关键词：蓖麻毒素 A型肉毒毒素产气荚膜梭菌ε毒素镧系荧光免疫层析生物安全

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创伤弧菌基因组学研究进展

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传染病信息 2020年第3期33卷 273-279页

作者：张嘉鑫康琳崔玉军王景林安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

创伤弧菌是人类三大致病弧菌之一,能够通过食源性传播或者伤口感染导致发病,近年来全球发病率逐步升高。随着新一代测序技术的发展,已有上百株创伤弧菌全基因组序列在国际公共数据库公布。这些数据为创伤弧菌基因组学研究提供了重要基础... 详细信息

创伤弧菌是人类三大致病弧菌之一,能够通过食源性传播或者伤口感染导致发病,近年来全球发病率逐步升高。随着新一代测序技术的发展,已有上百株创伤弧菌全基因组序列在国际公共数据库公布。这些数据为创伤弧菌基因组学研究提供了重要基础,并促进了对该病原菌遗传多样性、传播和致病机制的认识。本文从基因分型、种群结构和重要毒力因子3个方面对创伤弧菌基因组学研究进展进行归纳总结,以期为创伤弧菌感染、进化和防控研究提供借鉴。

关键词：创伤弧菌基因组种群结构毒力因子分子流行病学

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一株新型裂解K63荚膜型肺炎克雷伯菌的噬菌体分离鉴定和生物学特性研究及全基因组分析

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微生物学通报 2020年第1期47卷 210-221页

作者：高明明王灿李璞媛刘慧莹裴广倩范航张湘莉兰米志强童贻刚柏长青河北北方学院研究生部河北张家口075000 解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

[背景]噬菌体具有特定的杀菌能力,对生态和细菌的进化具有重要影响。近年来由于多重耐药细菌的全球出现,噬菌体疗法逐渐引起了人们的关注。[目的]对一株新型裂解K63荚膜型肺炎克雷伯菌的噬菌体vB_KpnP_IME308进行生物学特性研究、测序... 详细信息

[背景]噬菌体具有特定的杀菌能力,对生态和细菌的进化具有重要影响。近年来由于多重耐药细菌的全球出现,噬菌体疗法逐渐引起了人们的关注。[目的]对一株新型裂解K63荚膜型肺炎克雷伯菌的噬菌体vB_KpnP_IME308进行生物学特性研究、测序和比较基因组学的分析。[方法]以一株从临床分离到的肺炎克雷伯菌为宿主菌分离噬菌体,应用双层平板法进行噬菌体最佳感染复数(optimal multiplicity of infection)、一步生长曲线(one-step growth curve)、温度以及pH敏感性实验测定,纯化噬菌体并通过透射电镜观察噬菌体形态;应用标准的苯酚-氯仿提取方案提取噬菌体全基因组,使用Illumina MiSeq测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后对噬菌体全基因组序列进行组装、注释、进化和比较基因组学分析。[结果]分离到一株新型的肺炎克雷伯菌噬菌体,命名为vB_KpnP_IME308;其最佳感染复数为0.001,一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌的潜伏期约为20 min,裂解期约为80 min,平均裂解量330PFU/cell;噬菌体vB_KpnP_IME308在4-50℃和pH 5.0-10.0范围内稳定;电镜观察该噬菌体属于短尾噬菌体科(Podoviridae)。基因组测序结果表明,噬菌体基因组全长为43 091bp,(G+C)mol%含量为53.9%,(A+T)mol%含量为46.1%。BLASTn比对结果表明,该噬菌体与目前已知噬菌体基因组仅84%区域有相似性。噬菌体进化树结果表明该噬菌体属于Autographivirinae亚科的Drulisvirus属的成员。[结论]从医院污水中分离鉴定了一株新型的肺炎克雷伯菌噬菌体,表征并分析了噬菌体全基因组序列,这些结果均表明该噬菌体具有开发为抗肺炎克雷伯菌制剂的潜力,为噬菌体治疗多重耐药细菌感染奠定了基础。

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特性全基因组分析

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金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauH_IME522的分离鉴定及全基因组分析

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第三军医大学学报 2020年第3期42卷 229-240页

作者：高明明刘慧莹李璞媛张志华秦艳红黄勇崔玉军裴广倩童贻刚柏长青河北北方学院研究生部张家口075000 解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

目的从医院污水中分离到一株金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauH_IME522,对其进行分离鉴定、测序及进化和基因组学的分析。方法以一株从临床分离到的多重耐药的金黄色葡萄球菌为宿主菌分离噬菌体,应用双层琼脂平板法进行噬菌体最佳感染复数(op... 详细信息

目的从医院污水中分离到一株金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauH_IME522,对其进行分离鉴定、测序及进化和基因组学的分析。方法以一株从临床分离到的多重耐药的金黄色葡萄球菌为宿主菌分离噬菌体,应用双层琼脂平板法进行噬菌体最佳感染复数(optimal MOI)、一步生长曲线(one-step growth curve)实验,使用蔗糖密度梯度离心纯化病毒,并通过透射电镜观察噬菌体形态;应用SDS/蛋白酶裂解方案提取噬菌体全基因组,使用Illumina Miseq测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后对噬菌体全基因组序列进行组装、注释、进化和比较基因组学分析。结果分离到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,命名为vB_SauH_IME522;其最佳感染复数为0.01,一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌的潜伏期约为20 min,裂解期约为200 min,平均裂解量89 PFU/cell;电镜观察该噬菌体,噬菌体vB_SauH_IME522具有典型的二十面体结构和收缩的尾部,其头部直径为(70±1)nm,尾部长度为(135±2)nm。基因组测序结果表明,噬菌体基因组全长为140 246 bp,G+C含量为30.2%。基因组注释显示噬菌体vB_SauH_IME522含有223个蛋白编码基因、164个启动子、66个终止子、4个tRNAs及7个耐药相关位点。其中52个基因的编码产物有预测的功能,其余基因的编码产物均为功能未知的推定蛋白。系统发生分析表明,该噬菌体属于Twortvirinae亚科的Kayvirus属。结论烈性噬菌体vB_SauH_IME522为Twortvirinae亚科的新成员,具有较强的裂解能力和短的潜伏期。

关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性基因组分析

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