检索结果-内蒙古大学图书馆

中国草地学报 2023年第4期45卷 74-81页

作者：闫振飞何勇孙娟苗福泓马利超李硕林琳王增裕杨国锋青岛农业大学草业学院山东青岛266109 华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070

以紫花苜蓿种子为材料,研究了不同的酶解液浓度、渗透压、离心力对叶和根原生质体分离的影响,旨在获得高产量、高活性的原生质体悬浮液,以便能够使用10×Genomics平台进行单细胞转录组测序,进而了解植物细胞分化的轨迹。结果表明:... 详细信息

以紫花苜蓿种子为材料,研究了不同的酶解液浓度、渗透压、离心力对叶和根原生质体分离的影响,旨在获得高产量、高活性的原生质体悬浮液,以便能够使用10×Genomics平台进行单细胞转录组测序,进而了解植物细胞分化的轨迹。结果表明:适用于根的最佳酶解液浓度、甘露醇浓度、离心力分别为2%纤维素酶+1%离析酶、0.5 mol/L、300 g;适用于叶的最佳酶解液浓度、甘露醇浓度和离心力分别为1.25%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.5%离析酶、0.4 mol/L、180 g。在此条件下,根原生质体的产量和活性分别达到3.95×10^(6)个/g和81%,叶原生质体的产量和活性分别达到7.09×10^(6)个/g和71%,达到10×Genomics平台的上机标准,为进一步开展紫花苜蓿发育的分子细胞生物学研究奠定基础。

关键词：紫花苜蓿原生质体分离单细胞转录组测序 10×Genomics平台

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牛支原体HB0801株VspX蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医 2017年第3期44卷 868-878页

作者：陈曦朱洪梅赵刚胡长敏陈颖钰郭爱珍华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室武汉430070

为获得牛支原体(Mycoplasma bovis,***)VspX蛋白单克隆抗体,将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化,作为免疫原,以QuickAntibody-Mouse 5W为免疫佐剂,免疫BALB/c小鼠。经3次免疫后,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆筛选后,... 详细信息

为获得牛支原体(Mycoplasma bovis,***)VspX蛋白单克隆抗体,将编码该蛋白的基因克隆、表达并纯化,作为免疫原,以QuickAntibody-Mouse 5W为免疫佐剂,免疫BALB/c小鼠。经3次免疫后,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经3次亚克隆筛选后,共获得5株能稳定分泌抗VspX蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、3A3、3C12、3H9及4D11。亚型鉴定表明,3C12重链为IgG2b,其余4株为IgG1,轻链均为κ链。间接ELISA结果表明,5株细胞培养上清的抗体效价在1∶1×104~1∶2×105,腹水效价在1∶1×105~1∶8×105。选其中两株杂交瘤细胞株3H9和4D11的腹水纯化,进行亲和力测定,解离常数分别为6.3×109和7.8×109,属高亲和力抗体。Western blotting结果显示,5株单抗均能与牛支原体发生特异性反应,而单抗4D11与羊无乳支原体标准株PG2和丝状支原体丝状亚种标准株PG3均不反应。流式细胞术结果表明,单抗4D11与牛支原体表面的VspX的结合呈剂量依赖性。间接免疫荧光结果表明,单抗4D11可以识别黏附到胚胎牛肺细胞上的重组VspX蛋白。本试验成功制备的单克隆抗体为VspX蛋白功能的研究奠定基础。

关键词：牛支原体 VspX蛋白单克隆抗体特异性

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DDM-BSA复合纳米材料的制备及对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的抑制

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华中农业大学学报 2020年第3期39卷 82-88页

作者：蒋晓菡张晓桐梁建功肖少波华中农业大学理学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以牛血清白蛋白、(2,4-二羟基苯基)(2,6-二甲基苯基)甲酮(DDM)为原料,采用去溶剂化的方法,合成DDM-BSA复合纳米材料,通过紫外-可见光谱仪、透射电镜、激光粒度仪等对所合成的复合纳米材料进行表征。结果显示,所合成的复合纳米粒子尺寸... 详细信息

