检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2014年第5期30卷 521-526,530页

作者：叶青赵璐赵俊龙胡敏农业微生物国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉430071

蛋白激酶在血吸虫生长发育、生殖发育及与宿主的相互作用等方面起着重要作用。蛋白激酶C(SmPKC1)、p38促分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)分别抑制和促进血吸虫从毛蚴到母胞蚴的发育;Polo样激酶(SmPlks)、Ste样激酶(SmSLK)、细胞酪氨酸激酶... 详细信息

蛋白激酶在血吸虫生长发育、生殖发育及与宿主的相互作用等方面起着重要作用。蛋白激酶C(SmPKC1)、p38促分裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)分别抑制和促进血吸虫从毛蚴到母胞蚴的发育;Polo样激酶(SmPlks)、Ste样激酶(SmSLK)、细胞酪氨酸激酶(SmTK3,SmTK4,SmTK5和SmTK6)、金星激酶受体(SmVKR1和SmVKR2)、TGF-β受体(SmTGFβ-RⅠ和SmTGFβ-RⅡ)和cGMP依赖性蛋白激酶(SmcGK1)等分子可能与血吸虫的生殖发育有重要关系;而表面蛋白激酶(ecto-PK)、分泌蛋白激酶(exo-PK)、cAMP依赖蛋白激酶(PKA)和SmcGK1蛋白不仅与血吸虫的生长发育有关,还可能与血吸虫-宿主的相互作用有关。因此,血吸虫激酶可以作为阻断其生长与生殖发育的一个潜在的药物靶标。

关键词：蛋白激酶血吸虫生长发育生殖发育

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猪维甲酸诱导基因Ⅰ的克隆及其在诱导Ⅰ型干扰素中的作用

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畜牧兽医学报 2010年第2期41卷 135-140页

作者：王荡方六荣梅小伟谢立兰陈焕春肖少波华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在Ⅰ型干扰素信号通路中的作用.从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-β,IRF3和NF-κB的荧光素酶报... 详细信息

本研究旨在探讨猪维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构特征及其在Ⅰ型干扰素信号通路中的作用.从猪外周血单核细胞中克隆猪RIG-Ⅰ全长cDNA,进一步构建猪RIG-Ⅰ全长及不同区域缺失突变体的真核表达载体,通过IFN-β,IRF3和NF-κB的荧光素酶报告系统分析猪RIG-Ⅰ在诱导Ⅰ型干扰素中的作用.结果表明,猪RIG-Ⅰ开放读码框全长为2 832 bp,编码943个氨基酸,与鸭嘴兽、大鼠、小鼠、猴、黑猩猩、人、马和牛RIG-Ⅰ相应序列的同源性为53.2%～83.2%.猪RIG-Ⅰ超表达能显著激活转录因子IRF3和NF-κB,并诱导IFN-β的产生.缺失猪RIG-Ⅰ的CARD区不仅不能激活下游信号,而且还负调控poly(I:C)诱导IFN-β的能力.结果提示RIG-Ⅰ是猪天然免疫系统中的一个模式识别受体,在Ⅰ型干扰素诱导的信号通路中具有重要作用.

关键词：猪 RIG-Ⅰ 克隆序列分析干扰素信号通路

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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒双拷贝VP1基因的串联表达及其免疫原性

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畜牧兽医学报 2009年第3期40卷 383-387页

作者：张克山向敏吴斌王勤刚陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因含有T细胞和B细胞表位,是口蹄疫病毒的主要免疫原性基因。作者将亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因首尾串联构建双拷贝的VP1基因(2VP1),实现双拷贝VP1基因的原核表达,表达的重组蛋白(GST2VP1)经Sephadex-G200分子筛层析纯化... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因含有T细胞和B细胞表位,是口蹄疫病毒的主要免疫原性基因。作者将亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因首尾串联构建双拷贝的VP1基因(2VP1),实现双拷贝VP1基因的原核表达,表达的重组蛋白(GST2VP1)经Sephadex-G200分子筛层析纯化后,Western blot证实其有反应原性,动物试验表明重组蛋白在加强免疫后能够产生和灭活疫苗相当的ELISA抗体和中和抗体;本试验结果为亚洲Ⅰ型FMDV免疫原性研究及GST2VP1蛋白的进一步应用奠定了基础。

关键词：亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 2VP1 串联表达免疫原性

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应用反向斑点杂交技术从转录序列的选择性捕获中筛选副猪嗜血杆菌表达差异基因

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农业生物技术学报 2009年第2期17卷 189-194页

作者：胡军勇金卉谢启运万云楚杰刘翠云陈焕春周锐华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

通过对靶DNA的种类和浓度、探针浓度、紫外交联时间等反向斑点杂交条件优化,建立了一种从选择性捕获的转录序列(selective capture of transcribed sequences,SCOTS)库中筛选副猪嗜血杆菌在体内、外差异表达的基因的方法。通过反向斑点... 详细信息

通过对靶DNA的种类和浓度、探针浓度、紫外交联时间等反向斑点杂交条件优化,建立了一种从选择性捕获的转录序列(selective capture of transcribed sequences,SCOTS)库中筛选副猪嗜血杆菌在体内、外差异表达的基因的方法。通过反向斑点杂交技术从10个样品中筛选出的6个样品被证明是副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)在体内上调表达或者是特异表达的基因。结果表明:SCOTS技术能够有效地获得一个可能存在差异表达基因的cDNA文库,而反向斑点杂交技术可以有效地从中筛选到差异表达基因。

