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猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增△srtC5片段，该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列，但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s：：△srtCS,并将其电转化导入ZY458菌株，通过同源重组获得△srtC5突变体。通过体外的细胞黏附实验和体内的家兔攻毒实验证明△srtC5突变体比较野毒株，其细胞黏附能力和对家兔的致病性都显著降低。

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猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变菌株的构建及其特性分析

猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变菌株的构建及其特性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：祝令伟田园贝为成齐翀刘军孙洋周博郭学军冯书章中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春 130062 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉 430070

构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增△srtC5片段，该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列，但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自... 详细信息

构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增△srtC5片段，该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列，但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s∶∶△srtC5，并将其电转化导入ZY458菌株，通过同源重组获得△srtC5突变体。通过体外的细胞黏附实验和体内的家兔攻毒实验证明△srcC5突变体比较野毒株，其细胞黏附能力和对家兔的致病性都显著降低.

关键词：猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变细胞黏附

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炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株构建

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微生物学报 2009年第1期49卷 23-31页

作者：高美琴刘先凯冯尔玲唐恒明朱力陈福生王恒樑华中农业大学食品科技学院武汉430070 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】构建炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株,为研究eag基因的功能奠定了基础。【方法】本研究以我国人用炭疽杆菌活疫苗A16R株中eag基因为目的缺失基因,根据炭疽芽孢杆菌Ames株基因组序列,利用软件设计了扩增上下游同源臂以及抗... 详细信息

【目的】构建炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株,为研究eag基因的功能奠定了基础。【方法】本研究以我国人用炭疽杆菌活疫苗A16R株中eag基因为目的缺失基因,根据炭疽芽孢杆菌Ames株基因组序列,利用软件设计了扩增上下游同源臂以及抗性基因引物,构建了重组质粒,将该重组质粒电击转入炭疽杆菌A16R感受态细胞中,利用同源重组原理筛选到炭疽杆菌A16R株eag基因缺失突变株。在分子水平及蛋白质组学方面对基因缺失突变株进行验证。【结果】成功构建了重组质粒,经同源重组后获得eag基因缺失突变株。PCR鉴定表明目的基因已经丢失;SDS PAGE表明野生株与突变株在93 kDa处有差异蛋白条带,经质谱鉴定分析该条带为目的基因所表达的EA1蛋白;双向电泳结果显示突变株与野生株比较明显缺失3个蛋白点,经质谱分析后确定这3个点都是EA1蛋白。【结论】成功获得炭疽芽孢杆菌A16R株eag基因缺失突变株,为深入研究eag基因的功能奠定了基础,同时也为炭疽芽孢杆菌重要基因功能的研究建立了一个良好的技术平台。

关键词：炭疽芽孢杆菌A16R株同源重组缺失突变体双向电泳

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伪狂犬病病毒Ea株gK基因的真核表达

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中国畜牧兽医 2009年第11期36卷 57-60页

作者：徐引弟陈焕春肖少波河南农业科学院畜牧兽医研究所郑州450002 华中农业大学农业微生物国家重点实验室武汉430070

以伪狂犬病毒Ea株BamH I 5′片段为模板,PCR扩增出约0.9 kbgK基因完整编码区片段,将该基因克隆到pBluescriptIISK+中,构建重组载体pSKgK。进一步将该片段插入真核表达载体pEGFP-C1的增强绿荧光蛋白EGFP下游,构建真核表达载体pEGFPgK,脂... 详细信息

以伪狂犬病毒Ea株BamH I 5′片段为模板,PCR扩增出约0.9 kbgK基因完整编码区片段,将该基因克隆到pBluescriptIISK+中,构建重组载体pSKgK。进一步将该片段插入真核表达载体pEGFP-C1的增强绿荧光蛋白EGFP下游,构建真核表达载体pEGFPgK,脂质体法转染BHK-21细胞,G418筛选至正常细胞完全死亡,在倒置荧光显微镜下观察,pEG-FPgK转染的细胞在细胞膜和细胞浆中发出很强的荧光,而正常细胞不发荧光。证明gK基因在BHK-21细胞上获得了表达,表达在细胞膜和细胞浆中。

关键词：伪狂犬病病毒 gK基因真核表达

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伪狂犬病病毒Ea株ORF-1基因在BHK-21细胞上的表达

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河南农业科学 2009年第3期38卷 99-102页

作者：徐引弟陈焕春肖少波河南省农业科学院畜牧兽医研究所河南郑州450002 华中农业大学农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070

以伪狂犬病毒Ea株BamHⅠ5′片段为模板,PCR扩增出约0.6kbORF-1基因完整编码区序列,将该基因克隆到pBluescriptⅡSK+中,构建重组载体pSKORF1。进一步将该片段插入真核表达载体pEGFP-C1的增强型绿荧光蛋白EGFP下游,构建真核表达载体pEGFPO... 详细信息

以伪狂犬病毒Ea株BamHⅠ5′片段为模板,PCR扩增出约0.6kbORF-1基因完整编码区序列,将该基因克隆到pBluescriptⅡSK+中,构建重组载体pSKORF1。进一步将该片段插入真核表达载体pEGFP-C1的增强型绿荧光蛋白EGFP下游,构建真核表达载体pEGFPORF1,脂质体法转染BHK-21细胞,G418加压筛选至正常细胞完全死亡。在倒置荧光显微镜下观察,可见pEGFPORF1转染的细胞在细胞膜和细胞浆中发出较强的荧光,证明ORF-1基因在BHK-21细胞中获得了表达。

