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中国人兽共患病学报 2019年第9期35卷 857-864页

作者：汤丽邵宗体段兴德江佳富贾娜张云何志海李玉琼刘正祥浦恩念陈星刘洪波蒋宝贵高子厚杜春红云南省地方病防治所大理671000 大理大学公共卫生学院大理671000 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解云南省小型兽类感染无形体的种类及其分布,以掌握该地区小型兽类携带无形体对人、畜健康的危害,为无形体病的防控提供科学依据。方法在云南省22个县(市)的130个采样点,捕获分属4目9科26属52种的小型兽类2 251只,取其脾脏组织提... 详细信息

目的了解云南省小型兽类感染无形体的种类及其分布,以掌握该地区小型兽类携带无形体对人、畜健康的危害,为无形体病的防控提供科学依据。方法在云南省22个县(市)的130个采样点,捕获分属4目9科26属52种的小型兽类2 251只,取其脾脏组织提取DNA后,运用无形体通用引物,巢式PCR检测无形体16S rRNA 660 bp部分片段。阳性产物测序后,通过序列比对及系统进化分析确定感染无形体种类,结合样本信息分析流行病学意义。结果共检出阳性样本27份,产物序列经比对为23份***,4份未分类无形体。总阳性率1.20%;阳性小兽分属3目6科7属12种,分别是:针尾鼹50.00%(1/2)、纹背鼩鼱12.50%(2/16)、珀氏长吻松鼠8.33%(1/12)、藏鼠兔5.66%(3/53)、白尾松田鼠5.41%(2/37)、西南绒鼠4.00%(2/50)、社鼠3.74%(4/107)、大足鼠3.57%(1/28)、斯氏家鼠2.20%(2/91)、大耳姬鼠1.85%(2/108)、中华姬鼠1.30%(4/308)和黄胸鼠0.69%(3/433),分布于5个县(市)。统计学分析表明,无形体的感染率雄性高于雌性,海拔>2 500 m捕获小兽感染率最高。不同生境和年龄的小兽感染率无差异。结论云南省部分县(市)的多种小型兽类携带***,给当地人群的健康和畜牧业的发展造成一定的威胁,人群和媒介蜱、其它宿主的感染和分布等情况值得进一步关注。

关键词：云南省小型兽类无形体调查

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细菌毒素-抗毒素系统的功能

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生物工程学报 2018年第8期34卷 1270-1278页

作者：何志利王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

毒素-抗毒素(Toxin-Antitoxin,TA)系统广泛存在于原核生物和古细菌的染色体和质粒中。此系统由2个共表达的基因组成,分别编码稳定的毒素蛋白和易降解的抗毒素,毒素通常发挥毒性作用抑制细菌生长,而抗毒素则可中和毒性,二者相互作用对细... 详细信息

毒素-抗毒素(Toxin-Antitoxin,TA)系统广泛存在于原核生物和古细菌的染色体和质粒中。此系统由2个共表达的基因组成,分别编码稳定的毒素蛋白和易降解的抗毒素,毒素通常发挥毒性作用抑制细菌生长,而抗毒素则可中和毒性,二者相互作用对细菌生长状态起精密调节作用。根据TA的组成和抗毒素的性质,目前已经发现有6型TA,这些TA系统在细菌中发挥的作用一直是近年来学者们研究的热点,文中对细菌TA的功能研究进展进行了综述。

关键词：毒素-抗毒素系统环境适应性持留态细胞生物被膜细菌毒力

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细菌自然转化的机制及影响因素

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生物工程学报 2018年第8期34卷 1297-1305页

作者：宁年智王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

水平基因转移对耐药基因传播、编码毒素基因质粒的扩散和毒力岛的转移等过程具有重要的生物学意义。自然转化是指具有感受态的细菌从外界摄取并整合裸露DNA,是水平基因转移的方式之一。细菌发生自然转化极大地促进了耐药基因在不同细菌... 详细信息

水平基因转移对耐药基因传播、编码毒素基因质粒的扩散和毒力岛的转移等过程具有重要的生物学意义。自然转化是指具有感受态的细菌从外界摄取并整合裸露DNA,是水平基因转移的方式之一。细菌发生自然转化极大地促进了耐药基因在不同细菌间的播散,导致细菌对抗生素耐药,给临床治疗带来极大的困难。许多细菌具备自然转化能力,但不同细菌自然转化过程存在着差异。细菌自然感受及转化的诱发及效率亦受到多种因素的影响。文中着重于阐述不同细菌的自然转化机制及其影响因素。