以牛血清白蛋白、(2,4-二羟基苯基)(2,6-二甲基苯基)甲酮(DDM)为原料,采用去溶剂化的方法,合成DDM-BSA复合纳米材料,通过紫外-可见光谱仪、透射电镜、激光粒度仪等对所合成的复合纳米材料进行表征。结果显示,所合成的复合纳米粒子尺寸分散均匀,平均粒径49.3 nm,对DDM药物的负载率为37.4%,80 h后体外释放率可达95.4%。在此基础上,评估了复合纳米粒子对MARC-145细胞的细胞毒性及对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响。结果发现,当牛血清白蛋白负载的DDM质量浓度为12μg/mL时,MARC-145细胞的存活率超过90%,该质量浓度的复合纳米粒子可有效抑制PRRSV病毒的增殖,与单纯使用DDM相比,具有更好的抗病毒效果。

关键词：牛血清白蛋白复合纳米材料药物递送抗病毒药物靶向治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒

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牛疱疹病毒1型复制非必需基因UL0.5的鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 865-869页

作者：尹贻鑫何宁宇张瑞竹张炜陈兴江陈焕春刘正飞华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070

牛疱疹病毒1型(BHV-1)和5型(BHV-5)为同源性最高的两种α疱疹病毒亚科成员,分别引起牛的呼吸道和神经症状。序列比较显示,BHV-1基因组中具有一个独特的UL0.5基因。为研究该基因的功能,本研究构建BHV-1 UL0.5基因缺失转移质粒,与野生型... 详细信息

牛疱疹病毒1型(BHV-1)和5型(BHV-5)为同源性最高的两种α疱疹病毒亚科成员,分别引起牛的呼吸道和神经症状。序列比较显示,BHV-1基因组中具有一个独特的UL0.5基因。为研究该基因的功能,本研究构建BHV-1 UL0.5基因缺失转移质粒,与野生型基因组共转染MDBK细胞,通过空斑纯化获得UL0.5基因缺失突变株(rBHV-1ΔUL0.5);PCR和western blot鉴定结果表明,重组病毒形成的空斑大小及一步法生长曲线与野生型基本相同;家兔接种试验表明,突变株与野生型在急性感染期、潜伏感染期及再激活期病毒排毒量无明显变化;Real time PCR检测3个时期三叉神经节中病毒基因组的拷贝数也无明显差别。综上所述,UL0.5基因是BHV-1的复制非必需基因,该基因缺失后对家兔致病性无显著影响。

关键词：牛疱疹病毒1型 UL0.5基因增殖特性致病性

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Bt伴胞晶体毒素对小鼠体内不同时期日本血吸虫的作用

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华中农业大学学报 2005年第5期24卷 492-494页

作者：周艳琴姚宝安夏雪山赵俊龙孙明喻子牛华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物国家重点实验室武汉430070

血吸虫病是世界上最重要的人畜共患寄生虫病之一[1],当今世界上仍有74个国家6亿多人口在血吸虫的威胁之中,这些国家分布在亚洲、非洲、南美洲.……

关键词：苏云金杆菌杀虫晶体蛋白毒素日本血吸虫

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苏云金芽胞杆菌晶体毒素引发的日本血吸虫超微结构改变

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 503-506,510页

作者：周艳琴姚宝安赵俊龙孙明喻子牛华中农业大学动物医学院农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070

对人工感染日本血吸虫尾蚴45d的家兔作主动脉灌注冲虫,获得的成虫经Earle's液洗涤,加入细胞培养板内,用含10%牛血清的RPMI-1640培养液于37℃、5%CO2培养箱中培养,将30mg/L的苏云金杆菌Bt YBT-1532和HD-1毒素蛋白分别加入各孔中,取培... 详细信息

对人工感染日本血吸虫尾蚴45d的家兔作主动脉灌注冲虫,获得的成虫经Earle's液洗涤,加入细胞培养板内,用含10%牛血清的RPMI-1640培养液于37℃、5%CO2培养箱中培养,将30mg/L的苏云金杆菌Bt YBT-1532和HD-1毒素蛋白分别加入各孔中,取培养1、2、4、8、24、48h的虫体,制作超薄切片进行透射电镜观察。结果发现:HD-1不引起血吸虫体壁超微结构的变化。YBT-1532毒素则引发血吸虫成虫表皮的各种变化,包括基质空泡化,褶嵴肿胀粘连,基膜和环肌肿胀,杆状分泌小体和指环体减少,感觉结构坏死,环肌溶解,体壁细胞胞质内细胞器溶解坏死,纵肌肿胀,褶嵴破溃;雌虫肠壁基质脂滴增多,出现坏死区域。上述超微结构的改变均随毒素感作时间的延续而渐进增重。

