检索结果-内蒙古大学图书馆

Slr0351的表达及其在Synechocystis *** 6803中功能的初步研究

水产学报 2015年第1期39卷 16-23页

作者：马琼郑小江赵开弘周明王胜鹏湖北民族学院生物资源保护与利用湖北省重点实验室湖北民族学院生物科学与技术学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省农业科学院果树茶叶研究所

Slr0351是Synechocystis *** 6803中的未知功能蛋白,其同源蛋白广泛存在于各种蓝藻和铁硫杆菌中。为了确定Slr0351的性质,构建了表达质粒p ET-slr0351,并在***中表达Slr0351。在无氧条件下采用亲和层析纯化方法获得了Slr0351,无氧条件下... 详细信息

Slr0351是Synechocystis *** 6803中的未知功能蛋白,其同源蛋白广泛存在于各种蓝藻和铁硫杆菌中。为了确定Slr0351的性质,构建了表达质粒p ET-slr0351,并在***中表达Slr0351。在无氧条件下采用亲和层析纯化方法获得了Slr0351,无氧条件下Slr0351呈棕红色,在460 nm处有[2Fe-2S]铁硫簇的特征吸收峰,棕红色Slr0351对氧气敏感,能被连二亚硫酸钠还原,由此表明Slr0351为铁硫蛋白。为了获知slr0351的功能,基于基因同源重组交换的原理,利用Kana抗性片段替换slr0351,将Synechocystis *** 6803中的slr0351基因缺失,构建了Δslr0351突变体。利用紫外-可见吸收光谱仪扫描了Δslr0351与野生型Synechocystis *** 6803(WT)的吸收光谱,发现正常光照条件下Δslr0351的叶绿素a仅为WT的68.8%,slr0351的缺失使蓝藻中叶绿素a含量降低。比较了藻细胞在缺乏不同营养元素和不同光照条件下的生长速率差异,与WT相比,Δslr0351具有如下特征:(1)对缺Fe和缺S胁迫条件更敏感;(2)在弱光照条件下Δslr0351的光能利用效率和生长速率更低,该现象与Δslr0351中叶绿素a含量的降低有关。

关键词：蓝藻 Synechocystis sp.PCC 6803 Slr0351 铁硫蛋白

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橘小实蝇性别决定基因transformer的功能研究

橘小实蝇性别决定基因transformer的功能研究

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中国植物保护学会2015年学术年会

作者：彭威郑文平张宏宇华中农业大学植物科学技术学院农业微生物学国家重点实验室城市与园艺昆虫研究所

transformer基因是昆虫的性别决定级联系统中的一个双开关基因,通过RNA的选择性剪切来实现性别分化。在实蝇中,Y染色体连接的雄特异因子(M)控制着性别决定途径。为拓展对橘小实蝇性别决定的理解以及运用性别决定来控制橘小实蝇数量,我... 详细信息

transformer基因是昆虫的性别决定级联系统中的一个双开关基因,通过RNA的选择性剪切来实现性别分化。在实蝇中,Y染色体连接的雄特异因子(M)控制着性别决定途径。为拓展对橘小实蝇性别决定的理解以及运用性别决定来控制橘小实蝇数量,我们分离鉴定了性别决定关键基因transformer和transrormer-2,transrormer mRNA前体经过选择性剪切转录产生两种雄特异和一种雌特异的亚型,雌特异的亚型能翻译成有功能的TRA蛋白而雄特异的亚型由于终止密码子不能翻译成有功能的TRA蛋白。Bdtra上存在的TRA/TRA-2结合位点表明TRA和TRA-2作为剪切管理因子通过tra反馈调节来维持和促进雌性的性别发育。通过RNA干扰对transrormer进行了功能研究,发现胚胎期敲除transformer基因能导致雌虫雄性化,表明橘小实蝇在胚胎早期实现性别分化;成虫期敲除transrormer基因能降低雌虫卵黄蛋白基因yolk protein gene(Bdyp1)的表达,进而降低雌虫产卵量,表明transformer基因能正向调控卵黄蛋白基因yolk protein gene(Bdyp1)的转录。