关键词：自然感受态自然转化 Ⅳ型菌毛耐药基因

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寨卡病毒与Ⅰ型干扰素反应相互作用研究进展

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科学通报 2018年第5期63卷 495-501页

作者：纪雪赵慧黄星耀李晓峰秦成峰广西医科大学研究生院南宁530021 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种主要通过蚊虫传播的RNA病毒,可引起新生儿小头畸形和成人格林-巴利综合征等严重疾病.目前,ZIKV已扩散至全球70多个国家和地区,对全球公众健康产生严重威胁.研究发现,ZIKV感染可激活包括Ⅰ型干扰素信号... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种主要通过蚊虫传播的RNA病毒,可引起新生儿小头畸形和成人格林-巴利综合征等严重疾病.目前,ZIKV已扩散至全球70多个国家和地区,对全球公众健康产生严重威胁.研究发现,ZIKV感染可激活包括Ⅰ型干扰素信号通路等在内的一系列抗病毒天然免疫反应,亦可通过多种机制阻断宿主的干扰素反应,借此逃避宿主天然免疫的监控.深入了解ZIKV与宿主干扰素反应相互作用不仅有助于研究ZIKV的致病机制,对开发ZIKV疫苗和研制抗ZIKV药物同样具有重要意义.本文就相关领域研究进展作一简要综述.

关键词： ZIKV Ⅰ型干扰素 JAK—STAT信号通路免疫逃逸

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两株从三带喙库蚊中分离的toti病毒变异株的分子特征

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寄生虫与医学昆虫学报 2020年第1期27卷 20-25页

作者：彭红红王媛媛代科赵秋敏左曙青童贻刚张久松安徽医科大学安徽合肥230000 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京软物质科学与工程高精尖创新中心北京100029

从上海捕获的三带喙库蚊中新分离到2株toti病毒,暂命名为Toti病毒ND3 (TOV_ND3)和Toti病毒FD17 (TOV_FD17)。利用高通量测序平台测定其全基因组序列。结果表明,TOV_ND3和FD17的基因组长度分别为7 612和7 611 bp,编码2个蛋白,包括1个衣... 详细信息

从上海捕获的三带喙库蚊中新分离到2株toti病毒,暂命名为Toti病毒ND3 (TOV_ND3)和Toti病毒FD17 (TOV_FD17)。利用高通量测序平台测定其全基因组序列。结果表明,TOV_ND3和FD17的基因组长度分别为7 612和7 611 bp,编码2个蛋白,包括1个衣壳蛋白(CP)和1个RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)。TOV_ND3的全基因组序列与Culex tritaeniorhynchus NJ2 (CTV_NJ2)的同源性最高,然而TOV_FD17与Omono river病毒AK4 (ORV-AK4)的同源性最高,分别为84. 6%和84. 9%,两株之间核苷酸同源性为74. 1%。系统发育分析表明,这两株新分离的病毒株属于Toti病毒科的变异株。

关键词： Toti病毒病毒分离高通量测序全基因组

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IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的结构基因组学分析

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微生物学通报 2019年第1期46卷 139-150页

作者：李曼莉王利君赵亚超蒋昭芳周冬生童贻刚赵宝华河北师范大学生命科学学院河北石家庄050024 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 清华大学附属北京清华长庚医院清华大学临床医学院北京102218

【背景】IncFII-FIA-FIB型质粒广泛存在于肠杆菌科细菌中,介导了许多耐药基因的水平转移,并导致细菌多重耐药问题日益严重。【目的】分析IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的基因组结构,并研究其介导大肠杆菌BTR株的耐药基因水平... 详细信息