关键词：苏云金芽胞杆菌晶体蛋白日本血吸虫超微结构

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猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株的生物学特性及作为活疫苗表达载体的应用

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生物工程学报 2009年第1期25卷 29-36页

作者：赵战勤徐引弟吴斌程相朝李银聚汤细彪张春杰陈焕春河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室洛阳471003 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C... 详细信息

为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C500一致,符合猪霍乱沙门氏菌的表型特征;携带平衡表达质粒pYA3493的重组菌株ΔasdC500(pYA3493)与C500的生长速度没有明显差别;根据Reed-Muench法,测定ΔasdC500(pYA3493)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为1.1×107CFU,毒力稍低于C500;口服接种ΔasdC500(pYA3493)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别;携带重组质粒pYA-F1P2(含有支气管败血波氏杆菌抗原基因fhaB的TypeI区域和prn的R2区域)的重组菌株ΔasdC500(pYA-F1P2)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达外源保护性抗原。由此表明,ΔasdC500保留了亲本菌株C500的一系列生物学特征,并可高效表达外源抗原,可作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统开发基因工程重组疫苗。

关键词：沙门氏菌活疫苗载体 Asd^+平衡表达系统支气管败血波氏杆菌

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东方巴贝斯虫的18S rRNA基因的扩增及系统发育研究

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畜牧兽医学报 2005年第9期36卷 923-926页

作者：刘琴付媛周艳琴周丹娜江涛王金苹赵俊龙姚宝安华中农业大学农业微生物国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

利用真核生物18S rRNA基因的PCR通用引物对寄生于中国水牛的巴贝斯虫(已命名为东方巴贝斯虫-Babesia orientalis)基因组DNA进行扩增,得到其18S rRNA全基因片段,测序后blast分析表明该虫种属巴贝斯虫无疑。将该基因1 700 bp长片段序列与G... 详细信息

利用真核生物18S rRNA基因的PCR通用引物对寄生于中国水牛的巴贝斯虫(已命名为东方巴贝斯虫-Babesia orientalis)基因组DNA进行扩增,得到其18S rRNA全基因片段,测序后blast分析表明该虫种属巴贝斯虫无疑。将该基因1 700 bp长片段序列与GenBank中15种已知巴贝斯虫的相应序列进行比较分析,建立系统发育树。结果表明,东方巴贝斯虫与南非未定种的巴贝斯虫亲缘关系最近,与羊巴贝斯虫亲缘关系较近,与牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫的亲缘关系较远。这一结果说明水牛东方巴贝斯虫是一独立种。

关键词：东方巴贝斯虫水牛 PCR 18S rRNA 系统发育树新种

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支原体分泌蛋白研究进展

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畜牧兽医学报 2017年第9期48卷 1572-1578页

作者：胡古月赵刚陈颖钰郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070

支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药... 详细信息

支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药物和疫苗的潜在靶标。然而支原体分泌蛋白研究尚处于初级阶段,已鉴定的支原体分泌蛋白很少,其在致病与免疫中的作用有待研究。笔者介绍了已发现的支原体分泌蛋白、分泌方式以及其研究方法,以期为支原体分泌蛋白相关研究提供参考。

关键词：支原体分泌蛋白靶标疫苗致病性免疫

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6-溴-靛玉红-3'-肟抑制脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞凋亡

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畜牧兽医学报 2018年第12期49卷 2753-2761页

作者：刘畅唐鑫张文劲赵春阳郭爱珍胡长敏华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

研究6-溴-靛玉红-3'-肟(BIO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠乳腺上皮细胞(mouse mammary epithelial cell,MMEC)凋亡的作用及机制。收集空白对照组、DMSO组、BIO单独处理组及不同浓度BIO(5、25、50nmol·L^(-1))+LPS共同处理组细胞,分别用流式细胞术检测凋亡率,利用qRT-PCR检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-8 mRNA的变化,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3和Caspase-8蛋白水平的变化。结果显示:BIO能够降低LPS诱导的MMECs的凋亡率,抑制凋亡基因Bak和Bax及凋亡通路蛋白Caspase-3和Caspase-8活性(P <0. 001),促进抑凋亡基因Bcl-2及Bcl-xl的活性。BIO通过调节Bax、Bak、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-3和Caspase-8活性抑制LPS诱导的鼠乳腺上皮细胞凋亡。

关键词： BIO LPS 乳腺炎凋亡凋亡因子

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