检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2017年第5期41卷 373-376页

作者：张义全方海红刘磊黄新祥杨瑞馥周冬生杨慧盈军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的研究鼠疫耶尔森菌PhoP/PhoQ在不同培养条件下的自调控关系。方法 PCR扩增YPO1635启动子区DNA序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,构建LacZ重组质粒,进而将该重组质粒转入鼠疫菌野生株(WT)和phoP突变株(ΔphoP)中,通过... 详细信息

目的研究鼠疫耶尔森菌PhoP/PhoQ在不同培养条件下的自调控关系。方法 PCR扩增YPO1635启动子区DNA序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,构建LacZ重组质粒,进而将该重组质粒转入鼠疫菌野生株(WT)和phoP突变株(ΔphoP)中,通过测定二者中β-半乳糖苷酶活性差异来判定PhoP对YPO1635的调控关系。提取WT和ΔphoP的总RNA,采用引物延伸实验研究phoP的转录起始位点,并根据产物的丰度判断PhoP对phoP的调控关系。结果 LacZ结果表明,在低Mg^(2+)TMH和BHI培养基中,PhoP能激活YPO1635的转录,而在高Mg^(2+)TMH中,PhoP对YPO1635的转录无调控作用。引物延伸结果显示,phoP有两个转录起始位点G(-90)和A(-118)(分别记为P1和P2,翻译起始位点为+1),在低Mg^(2+)TMH中,PhoP能激活P1的转录,而对P2无调控作用;在高Mg^(2+)TMH中,PhoP对二者均无调控作用;在BHI中,PhoP对二者的转录均具抑制作用。结论PhoP/PhoQ的自调控关系随周围环境的变化而表现出不同的模式,这有利于鼠疫菌快速适应外界生存环境的改变。

关键词：鼠疫耶尔森菌 YPO1635 phoP 调控

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携带圣路易斯脑炎病毒特异基因片段的重组假病毒颗粒的构建与鉴定

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军事医学 2017年第3期41卷 194-198页

作者：张娜娜邓永强年庆功康晓平杨银辉秦成峰广西医科大学南宁530000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达... 详细信息

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达,三氯甲烷法纯化后利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态。通过DNaseⅠ和RNase A双酶消化实验评价重组假病毒颗粒的核酸酶耐受性,并结合温度敏感性实验分析假病毒颗粒中核酸片段的稳定性。利用荧光定量RT-PCR法对该假病毒颗粒进行验证。结果 PCR扩增和测序分析显示,pr M基因片段正确克隆至载体p SE380-MS2。经大肠杆菌表达可形成直径约为25 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。核酸酶消化和温度敏感性实验表明假病毒样颗粒包装的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃条件下存放20 d仍保持稳定。荧光定量RT-PCR检测该假病毒颗粒检测限可达1.8×103拷贝/ml,且与同属的其他病毒无交叉反应。结论成功构建了含有SLEV prM基因片段的假病毒颗粒,具有良好的核酸酶耐受性和稳定性,可作为核酸阳性质控品对核酸提取与检测过程进行全程监控。

关键词：圣路易斯脑炎病毒假病毒阳性质控品

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鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的构建

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军事医学 2017年第10期41卷 800-804页

作者：高肖芳刘子中李文亮王红朵杨瑞馥韩延平安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测... 详细信息

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测了目的小RNA的存在、大小以及转录起始位点等,将目的小RNA的全长导入到改造后的质粒中并构建小RNA的过表达菌株。结果与结论成功构建了小RNA sR01、sR02、sR03、HmsA 4株缺失株以及小RNA MicF、HmsA、CpxQ 3株过表达菌株。建立了基于λ-Red同源重组、100 nt以内短片段小RNA敲除方法和基于定点突变试剂盒改造质粒的小RNA过表达菌株构建方法。

关键词：鼠疫菌小RNA λ-Red同源重组过表达

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基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法

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军事医学 2017年第8期41卷 689-693页

作者：吴灿军律清宇郝淮杰赵成娜郑玉玲姜永强安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素... 详细信息

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法。用该法检测PCT重组抗原,通过Sigma Plot分析该法的最低检测限。结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml。结论铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度。