【背景】IncFII-FIA-FIB型质粒广泛存在于肠杆菌科细菌中,介导了许多耐药基因的水平转移,并导致细菌多重耐药问题日益严重。【目的】分析IncFII-FIA-FIB型多重耐药质粒pBTR-CTXM的基因组结构,并研究其介导大肠杆菌BTR株的耐药基因水平转移机制。【方法】利用PCR进行耐药基因筛查;接合转移和电转化实验验证质粒pBTR-CTXM是否具备自主接合转移的特性;VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪测定相关菌株对抗生素的药物敏感性;构建MatePair文库并进行细菌全基因组高通量测序和质粒结构基因组学分析。【结果】菌株BTR是携带blaNDM-1、blaCTX-M-15、blaTEM、qnrD、qnrS1、mph(A)、erm(B)和tetA(B)等耐药基因的多重耐药大肠杆菌,其中blaCTX-M-15、mph(A)、erm(B)和tet A(B)等耐药基因均位于大小为144 939 bp的质粒p BTR-CTXM (GenBank登录号MF156697)上,该质粒可与菌株BTR内质粒pNDM-BTR接合共转移到受体菌大肠杆菌EC600中。pBTR-CTXM具备IncFII-FIA-FIB型质粒典型的骨架区结构,其多重耐药(Multidrug-resistant,MDR)区由新的复合型转座子Tn6492、Tn2残余、Tn10残余、ISEcp1-blaCTX-M-15-Δorf477转座单元和一些插入序列组成。【结论】pBTR-CTXM中新复合型转座子Tn6492与Tn10残余和ISEcp1-blaCTX-M-15-Δorf477转座单元共同介导大肠杆菌BTR株的多重耐药与耐药基因的水平传播。

关键词：大肠杆菌 IncFII-FIA-FIB型质粒 pBTR-CTXM Tn6492 多重耐药

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表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

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免疫学杂志 2019年第5期35卷 444-450页

作者：董锁花王立朋程晋霞杨晓岚孙芳段跃强王希良包金风杨鹏辉内蒙古医科大学基础医学院中国人民解放军66400部队医院普通外科军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室解放军总医院第五医学中心

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗... 详细信息

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA,与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu-muCTLA4。通过血凝试验、EID_(50)、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(MTS)细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果。结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为2~9～2^(10),且能够在鸡胚中稳定传代;EID_(50)为10^(-8)EID_(50)/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体,4天达到高峰值。MTS结果显示,rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力,呈现剂量依赖性。动物实验表明,重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积,提高动物存活率并延长存活时间。结论表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路。

关键词：溶瘤病毒免疫检查点抑制剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4

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淡色库蚊与骚扰库蚊触角嗅觉基因表达分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第4期37卷 453-457页

作者：周洁李春晓兰策介高剑刘钦梅孙爱娟赵彤言安徽医科大学合肥230000 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 浙江省疾病预防控制中心杭州310051 苏州市疾病预防控制中心苏州215004

目的了解淡色库蚊与骚扰库蚊触角中差异性表达的嗅觉基因,为揭示二者遗传分化特征提供参考依据。方法分别设置淡色库蚊吸血前、后,骚扰库蚊吸血前、后等4个实验组。每组共设4个生物学重复样品,每个样品取20只蚊虫触角。采用TRIzol法提... 详细信息

目的了解淡色库蚊与骚扰库蚊触角中差异性表达的嗅觉基因,为揭示二者遗传分化特征提供参考依据。方法分别设置淡色库蚊吸血前、后,骚扰库蚊吸血前、后等4个实验组。每组共设4个生物学重复样品,每个样品取20只蚊虫触角。采用TRIzol法提取各组样品总RNA,采用NEBNext Ultra^TMRNA■文库构建试剂盒构建文库。对转录组基因进行测序,通过FPKM值差异性分析,筛选淡色库蚊与骚扰库蚊分别在吸血前、后表达差异显著的嗅觉基因,并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证。结果淡色库蚊吸血前、后触角转录组共注释了50个气味结合蛋白(OBP)和31个气味受体(OR)基因,骚扰库蚊吸血前、后触角转录组共注释T36个OBP和12个OR。淡色库蚊吸血后较吸血前显著上调的OBP有4个,无显著下调的OBP。骚扰库蚊吸血后较吸血前显著上调和下调的OBP分别有3个。淡色库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有3个。骚扰库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有1个。qRT-PCR验证结果显示,淡色库蚊吸血后OBP17显著上调;骚扰库蚊吸血后OBP31、OBP44表达量显著上调,其中OBP44与测序结果一致,OBP31与测序结果相反。吸血前,骚扰库蚊0BP17显著高于淡色库蚊;吸血后,骚扰库蚊0BP31、OBP44显著高于淡色库蚊,OBP99a显著低于淡色库蚊。骚扰库蚊吸血后0R31、OR65、CPIJ001069表达量均显著上调,其中OR65和CPU001069表达量显著高于淡色库蚊(P<0.05)。淡色库蚊吸血后无显著变化的OR基因。结论淡色库蚊与骚扰库蚊的嗅觉基因OBP和OR表现出了进化分化,OBP17、0BP44可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。0R31、OR65、CPIJ001069可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。

