检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2023年第12期47卷 907-912页

作者：谭玲朱晨思王保刚李涛王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建B型肉毒毒素轻链(BoNT/B,BLC)荧光表达细胞模型,并用于小分子化合物效应评价。方法将BLC基因导入荧光表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒,并将其转染至神经细胞系Neuro-2a细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察细胞内BLC-EGFP蛋白... 详细信息

目的构建B型肉毒毒素轻链(BoNT/B,BLC)荧光表达细胞模型,并用于小分子化合物效应评价。方法将BLC基因导入荧光表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒,并将其转染至神经细胞系Neuro-2a细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察细胞内BLC-EGFP蛋白荧光表达水平,利用Western印迹法检测细胞中BLC-EGFP的酶切活性和稳定性,进一步利用该模型评价SRC激酶抑制剂KX2-391对BLC-EGFP蛋白胞内稳定性的影响。结果成功构建重组表达质粒pEGFP-N1-BLC。质粒转染后,BCL-EGFP蛋白在Neuro-2a细胞中的表达水平随时间逐渐增加并具有酶切胞内底物囊泡相关蛋白-2(VAMP-2)的活性;质粒转染12 h后加入CHX终止蛋白合成,BLC-EGFP的胞内水平在72 h内无显著变化;加入KX2-391作用24 h后,可显著促进BLC-EGFP蛋白的胞内降解。结论成功建立B型肉毒毒素轻链荧光表达细胞模型,为后续B型肉毒毒素轻链胞内持留机制研究和胞内解毒剂筛选提供了技术储备。

关键词： B型肉毒毒素轻链基因重组重组荧光质粒 Neuro-2a细胞

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肠致病性大肠杆菌效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性及泛素链连接方式的鉴定

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军事医学 2023年第3期47卷 182-187页

作者：黄炎玉李崭陈芳红李涛王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的鉴定肠致病性大肠杆菌(EPEC)效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性,检测其催化形成的泛素链的连接方式。方法构建原核表达质粒,转化感受态细胞,表达纯化E2348C-1040蛋白质。通过体外泛素化实验鉴定其泛素连接酶活性,利用泛素赖氨酸位... 详细信息

目的鉴定肠致病性大肠杆菌(EPEC)效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性,检测其催化形成的泛素链的连接方式。方法构建原核表达质粒,转化感受态细胞,表达纯化E2348C-1040蛋白质。通过体外泛素化实验鉴定其泛素连接酶活性,利用泛素赖氨酸位点突变蛋白结合Western印迹实验检测该分子催化形成的泛素链的连接位点。结果成功构建原核表达质粒,获得纯度大于85%、浓度约为0.5 mg/ml的E2348C-1040蛋白质。分子水平的酶活实验结果表明E2348C-1040分子具有泛素连接酶活性,能催化形成不依赖于赖氨酸的泛素链。通过构建真核表达质粒转染HEK-293T细胞,发现E2348C-1040分子可在宿主细胞中催化形成甲硫氨酸(methionine 1,M1)连接的线性泛素链。结论EPEC效应因子E2348C-1040具有泛素连接酶活性,能催化泛素形成M1连接的线性泛素链。这一发现将为揭示效应因子E2348C-1040在宿主细胞内的作用机制提供研究线索。

关键词：肠致病性大肠杆菌效应因子泛素化泛素连接酶

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高毒力肺炎克雷伯菌两种金黄地鼠呼吸道感染模型比较研究

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军事医学 2024年第1期48卷 30-35页

作者：张之珺张丽丽吕蒙周冬生杨文慧高波军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所北京100850

目的建立高毒力肺炎克雷伯菌经气溶胶肺递送和滴鼻感染金黄地鼠动物模型,并对比两种模型的构建效果。方法选取4~5周龄雄性金黄地鼠,经气溶胶肺递送和滴鼻两种途径攻毒高毒力肺炎克雷伯菌NTUHK2044,记录金黄地鼠攻毒后14 d的生存状况,计... 详细信息