关键词：橘小实蝇 transformer基因 RNA干扰性别决定

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对柑橘木虱高致病性病原真菌的分离筛选

对柑橘木虱高致病性病原真菌的分离筛选

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中国植物保护学会2015年学术年会

作者：刘亚茹彭威张群张宏宇华中农业大学植物科学技术学院农业微生物学国家重点实验室城市与园艺昆虫研究所大别山特色资源开发湖北省协同创新中心

柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)是传播柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)的唯一虫媒,黄龙病的流行区和柑橘木虱主要分布于我国台湾、广东、福建、广西、浙江、江西等柑橘产区,并有向北方发展的趋势,严重为害我国柑橘产业的安... 详细信息

柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)是传播柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)的唯一虫媒,黄龙病的流行区和柑橘木虱主要分布于我国台湾、广东、福建、广西、浙江、江西等柑橘产区,并有向北方发展的趋势,严重为害我国柑橘产业的安全。防治柑橘木虱是治理黄龙病的关键措施之一。为选择对柑橘木虱高致病力的生防菌,从橘园中被侵染的柑橘木虱虫体上分离获得的木虱病原真菌,经形态鉴定和毒力筛选,获得对柑橘木虱高致病性病原真菌多株,真菌分生孢子浓度为1×10～7spores/mL时,橘形被毛孢(Hirsutella citriformis)、玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea),对柑橘木虱的致死率分别超过78%和65%,同时对褐飞虱(Nilaparvata lugens)、柑橘锈壁虱(Phyllocoptruta oleivor)也有较好的致病性。实验表明上述病原真菌在木虱、褐飞虱和锈壁虱,尤其是柑橘木虱的防治中具有很好的应用潜力。

关键词：柑橘黄龙病柑橘木虱玫烟色棒束孢橘形被毛孢

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高致病力扁座壳孢菌固体发酵及其生防制剂研究

高致病力扁座壳孢菌固体发酵及其生防制剂研究

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中国植物保护学会2015年学术年会

作者：张为丽彭威张宏宇华中农业大学植物科学技术学院农业微生物学国家重点实验室城市与园艺昆虫研究所大别山特色资源开发湖北省协同创新中心

粉虱类害虫是一类重要的农业害虫,如烟粉虱（Bemisia tabaci Gennadius）、黑刺粉虱（Aleurocanthus spiniferus Quaintanc）和柑橘粉虱（Dialeurodes citri Ashmead）等是我国蔬菜、茶叶和柑橘等园艺作物重要害虫,造成严重的经济损失,... 详细信息

粉虱类害虫是一类重要的农业害虫,如烟粉虱（Bemisia tabaci Gennadius）、黑刺粉虱（Aleurocanthus spiniferus Quaintanc）和柑橘粉虱（Dialeurodes citri Ashmead）等是我国蔬菜、茶叶和柑橘等园艺作物重要害虫,造成严重的经济损失,长期以来依赖化学农药防治,引起害虫抗药性、农药残留等一系列副作用,无公害微生物源农药日益受到重视。我们在分离调查橘园扁座壳孢菌（Aschersonia）资源及其遗传多样性,获得高致病性扁座壳孢菌YW3基础上,本文通过正交实验研究了扁座壳孢菌固体发酵培养基及培养条件,建立了扁座壳孢菌YW3固体发酵技术工艺;并采用界面聚合法建立了扁座壳孢菌分生孢子微胶囊制剂制备方法与生产工艺。毒力测定结果显示,在相对湿度（55±5%）时扁座壳孢菌YW3微胶囊制剂对柑橘粉虱LC为8.67×10～6conidia/mL,致病性显著高于分生孢子悬浮液(LC为9.96×10～8conidia/mL)。

关键词：粉虱扁座壳孢菌微胶囊制剂固体发酵

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南极土壤来源的恶臭假单胞菌1A00316抗南方根结线虫的机制

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应用与环境生物学报 2014年第6期20卷 1046-1051页

作者：唐佳频邵宗泽张智涛李光玉景雪萍喻子牛张吉斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室、生命科学技术学院微生物农药国家工程研究中心武汉430070 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室厦门361005