关键词：降钙素原时间分辨荧光法铕离子荧光微球磁珠均相检测

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小RNA对细菌生物膜形成的调控研究进展

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军事医学 2017年第6期41卷 530-533,542页

作者：高肖芳刘子中李文亮杨瑞馥韩延平安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即... 详细信息

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即生物膜,其主要由蛋白质、多糖和DNA组成。最新研究表明,小RNA在调控细菌生物膜形成的系统中发挥着重要的作用。小RNA通过与靶标mRNA碱基配对或与调节蛋白相互作用,在细菌生物膜形成中发挥调控作用。该文综述了小RNA对细菌生物膜形成的调控机制和途径,阐述了3种经典的小RNA调控细菌生物膜形成的模型,以及小RNA调控对细菌生物膜形成的研究现状和发展方向。

关键词：小RNA 生物膜 c-di-GMP

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全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱经卵传播新塔拉塞维奇立克次体的检测研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2017年第1期24卷 19-24页

作者：魏然江佳富蒋宝贵常巧呈刘洪波付雪曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔... 详细信息

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔拉塞维奇立克次体的感染情况，从而研究新塔拉塞维奇立克次体在蜱生活周期中的传递规律。共采集牛寄生饱血雌蜱91只，其中全沟硬蜱14只，森林革蜱55只，嗜群血蜱24只。新塔拉塞维奇立克次体感染率为85．71％，5．45％，12．50％。卵的最低感染率分别为全沟硬蜱（2％）、森林革蜱（1．3％）、嗜群血蜱（1．1％），幼蜱的最低感染率分别为全沟硬蜱（5％）、森林革蜱（1．7％）、嗜群血蜱（2．2％）。且3种蜱雌蜱、卵、幼虫均检测到的新塔拉塞维奇立克次体，序列比对一致。感染的幼蜱均可通过叮咬使小鼠感染，三种蜱都能经卵传播新塔拉塞维奇立克次体。全沟硬蜱感染率高可能是东北林区新塔拉塞维奇立克次体的主要媒介蜱。

关键词：新塔拉塞维奇立克次体实验经卵传播全沟硬蜱森林革蜱嗜群血蜱

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衣原体致病机制研究进展

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中华医院感染学杂志 2017年第5期27卷 1193-1196页

作者：李鹏张琪苗晋华宋立华解放军264医院检验科山西太原030001 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

衣原体是一种专性胞内寄生的病原微生物,种间组织嗜性有差异,有些还是人兽共患病病原菌;其感染部位广泛、途径多,临床以沙眼、肺炎和泌尿生殖道感染多见;鹦鹉热衣原体还曾作为经典的生物战剂;衣原体由于胞内寄生,致病机制复杂,本文从三... 详细信息

衣原体是一种专性胞内寄生的病原微生物,种间组织嗜性有差异,有些还是人兽共患病病原菌;其感染部位广泛、途径多,临床以沙眼、肺炎和泌尿生殖道感染多见;鹦鹉热衣原体还曾作为经典的生物战剂;衣原体由于胞内寄生,致病机制复杂,本文从三型分泌系统、衣原体质粒、脂多糖、新发现毒力因子CT135和CPAF蛋白这五个方面简要综述了衣原体的致病机制,提出以鹦鹉热衣原体为模型研究衣原体属致病机制的优越性,为进一步深入分析衣原体的致病机制提供参考。

关键词：衣原体致病机制质粒三型分泌系统 CT135基因

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青海藏区B型沙眼衣原体的分离培养与鉴定

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微生物学通报 2017年第6期44卷 1444-1450页

作者：鲁辛辛冯乐于永慧罗声栋孙志会王涛端青王宁利宋立华首都医科大学附属北京同仁医院北京100005 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 北京市眼科研究所北京100005

【目的】对青海藏区沙眼患者标本进行沙眼衣原体分离培养与鉴定。【方法】分别采集患者的单眼结膜和结膜囊拭子标本至1 mL样本保护培养基中。取50μL样本采用离心法感染BGM细胞,37°C培养72 h,连续传代3次,相差显微镜观察衣原体包... 详细信息