目的建立高毒力肺炎克雷伯菌经气溶胶肺递送和滴鼻感染金黄地鼠动物模型,并对比两种模型的构建效果。方法选取4~5周龄雄性金黄地鼠,经气溶胶肺递送和滴鼻两种途径攻毒高毒力肺炎克雷伯菌NTUHK2044,记录金黄地鼠攻毒后14 d的生存状况,计算两种途径的半数致死量、存活率,并对呼吸道沉积分布、肺部细菌载量及组织病理进行检测。结果气溶胶肺递送途径攻毒引起金黄地鼠半数死亡剂量(3×10^(4)CFU)低于滴鼻途径(7×10^(5)CFU)。4×10^(6)CFU高毒力肺炎克雷伯菌以气溶胶肺递送途径感染金黄地鼠后,96.46%沉积在肺部并成功定植,主要引起大叶性肺炎,4 d内动物全部死亡;而同等剂量菌液滴鼻后95.62%沉积在口鼻部,随后下移至气管定植,主要引起支气管肺炎,病变程度相对较轻,细菌更易被机体清除,14 d存活率为70%。结论细菌呼吸道感染造模效果受攻毒途径影响,高毒力肺炎克雷伯菌经气溶胶肺递送攻毒主要引起病变严重的大叶性肺炎,滴鼻则主要引起病变较轻的支气管肺炎。上述两种动物模型的成功建立可为肺炎克雷伯菌致病机制研究和药效评价提供关键支撑。

关键词：高毒力肺炎克雷伯菌气溶胶金黄地鼠动物模型

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痘苗病毒蛋白D8纳米抗体的原核表达及结合活性分析

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1728-1734页

作者：田婧婧杨晓岚李涛王慧范瑞文山西农业大学动物医学学院山西太谷030801 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

利用SUMO标签制备痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)蛋白D8的纳米抗体,并分析其与抗原是否具有结合活性。设计并合成序列,构建原核表达质粒pKMD-SUMO-D8,将其转化大肠杆菌(Escherichia coli,***)BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达;纯化带有Hi... 详细信息

利用SUMO标签制备痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)蛋白D8的纳米抗体,并分析其与抗原是否具有结合活性。设计并合成序列,构建原核表达质粒pKMD-SUMO-D8,将其转化大肠杆菌(Escherichia coli,***)BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达;纯化带有His标签和SUMO标签的抗体Anti-SUMO-D8,之后利用SUMO蛋白酶切除His标签和SUMO标签,进一步获得Anti-D8;最后,应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及间接免疫荧光试验(IFA)对其结合活性进行检测并分析。结果显示,成功构建了原核表达质粒pKMD-SUMO-D8和重组菌株,在30℃条件下,终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导表达菌株4 h时,Anti-SUMO-D8表达量最佳;获得了高纯度的Anti-SUMO-D8和Anti-D8纳米抗体;间接ELISA结果显示,Anti-SUMO-D8和Anti-D8与抗原均具有结合活性;在相同条件下,Anti-D8与VACV及E8L的结合活性高于Anti-SUMO-D8。间接IFA结果显示,VACV侵染48 h后,试验组部分细胞核在荧光显微镜下可见绿色荧光。利用SUMO标签可高效制备VACV蛋白D8的纳米抗体,且制备的纳米抗体具有一定的结合活性。本研究结果为纳米抗体的制备提供了新思路,也为深入研究VACV蛋白D8纳米抗体的生物学功能奠定了基础。

关键词：痘苗病毒纳米抗体 SUMO 结合活性

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基于同源重组原理快速验证fim家族基因簇对鲍曼不动杆菌蹭动的影响

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安徽医科大学学报 2024年第1期59卷 8-14页

作者：孙千姿宁年智王慧安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的旨在利用含有抗生素耐药盒的线性PCR片段对鲍曼不动杆菌靶基因片段进行同源重组替换,实现基因的快速敲除及功能验证。方法以鲍曼不动杆菌Ab4294菌株为研究对象,PCR分别扩增fim基因簇(全长4980 bp)上游901 bp、下游1028 bp的序列作... 详细信息