对1 432株海洋和极地来源的细菌进行抗南方根结线虫的离体筛选,并对其中活性较好的一株菌进行菌种鉴定并通过盆栽实验验证其在实际生防中的效果.设计诱导系统抗性实验,测定植物防御酶活的变化,初步研究细菌的抗虫机制.结果显示,从1 432... 详细信息

对1 432株海洋和极地来源的细菌进行抗南方根结线虫的离体筛选,并对其中活性较好的一株菌进行菌种鉴定并通过盆栽实验验证其在实际生防中的效果.设计诱导系统抗性实验,测定植物防御酶活的变化,初步研究细菌的抗虫机制.结果显示,从1 432株细菌离体筛选得到了9株具有抗南方根结线虫的细菌,其中南极土壤来源的菌株1A00316在离体和活体中均表现出较好的抗性,其生防效果达到71.67%,经鉴定该菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).诱导番茄系统抗性实验结果显示,经菌株1A00316发酵液处理后的番茄3种防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)以及过氧化物酶(POD)的酶活均显著提高,分析数据认为该菌株的菌体可诱导番茄系统抗性.本研究表明恶臭假单胞菌1A00316抗南方根结线虫效果较好,可作为微生物制剂应用于实际生防中;该菌不仅有直接抗虫作用,还存在间接抗虫机制,其多重抗虫机制也具有进一步的研究价值.

关键词：南方根结线虫恶臭假单胞菌南极土壤生物防治诱导系统抗性

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羊口疮病毒ORF125基因编码蛋白的结构预测及其在真核表达质粒转染细胞中的定位

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畜牧兽医学报 2014年第8期45卷 1375-1380页

作者：孔汉金张克山刘永杰尚佑军刘湘涛吴斌华中农业大学农业微生物国家重点实验室动物医学院武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位。设计引物PCR扩增ORF125基因,并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP—ORF125。利用DNAStar和MEGA4.0元... 详细信息

旨在预测羊口疮病毒(ORFV)ORF125蛋白结构及其在真核表达质粒转染细胞中的定位。设计引物PCR扩增ORF125基因,并将其定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定后得到阳性重组表达质粒pEGFP—ORF125。利用DNAStar和MEGA4.0元件分析不同毒株间ORF125基因的遗传进化关系,接着通过在线Expasy工具预测其二级结构并与Bcl-2家族成员进行比较。利用脂质体介导法转染山羊皮肤成纤维细胞(GSFs),经DAPI染色后在激光共聚焦显微镜下观察ORF125的亚细胞定位。结果显示:本次克隆的ORFV ORF125基因与国外公布的其他羊口疮毒株核苷酸水平相似性为97.1%~98.1%,与同属另外2株羊伪牛痘病毒相比,核苷酸相似性分别为84.1%(GQ329669)和85.6%(GQ329670);蛋白二级结构预测分析发现ORF125与Bcl-2家族成员α-螺旋位置相近,预测空间结构有很大的相似性;激光共聚焦显微镜观察发现ORF125在GSFs细胞质中呈弥散性分布。结果提示,羊口疮病毒ORF125基因非常保守,预测与Bcl-2蛋白有着相似的功能,重组质粒pEGFP-ORF125构建成功,ORF125基因在GSFs中得到表达,定位于细胞质中。

关键词：羊口疮病毒 ORF125序列分析亚细胞定位基因结构

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羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2014年第7期44卷 704-709页

作者：孔汉金张克山刘永杰尚佑军刘湘涛吴斌华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物医学院湖北武汉430070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒... 详细信息

为制备抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体,应用PCR扩增羊口疮病毒B2L基因并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果显示,获得了4株稳定分泌抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体细胞株,其抗体亚类均为IgG1。Western-blot鉴定结果和间接荧光抗体试验表明,4株单克隆抗体均能特异性识别羊口疮病毒。经鉴定,4株单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶640~1∶1 280,腹水效价为1∶25×211~1∶25×212。染色体计数表明,4株杂交瘤细胞均是SP2/0细胞与脾细胞的杂交产物。结果表明,抗羊口疮病毒单克隆抗体的成功制备,为进一步研究羊口疮病毒的生物学特性及羊口疮快速诊断方法的建立奠定了基础。