关键词：伪狂犬病病毒 ORF-1基因克隆表达

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炭疽菌保护性抗原受体结合区的表达及其多克隆抗体的制备

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生物技术通报 2009年第8期25卷 94-98,108页

作者：邱炎王艳春展德文陶好霞姜娜韩秀萍李家奎刘纯杰军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 华中农业大学动物医学院武汉430070

原核表达炭疽杆菌保护性抗原受体结合区并制备该蛋白的多克隆抗体。从炭疽芽胞杆菌A16R中经PCR扩增得到了炭疽菌保护性抗原(PA)受体结合区基因,即PA的第四结构域(PA-D4),将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-2b(+)中,将... 详细信息

原核表达炭疽杆菌保护性抗原受体结合区并制备该蛋白的多克隆抗体。从炭疽芽胞杆菌A16R中经PCR扩增得到了炭疽菌保护性抗原(PA)受体结合区基因,即PA的第四结构域(PA-D4),将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-2b(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrapTM Chelating HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA和Western blot检测抗血清。结果表明,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对PA-D4融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶102400;其抗体能特异性识别内源性的PA。PA-D4重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能和炭疽疫苗免疫保护机制奠定了基础。

关键词：炭疽杆菌保护性抗原受体结合区原核表达多克隆抗体

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一株海洋锰氧化细菌对Mn(Ⅱ)的氧化去除研究

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湖北农业科学 2009年第1期48卷 85-88页

作者：王文明邵宗泽王革娇农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学生命科学技术学院武汉430070 国家海洋局第三研究所福建厦门361005

锰氧化微生物能够将可溶的Mn2+氧化为不溶的锰氧化物沉淀,因此在生物除锰上具有重要应用价值。以1株分离自太平洋深海的锰氧化细菌Brachybacterium ***32为试验对象,研究了其最佳生长pH值和NaCl质量体积分数,Mn2+抗性以及对Mn2+的氧化... 详细信息

锰氧化微生物能够将可溶的Mn2+氧化为不溶的锰氧化物沉淀,因此在生物除锰上具有重要应用价值。以1株分离自太平洋深海的锰氧化细菌Brachybacterium ***32为试验对象,研究了其最佳生长pH值和NaCl质量体积分数,Mn2+抗性以及对Mn2+的氧化去除能力等。结果表明,Mn32在pH值7.0时生长最快(pH值4～10下生长),最佳生长NaCl质量体积分数为4.5%(0～15%下生长)。Mn2+对Mn32的最小抑菌浓度为55 mmol·L-1,在2 d之内Mn32对0.2 mmol·L-1 Mn2+的去除率达到99%以上。电镜扫描观察表明,所得到的锰氧化物存在于Mn32细胞的间隙和表面。

关键词：海洋锰氧化细菌锰氧化锰去除电镜扫描

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幽门螺杆菌毒力致病因子研究进展

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世界华人消化杂志 2009年第22期17卷 2292-2297页

作者：韩秀萍王芃李家奎刘纯杰病原微生物与生物安全国家重点实验室中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所北京市100071 华中农业大学动物医学院湖北省武汉市430070

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)感染是一种世界范围内常见的慢性感染,可致多种疾病,如:慢性胃炎,十二指肠溃疡,胃黏膜相关的淋巴样组织淋巴瘤及胃腺癌.不同疾病是由H pylori和宿主之间复杂的致病机制导致.近年来,学者们对H p... 详细信息

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)感染是一种世界范围内常见的慢性感染,可致多种疾病,如:慢性胃炎,十二指肠溃疡,胃黏膜相关的淋巴样组织淋巴瘤及胃腺癌.不同疾病是由H pylori和宿主之间复杂的致病机制导致.近年来,学者们对H pylori毒力致病因子的研究取得了长足进展,为揭开H pylori感染的致病机制奠定了基础.本文就H pylori毒力致病因子CagA、VacA、BabA、SabA、OipA、DupA等的最新研究进展进行了综述.

关键词：幽门螺杆菌毒力致病因子空泡毒素细胞毒素相关蛋白

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离子液体用于秸杆纤维素的溶解及应用研究

离子液体用于秸杆纤维素的溶解及应用研究

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第五届全国环境化学大会

作者：卢炜韩鹤友华中农业大学理学院化学生物学研究所微生物国家重点实验室

＜正＞秸秆是一种具有潜在利用价值的巨大的可再生生物资源,在我国其年总产量约7亿吨。然而对于秸秆的利用却十分有限,就地焚烧是目前最主要的处理方式。这不仅造成了资源浪费,而且带来了环境污染,对社会生活和生产的许多方面产生了负... 详细信息

＜正＞秸秆是一种具有潜在利用价值的巨大的可再生生物资源,在我国其年总产量约7亿吨。然而对于秸秆的利用却十分有限,就地焚烧是目前最主要的处理方式。这不仅造成了资源浪费,而且带来了环境污染,对社会生活和生产的许多方面产生了负面作用。因此,秸秆的开发利用,不仅可以变废为宝,还可以消除环境污

关键词： Cr（Ⅵ）油菜秸秆纤维素离子液体吸附剂

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