目的旨在利用含有抗生素耐药盒的线性PCR片段对鲍曼不动杆菌靶基因片段进行同源重组替换,实现基因的快速敲除及功能验证。方法以鲍曼不动杆菌Ab4294菌株为研究对象,PCR分别扩增fim基因簇(全长4980 bp)上游901 bp、下游1028 bp的序列作为重组的同源臂;从pUC57质粒中扩增获得卡那霉素抗生素耐药盒(KanR);利用重叠延伸PCR技术将上述3个片段连接,并将连接片段转化至鲍曼不动杆菌Ab4294中,筛选获得基因缺失突变株,构建质粒回补株,对所得菌株进行表型鉴定,探究fim基因簇的功能。结果利用含有抗生素耐药盒的线性PCR片段同源替换的方法成功构建了fim基因簇缺失的鲍曼不动杆菌Ab4294突变菌株;缺失菌株与野生株相比生长速率无明显差异,蹭动运动能力明显下降,回补该基因簇后表型恢复。结论利用含有抗性耐药盒的线性PCR片段同源替换的方法成功敲除鲍曼不动杆菌Ab4294的fim家族基因簇,该基因簇编码产物参与鲍曼不动杆菌的蹭动运动。

关键词：鲍曼不动杆菌基因敲除 fim基因簇蹭动运动

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发热伴血小板减少综合征病毒微基因组模型的构建与应用

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病毒学报 2023年第4期39卷 1017-1025页

作者：李庆云王红宋亚彬徐力昆张东娜王保刚于欢欢贝祝春王慧军事科学院军、事医学研究院、微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 联勤保障部队第九八五医院太原030001

发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)是一种新发蜱传布尼亚病毒,人群普遍易感,病死率高,目前没有针对SFTSV感染的特异性疫苗和治疗药物。为开发针对它的研究方法和工具,本研究... 详细信息

发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)是一种新发蜱传布尼亚病毒,人群普遍易感,病死率高,目前没有针对SFTSV感染的特异性疫苗和治疗药物。为开发针对它的研究方法和工具,本研究用反向遗传学方法构建了基于SFTSV S片段非编码区的微基因组模型,并利用该模型验证了广谱RNA病毒RdRp抑制剂,法匹拉韦(Favipiravir,T⁃705)的活性。在表达报告基因Gluc的微基因组模型中,T⁃705表现出显著的抑制活性(IC_(50)=3.17μmol/L),且具有良好的剂量相关性(r^(2)=0.95),证明了该微基因组模型用于SFTSV RdRp抑制剂筛选的可行性。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 微基因组模型反向遗传学 RdRp抑制剂

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湿地病毒糖蛋白单克隆抗体的筛选及有效性研究

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中国药学杂志 2025年

作者：任红英王西王甜甜黎浩吴军刘波军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室北京微生物与流行病学研究所病原与生物安全国家重点实验室安徽医科大学公共卫生学院

目的抗体是治疗病毒感染的重要手段之一，本研究针对正内罗病毒属湿地病毒表面Gc糖蛋白筛选制备特异性单克隆中和抗体。方法通过构建湿地病毒表面糖蛋白Gc重组表达载体，Gc抗原免疫小鼠后提取脾脏总RNA，构建鼠源Fab（Antigenbindingf... 详细信息

目的抗体是治疗病毒感染的重要手段之一，本研究针对正内罗病毒属湿地病毒表面Gc糖蛋白筛选制备特异性单克隆中和抗体。方法通过构建湿地病毒表面糖蛋白Gc重组表达载体，Gc抗原免疫小鼠后提取脾脏总RNA，构建鼠源Fab（Antigenbindingfragments，Fab）抗体库。通过噬菌体展示技术筛选针对抗原Gc的Fab抗体。筛选成功后，对筛选出的Fab抗体选择人源hIgG1重链亚型进行抗体全长构建，并通过双质粒转染系统在ExpiCHO细胞中进行表达。通过酶联免疫吸附试验检测抗体与Gc抗原的结合活性，并利用免疫空斑试验对抗体的有效性进行初步评估。结果构建了库容量为3.33×108cfu的Fab噬菌体抗体库，筛选出两株抗体A1、A2且抗体重链存在N-糖基化修饰。结合和中和活性检测结果显示A1、A2抗体的EC50分别为0.728nmol/L与0.034nmol/L，均具有一定的中和活性，可抑制病毒对细胞的杀伤。A2抗体从结合能力、中和能力方面均优于A1抗体。结论本研究成功制备了湿地病毒Gc糖蛋白的特异性单克隆抗体，为探究湿地病毒的防治方法奠定了基础并提供科学依据。