关键词：副猪嗜血杆菌差异表达基因转录序列的选择性捕获反向斑点杂交

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钙离子信号通路及相关蛋白激酶对弓形虫的作用

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中国人兽共患病学报 2011年第11期27卷 1041-1043页

作者：陶青赵俊龙华中农业大学农业微生物国家重点实验室动物医学院武汉430070

弓形虫是世界范围分布的专性细胞内寄生原虫,可感染人类和所有温血动物的有核细胞。由于宿主的广泛性,弓形虫病已经成为一个全球性的、严重的公共卫生问题,不但危害人类健康,而且成为影响畜牧业发展的重要机会性病原体[1]。

关键词：弓形虫病蛋白激酶信号通路钙离子细胞内寄生原虫公共卫生问题畜牧业发展世界范围

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猪支气管败血波氏杆菌菌毛fimD基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2009年第1期40卷 98-102页

作者：何华裴洁吴斌赵战勤张建民罗勇向敏卢顺华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室武汉430070

参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列(X75811),设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1 098 bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达。SDS... 详细信息

参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列(X75811),设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1 098 bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实该表达产物以包涵体形式存在,大小约42 ku,与用支气管败血波氏杆菌菌体制备的阳性血清能发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立间接ELISA(fimD-ELISA),特异性良好。用fimD-ELISA检测临床送检的668份血清,阳性率为30.7%。用该法与微量凝集试验平行检测102份血清,fimD-ELISA的敏感性高于微量凝集试验。

关键词：支气管败血波氏杆菌 fimD 克隆表达 ELISA

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日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立

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生物工程学报 2014年第2期30卷 194-202页

作者：周景云汪雪裴超宋云峰陈焕春华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的... 详细信息

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的编码区,构建了原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到可溶性的NS3蛋白酶,用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧光共振能量转移的NS3蛋白酶活性检测方法,并确定了最佳的反应条件,对113个化合物进行了筛选,发现其中两个化合物对JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。

关键词：日本脑炎病毒 NS3蛋白酶可溶性表达酶活性抑制剂高通量筛选

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O型口蹄疫多基因重组腺病毒的构建及其免疫原性

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中国兽医学报 2009年第10期29卷 1286-1289页

作者：张克山向敏吴斌徐卓菲蔡利军王勤刚陈焕春华中农业大学动物医学院动物传染病实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

根据GenBank公布的序列设计1对引物扩增O型口蹄疫病毒P12A3C基因并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV内。含有目的基因的穿梭质粒(pShuttle-PAC)线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细菌。利用细菌内... 详细信息

根据GenBank公布的序列设计1对引物扩增O型口蹄疫病毒P12A3C基因并亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV内。含有目的基因的穿梭质粒(pShuttle-PAC)线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-1共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细菌。利用细菌内同源重组法得到重组腺病毒质粒(pAd-PAC)。在Lipofectamine 2000介导下重组腺病毒质粒转染HEK293细胞得到重组腺病毒(Ad-PAC)。半数组织培养感染剂量(TCID50)测定、免疫荧光试验(IFA)和连续传代后目的基因的PCR扩增,证实重组病毒滴度为105.5TCID50/0.1 mL,重组病毒HEK293细胞中得以表达且遗传稳定性良好;动物试验表明,该重组病毒能够诱导小鼠产生较高水平的针对口蹄疫病毒的特异性抗体;本试验为口蹄疫重组腺病毒活载体疫苗的进一步研究和应用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒腺病毒重组病毒免疫原性

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猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型RTX毒素I的N-端表达多肽具有良好的免疫原性

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生物工程学报 2006年第1期22卷 39-45页

作者：梅岭周锐卢海松贝为成刘维红林荔雯洪文洲陈焕春农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室动物病原微生物分室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表... 详细信息

ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5'端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表达产物ApxIA和ApxIAN均以包涵体的形式存在,Westem-blot检测证实两种表达产物均具有免疫反应性.将纯化的重组蛋白(rApxIA和rApxIAN)和提取的天然毒素ApxI(nApxI)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠,于免疫前、免疫2周和4周后分别检测了ELISA抗体和毒素中和抗体水平,结果表明,rApxIAN免疫组的ELISA抗体显著低于rApxIA免疫组和nApxI免疫组,但rApxIAN免疫组血清中和试验中测定的溶血素单位与rApxIA及天然nApxI免疫组没有显著差异.第二次免疫2周后,用1个LD50的APP血清1型J101株和2型标准菌株攻击试验动物,rApxIAN免疫组对血清1型和2型菌株的保护率分别为80%和100%.

关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素 N-端多肽原核表达免疫原性

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素的细胞毒性研究

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畜牧兽医学报 2011年第12期42卷 1750-1755页

作者：陈西王湘如徐晓娟郭凤娟陈焕春蔡旭旺华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列... 详细信息

本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT),并作用于猪髋动脉内皮细胞(Pig iliac endothelial cells,PIEC),以研究其细胞毒性。根据本实验室完成的副猪嗜血杆菌SH 0165株(血清5型)全基因组序列,针对cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物,扩增的基因片段大小分别约为681、834和531bp。将靶基因克隆到原核表达载体pET28a中,再转化到*** BL21(DE3),IPTG诱导表达3h,SDS-PAGE和Western blot检测证实表达产物以包涵体形式存在,大小分别约36、34和28ku。通过体外重构毒素与PIEC细胞作用3h,继续培养72h观察细胞形态学变化。结果表明,CdtABC全毒素致PIEC细胞膨胀、空泡形成、细胞凋亡等,而其他试验组变化不显著。结果提示,CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素毒素细胞毒性

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