关键词：羊口疮病毒杂交瘤单克隆抗体 ELISA 鉴定

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梨和苹果腐烂病菌不同培养表型菌株的致病性分析

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植物病理学报 2014年第2期44卷 217-220页

作者：周玉霞张美鑫翟立峰杨晓平曹素芳洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院武汉430070 湖北省农科院果树茶叶研究所武汉430209 甘肃省农科院林果花卉研究所兰州730070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

梨和苹果腐烂病主要发生在中国和日本，该病主要危害梨和苹果树的主干和侧枝。目前国内外对这2种腐烂病菌分类地位和致病性分化的研究十分关注。

关键词：苹果腐烂病菌致病性分化菌株表型培养梨分类地位苹果树

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梨种质资源对腐烂病抗性的室内评价

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园艺学报 2014年第7期41卷 1297-1306页

作者：张美鑫翟立峰胡红菊张本贤洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院武汉430070 湖北省农业科学院果树茶叶研究所武汉430209 湖北省钟祥市植物检疫站湖北钟祥431900 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用离体枝条分生孢子悬浮液和菌丝块接种测定了11种梨种质资源共211份材料对腐烂病的抗性。结果显示:不同种质资源对病菌的侵入和扩展的抵抗均存在差异,抗侵入的占17.5%,抗扩展的占35.1%;同一种质资源对病菌侵入与扩展的抵抗之间也有差... 详细信息

采用离体枝条分生孢子悬浮液和菌丝块接种测定了11种梨种质资源共211份材料对腐烂病的抗性。结果显示:不同种质资源对病菌的侵入和扩展的抵抗均存在差异,抗侵入的占17.5%,抗扩展的占35.1%;同一种质资源对病菌侵入与扩展的抵抗之间也有差异,对病菌侵入和扩展抵抗一致的占30.3%,不一致的占69.7%;所有供试材料中对病菌侵入和扩展均为高抗(HR/HR)的占1.4%,抗病(R/R)的占4.7%,中等(M/M)的占12.3%,感病(S/S)的占10.9%,高感(HS/HS)的占0.9%;通过综合抗性评价发现,‘大香水’、‘杜梨’、‘江岛’、‘康德’、‘龙泉酥’、‘苹果梨’、‘山梨’、‘云红1号’、‘早玉’和‘长十郎’为抗病(R/R)材料,‘新高’、‘武豆9号’和‘荆杜3号’为高抗(HR/HR)材料,‘新星’和‘新黄’为高感(HS/HS)材料。

关键词：梨种质资源腐烂病抗性评价

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新型Resilin-R5融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化

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浙江农业学报 2014年第1期26卷 141-147页

作者：毛争争柳永孙燕周曼刘子铎汤江武华中农业大学农业微生物国家重点实验室湖北武汉430070 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所浙江杭州310021 杭州师范大学钱江学院浙江杭州310021 浙江工业大学药学院浙江杭州310014

为了获得兼具"高弹性"和"硅沉积"性能的新型功能生物材料,将具有高弹性的Resilin蛋白与具有硅沉积作用的R5肽进行了融合,研究其在大肠杆菌中的表达,建立了简易的纯化方法。首先,将果蝇弹性蛋白基因CG15920序列与硅... 详细信息

为了获得兼具"高弹性"和"硅沉积"性能的新型功能生物材料,将具有高弹性的Resilin蛋白与具有硅沉积作用的R5肽进行了融合,研究其在大肠杆菌中的表达,建立了简易的纯化方法。首先,将果蝇弹性蛋白基因CG15920序列与硅藻R5肽基因序列进行拼接,经过稀有密码子优化后合成重组基因resilin-r5。然后将其插入原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS获得表达菌株,并通过IPTG进行诱导表达。最后以盐析加热法和Ni离子柱亲和层析法纯化带组氨酸标签的重组融合蛋白。最终实现Resilin-R5融合蛋白的高效表达,产量达到120 mg·L-1发酵液,为"高弹性-硅沉积"融合蛋白Resilin-R5的性能表征和创新应用奠定了基础。

关键词： Resilin—R5 融合表达蛋白纯化

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