关键词：湿地病毒 Gc抗原单克隆抗体

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利用基因线路构建神经网络实现神经拟态计算

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科学通报 2021年第31期66卷 3992-4002页

作者：杨姗刘芮存刘拓宇庄滢潭李金玉滕越军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

随着大数据时代的到来,现有计算体系限制了人工智能与类脑计算等新技术的发展.基于人工神经网络的神经拟态计算则提供了潜在解决方案,而具备低能耗并行化等优势的生物计算对其研究至关重要,其中基因线路将是构造人工神经网络的关键.本... 详细信息

随着大数据时代的到来,现有计算体系限制了人工智能与类脑计算等新技术的发展.基于人工神经网络的神经拟态计算则提供了潜在解决方案,而具备低能耗并行化等优势的生物计算对其研究至关重要,其中基因线路将是构造人工神经网络的关键.本研究利用生物元件构建设计了人工神经网络,并实现了线性分类、非线性分类以及图案分类等神经拟态计算应用,充分利用生物元件的特性,模拟神经网络中神经元的连接关系,根据生物元件在基因线路中产生不同响应作为元件选择标准,构建基因线路实现不同功能的神经拟态计算.本研究提出通过工程化基因线路构建人工神经网络实现神经拟态计算,由此集成的分子计算系统有望应用于人工智能芯片的制造,并进一步广泛应用于类脑计算、脑机接口及国防建设等领域.

关键词：神经拟态计算人工神经网络 DNA计算基因线路合成生物学

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先天性寨卡综合征及其致病机制研究进展

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科学通报 2021年第31期66卷 3937-3943页

作者：贺梦娇秦成峰李晓峰军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

寨卡病毒起初一直被看作传统的虫媒病毒,在其发现后的60年时间里仅导致零星散发病例而一直未受重视.但在2015年南美洲暴发的寨卡疫情中发现,该病毒也能经性传播.更令人震惊的是,其感染孕妇后可导致大量的以新生儿小头畸形、脑膜炎和视... 详细信息

寨卡病毒起初一直被看作传统的虫媒病毒,在其发现后的60年时间里仅导致零星散发病例而一直未受重视.但在2015年南美洲暴发的寨卡疫情中发现,该病毒也能经性传播.更令人震惊的是,其感染孕妇后可导致大量的以新生儿小头畸形、脑膜炎和视力障碍为特征的先天性寨卡综合征病例,引发全球高度关注.世界卫生组织也因此宣布此次寨卡疫情为国际关注的突发公共卫生事件.疫情暴发以来,全球科学家通力合作,对先天性寨卡综合征的临床表型、动物模型和致病机制等开展了系统研究,不仅极大加深了我们对该疾病的认识,同时为研发有效的抗病毒手段提供了科学依据和研究工具.本文主要对先天性寨卡综合征及其致病机制领域的重要进展作了综述,并对未来的研究重点作了展望.

关键词：寨卡病毒先天性寨卡综合征小头畸形致病机制

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基于生物分子的神经拟态计算研究进展

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科学通报 2021年第31期66卷 3944-3951页

作者：滕越杨姗刘芮存军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

随着大数据、云计算和人工智能等技术为代表的计算新时代的到来,以构建人工神经网络为基础的神经拟态计算因具有低能耗、自适应学习和高并行计算等优点成为研究热点.生物分子计算伴随着合成生物学的兴起而不断发展, DNA等纳米材料不但... 详细信息

随着大数据、云计算和人工智能等技术为代表的计算新时代的到来,以构建人工神经网络为基础的神经拟态计算因具有低能耗、自适应学习和高并行计算等优点成为研究热点.生物分子计算伴随着合成生物学的兴起而不断发展, DNA等纳米材料不但可用于逻辑运算,还可以构造神经网络,并从训练数据中进行学习,为在分子层面实现神经拟态计算提供了可能.本文概述了神经拟态计算的基本原理,总结了DNA计算的研究进展,介绍了基于DNA计算的神经拟态计算,讨论了其发展所面临的挑战.基于生物材料构造人工神经网络是神经拟态计算迈向分子计算层面的重要一步,而由此集成的人工智能芯片则有望广泛应用于航空航天、信息安全及国防建设等领域.

关键词：神经拟态计算神经网络合成生物学 DNA计算人工智能

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