【目的】对青海藏区沙眼患者标本进行沙眼衣原体分离培养与鉴定。【方法】分别采集患者的单眼结膜和结膜囊拭子标本至1 mL样本保护培养基中。取50μL样本采用离心法感染BGM细胞,37°C培养72 h,连续传代3次,相差显微镜观察衣原体包涵体。对临床样本和分离株分别进行主要外膜蛋白基因ompA序列分析。【结果】共采集了45例活动性沙眼患者的115份临床样本,其中54份样本为ompA PCR阳性,15份样本为沙眼衣原体培养阳性。ompA分析发现,青海藏区沙眼衣原体有3个不同的同源ompA变异株,均为基因B型,都包含有一个泌尿生殖道型沙眼衣原体特有密码子。分离株QH111L和QH111R分别来自编号111患者的左眼和右眼样本,它们ompA基因的可变区有一个非同义碱基差异。该碱基变异仅存在于111号患者的左眼样本中,说明QH111L可能是新出现的ompA突变体。【结论】青海藏区的眼型沙眼衣原体流行株为基因B型,至少存在3个不同的ompA变异株。从青海藏区分离培养了15株眼型沙眼衣原体,发现同一患者的左右眼样本中的沙眼衣原体有不同ompA。本研究为研制沙眼疫苗和诊断试剂奠定了基础,也将有助于理解沙眼的进化和传播。

关键词：沙眼衣原体沙眼进化 ompA

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云南西部地区家畜动物感染巴贝虫的分子流行病学调查

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中国人兽共患病学报 2017年第12期33卷 1125-1130页

作者：黄涛华高子厚蒋宝贵赵文红苏超贾娜张青江佳富杜春红云南省地方病防治所大理671000 大理大学公共卫生学院大理671000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解云南省西部地区家畜动物感染巴贝虫的状况,为制定防治措施提供依据。方法在云南省西部地区12个县(市)采集家畜动物抗凝血液1 073份(牛血274份、羊血395份、犬血354份,马血33份,驴血17份)。提取基因组DNA,运用PCR检测巴贝虫18SrR... 详细信息

目的了解云南省西部地区家畜动物感染巴贝虫的状况,为制定防治措施提供依据。方法在云南省西部地区12个县(市)采集家畜动物抗凝血液1 073份(牛血274份、羊血395份、犬血354份,马血33份,驴血17份)。提取基因组DNA,运用PCR检测巴贝虫18SrRNA 1 600bp长片段,通过基因序列比对及系统进化分析进行巴贝虫定种。结果共检出巴贝虫阳性样本50份,分属5种巴贝虫,总阳性率4.66%。其中牛血中检出11份阳性(4.01%),4份为牛巴贝虫(***),7份为双芽巴贝虫(***)。羊血中检出38份阳性(9.62%),37份为奥氏巴贝虫样寄生虫(***-like parasites),1份为狍巴贝虫样寄生虫(***-like parasites);犬血中检出阳性1份(0.28%),为韦氏巴贝虫(***)。马和驴未检出阳性。结论云南省西部部分县市的家畜动物存在多种巴贝虫感染,给当地畜牧业的发展和人类的健康造成一定的危害,需加强防范,当地人群感染情况值得进一步调查。

关键词：云南省家畜动物巴贝虫调查

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江苏常州市毛蠓属二新种描述(双翅目:蠓科)

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寄生虫与医学昆虫学报 2017年第1期24卷 52-55页

作者：杨庆贵何德雨张雷邱文毅虞以新江苏出入境检验检疫局南京210001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本文报道了2016年4月间在江苏省常州和金坛挥网捕获到的朴乐毛蠓（DasyheleabullockTokunaga，1958）是江苏省新纪录；宽带毛蠓（DasyheleafasciigeraKieffer，1924）及台湾蠛蠓（LasioheleataiwanaShiraki，1913）是常州地区首次纪录。新发现三钩毛蠓（DasyheleatriancyraYang，HeetYu，***．）和葛巍毛蠓（DasyheleageweiYu，ZhangetQiu，***．）2新种。新种模式标本保存在军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。

关键词：蠓科毛蠓属新种江苏常州

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