关键词：淡色库蚊骚扰库蚊高通量分析技术嗅觉基因

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利用线粒体COI基因重建伊蚊族(双翅目:蚊科)的系统发育关系

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寄生虫与医学昆虫学报 2019年第2期26卷 69-79页

作者：王刚李春晓郭晓霞赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 杭州海关杭州310007

本研究利用线粒体细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(COI基因)片段对伊蚊族117个蚊种进行了系统发育关系的研究。分别使用简约法、似然法以及贝叶斯法重建了系统发育树,并用Shimodaira-Hasegawa检验法从3个系统发育树中选择出最佳基因树。与近年... 详细信息

本研究利用线粒体细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(COI基因)片段对伊蚊族117个蚊种进行了系统发育关系的研究。分别使用简约法、似然法以及贝叶斯法重建了系统发育树,并用Shimodaira-Hasegawa检验法从3个系统发育树中选择出最佳基因树。与近年来根据形态特征对伊蚊族重新分类的研究相比,本研究中的结果显示,支持伊蚊族新分类研究结果中的阿蚊属阿蚊亚属、Bothaella属、Collessius属Alloeomyia亚属、领蚊属Jarnellius属,骚扰蚊属Culicelsa和Woodius亚属、’Ochlerotatus’、覆蚊属Heteraspidion亚属的单系群地位。然而,并不支持阿蚊属、Downsiomyia属、Hulecoeteomyia属、骚扰蚊属Rusticoidus亚属、Phagomyia属、Psorophora属和覆蚊属的单系群地位。另外,分子数据显示骚扰蚊属中的部分成员较为原始,并且Ochlerotatus theobaldi显示出与其他所有蚊种的姐妹群关系;骚扰蚊属和覆蚊属为并系群。

关键词：蚊虫伊蚊族系统发育分类线粒体COI基因

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1株高毒力型肺炎克雷伯菌临床分离株毒力及耐药性分析

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传染病信息 2020年第3期33卷 220-224页

作者：王灿高明明李璞媛苑鑫牛文凯刘慧莹方云米志强柏长青安徽医科大学附属阜阳医院呼吸内科 236000 中国人民解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对1株临床分离的高毒力型肺炎克雷伯菌菌株进行毒力基因及耐药基因分析,为临床复杂肺炎克雷伯菌感染的诊断及抗生素使用提供参考。方法首先使用PCR方法对该菌株进行血清学分型、毒力基因和耐药基因检测,然后利用二代和三代高通量测... 详细信息

目的对1株临床分离的高毒力型肺炎克雷伯菌菌株进行毒力基因及耐药基因分析,为临床复杂肺炎克雷伯菌感染的诊断及抗生素使用提供参考。方法首先使用PCR方法对该菌株进行血清学分型、毒力基因和耐药基因检测,然后利用二代和三代高通量测序平台对该菌株进行全基因组测序和序列拼接,应用生物信息学方法全面分析该菌株毒力基因及耐药基因。结果该菌株血清型为K1型,采用PCR方法发现该菌株携带wabG、uge、kfuBC、aerobactin、rmpA、magA和fimH 7个毒力基因及超广谱β-内酰胺酶耐药基因(基因型为SHV型)。高通量测序进一步发现该菌株的基因组还携带clbB、iroC和rffG 3个毒力基因。结论该肺炎克雷伯菌临床分离株血清型为K1,除了携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因外,还含有多种毒力基因,增加了治疗难度。全面分析感染菌株携带的毒力基因和耐药基因,有针对性地选择抗生素,可提高抗感染治疗的效率,减少并发症的发生。

关键词：肺炎克雷伯菌全基因组测序毒力基因耐药基因血清型

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