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中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：曲正姜道宏谢甲涛付艳萍程家森李博湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室/华中农业大学植物科学技术学院/华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是油菜生产上的首要病害,严重影响了油菜产业的健康发展。由于环境友好、生态安全等原因,生物防治策略备受人们关注,而利用病毒性低毒力菌株防控真菌病害,是生物防治中的重要策略之一。... 详细信息

由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是油菜生产上的首要病害,严重影响了油菜产业的健康发展。由于环境友好、生态安全等原因,生物防治策略备受人们关注,而利用病毒性低毒力菌株防控真菌病害,是生物防治中的重要策略之一。课题组前期从核盘菌DT-8菌株中分离和鉴定了一种核盘菌低毒衰退相关DNA病毒1(SsHADV-1)。该DNA病毒不仅可导致核盘菌毒力衰退,还可以突破核盘菌营养亲和型限制,使病毒进行有效传播,生防潜力巨大。研发可应用于生产实践的生防制剂是实践应用的前提。然而,货架期短是生防制剂实际应用的瓶颈,需要开发新的生防制剂应用方法,发挥其生防价值。种子引发是一种引动加回干的播前种子处理技术,将种子引发技术和生防菌相结合,进行油菜种子生物引发,可以发挥种子引发技术和生防菌两者的优势,延长生防制剂的货架期,增强植物抗病能力,具有广阔的应用前景。本研究在前期研究的基础上,利用微生物液体深层发酵方法,制得DT-8菌株菌丝悬浮液,用于油菜种子生物引发。通过单因素的筛选和基于响应面设计的多因素优化,得到的最佳的引发条件。通过在湖北省鄂州市长港镇峒山社区实验基地和武汉市华中农业大学实验基地的田间防效试验,调查发现在2016—2017年,经DT-8发酵菌丝悬浮液生物引发处理的油菜,菌核病发病率在两地分别降低31.22%和26.83%,而产量在两地分别增加15.82%和24.15%。在2017—2018,经DT-8发酵菌丝悬浮液生物引发处理的油菜,菌核病发病率在两地分别降低15.09%和24.05%,产量在两地分别增加19.61%和13.87%。且处理后对油菜籽的千粒重和含油量没有不良影响,防效和增产效果与油菜盛花期喷施一次15L/亩浓度为667μg/mL咪鲜胺的效果相当。

关键词：核盘菌生防制剂油菜种子生防菌引发处理 DNA 田间应用

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稻瘟菌双分病毒MoPV2特性研究

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植物病理学报 2017年第4期47卷 448-457页

作者：陈伟博梁克力李阳艺谢甲涛程家森付艳苹华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

稻瘟病是稻瘟菌引起的一种世界性病害,每年造成水稻大幅减产。真菌病毒是指能够在真菌体内进行复制和繁殖的病毒,可以作为生物防治的资源。本实验从发病的水稻叶片上采用单孢分离的方法获得纯化培养的稻瘟菌菌株YC13。菌株YC13携带多条d... 详细信息

稻瘟病是稻瘟菌引起的一种世界性病害,每年造成水稻大幅减产。真菌病毒是指能够在真菌体内进行复制和繁殖的病毒,可以作为生物防治的资源。本实验从发病的水稻叶片上采用单孢分离的方法获得纯化培养的稻瘟菌菌株YC13。菌株YC13携带多条dsRNA片段,其中片段F1与Magnaporthe oryzae virus 2(MoV2)的Coat Protein(CP)和RNA-dependent RNA polymerase(RdRp)的氨基酸序列均具有99%的同源性,确定为MoV2的基因组;片段F4、F5序列与双分病毒Penicillium stoloniferum virus F(Ps V-F)的RdRp和CP的氨基酸序列分别具有69%和63%的同源性,命名为Magnaporthe oryzae partitivirus virus 2(MoPV2)。MoPV2的基因组含有2条dsRNA:dsRNA 1编码RdRp,dsRNA 2编码CP。根据MoPV2的RdRp编码的氨基酸序列将MoPV2归属于双分病毒科(Partitiviridae)G ammapartitivirus属,是一种新的真菌病毒。通过病毒粒子转染,将MoPV2转到稻瘟菌菌株RB11。与菌株RB11相比,带毒菌株RB11T25的分生孢子产生量显著减少,并且对大麦活体的致病性也有所降低,但其他生物学特征均无明显的影响。本研究在稻瘟菌中发现了一种新的真菌病毒,该病毒能够使稻瘟菌致病力下降,为稻瘟病的防治提供了潜在的病毒资源。

关键词：稻瘟病菌真菌病毒 MoPV2 双分病毒

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中国柑橘叶斑驳病毒和碎叶病毒发生状况及其分子特性研究

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园艺学报 2017年第1期44卷 113-119页

作者：项周程桥谢宗周王国平洪霓华中农业大学植物科技学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学园艺林学院武汉430070

柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV)和柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)均可侵染柑橘的不同种。为明确CLBV及CTLV在中国柑橘上的发生状况和分子特性,采用RT-PCR技术对来源于中国7个省的342份和346份柑橘样品进... 详细信息

柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV)和柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)均可侵染柑橘的不同种。为明确CLBV及CTLV在中国柑橘上的发生状况和分子特性,采用RT-PCR技术对来源于中国7个省的342份和346份柑橘样品进行检测,检出率分别为9.6%和11.0%。对14个CLBV分离物和15个CTLV分离物的外壳蛋白(Coat protein,CP)基因部分序列分析显示,CLBV分离物间cp核苷酸和编码氨基酸序列相似性分别为82.1%~100%和88.1%~100%,CTLV分离物的cp核苷酸和编码氨基酸序列相似性分别为89.5%~100%和92.5%~100%。测定的14个CLBV分离物在系统进化树中聚为2个组;而CTLV分离物分组不明显,该病毒的系统进化与寄主来源无明显关系。

关键词：柑橘叶斑驳病毒柑橘碎叶病毒检测系统进化分析

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梨轮纹病菌株中真菌病毒间的水平传染测定及分析

梨轮纹病菌株中真菌病毒间的水平传染测定及分析

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中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：胡旺成罗慧洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室

梨轮纹病是由葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea(Moug:Fr)Ces&De Not]引起的一种枝干真菌病害,除为害枝干外,叶片和果实也收到不同程度的感染及发病。近年来,轮纹病危害逐渐加重,造成重大损失,给果树产业带来严重的经济损失。研... 详细信息

梨轮纹病是由葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea(Moug:Fr)Ces&De Not]引起的一种枝干真菌病害,除为害枝干外,叶片和果实也收到不同程度的感染及发病。近年来,轮纹病危害逐渐加重,造成重大损失,给果树产业带来严重的经济损失。研究发现,部分真菌病毒(Mycovirus)可以减弱寄主致病力,可对真菌引起的病害进行有效的防控。真菌病毒可通过感染菌株与未感染菌株的菌丝融合进行水平传播,然而菌株间的营养体不亲和性,诱导细胞发生程序性死亡是目前真菌病毒在应用中最主要的限制性因素。探索影响真菌病毒水平传播的因素及寻找传播率较高且能对致病菌株产生影响的真菌病毒显得尤为重要。本研究以分别感染产黄青霉病毒(BdCV1)LW-C、感染双分体病毒(BdPV1)LW-P、复合感染BdCV1和BdPV1的LW-1梨轮纹菌株以及无病毒感染的Mock菌株作为四组材料,在加入ZnCl2(0.75mM)的燕麦培养基上于25℃培养进行四组梨轮纹菌(LW-1/Mock、LW-C/Mock、LW-P/Mock和LW-C/LW-P)对峙培养的传毒测定,8d后选择后代衍生菌株进行dsRNA检测。结果显示,在LW-1/Mock,LW-C/Mock和LW-P/Mock对峙培养中,Mock衍生菌株的dsRNA检测表明,BdCV1+BdPV1,BdCV1,BdPV1分别传入Mock菌株中;在LW-C/LW-P对峙培养中,衍生菌株的dsRNA检测结果为LW-P衍生菌株中检测到BdPV1和BdCV1,而LW-C衍生菌株中仅检测到BdCV1,无BdPV1传入。采用RT-qPCR对LW-C/LW-P对峙培养获得的衍生菌株进行基因沉默相关基因组份进行定量分析,发现Dicer2、Argo、RdRp表达量在LW-P中均低于LW-C菌株中基因的表达量,推测BdCV1触发了LW-C寄主抗病毒的基因沉默反应,影响了病毒的水平传染效率,目前正采用基因敲除方法分析其基因沉默途径相关基因对病毒水平传播效率的影响,相关验证试验还在进一步研究中。以上结果也明确了携带BdCV1的LW-C可作为一种较好的真菌病毒供体,可为探究LW-C对其他菌株的传毒效率以及引起梨轮纹病菌致病力衰退的分子机制,为真菌病毒用于梨轮纹病害生物防治提供重要的参考依据和分子信息。

关键词：梨轮纹病害葡萄座腔菌水平传染 BdCV1 BdPV1 基因沉默途径

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内生性枯草芽孢杆菌J5对桃流胶病生防潜能的初步研究

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植物病理学报 2017年第5期47卷 696-703页

作者：董施源文生巧徐德鹏王泰雷龙谢甲涛付艳苹李国怀姜道宏程家森华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室武汉430070

桃流胶病是桃树栽培中的常见病害,该病发生原因复杂,目前仍缺乏有效的防控手段。本研究从健康桃树叶片中分离筛选到一株内生细菌J5,J5对桃流胶病菌可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)JMB-122菌株有较强拮抗作用。结合16S r DNA鉴... 详细信息

桃流胶病是桃树栽培中的常见病害,该病发生原因复杂,目前仍缺乏有效的防控手段。本研究从健康桃树叶片中分离筛选到一株内生细菌J5,J5对桃流胶病菌可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)JMB-122菌株有较强拮抗作用。结合16S r DNA鉴定、磷脂脂肪酸鉴定以及Biolog微生物自动鉴定系统的分析结果将J5鉴定为枯草芽孢杆菌。进一步研究发现J5可在桃树内定殖且存活至少2年以上。离体致病力测定表明J5定殖或其发酵滤液处理的桃树枝条在接种JMB-122后产生的病斑长度均较对照的小。J5定殖的桃树枝条接种7 d后病斑长度为14.0 mm,而对照枝条接种后病斑长度达到32.5 mm,表明内生细菌J5能有效抑制桃树流胶病的发生,在防治上有一定应用潜力。

关键词：桃流胶病内生细菌可可毛色二孢生物防治

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基于LC-MS技术的代谢组学方法研究根肿菌对拟南芥代谢的影响

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华中农业大学学报 2017年第5期36卷 30-38页

作者：何璋超高知枭毕凯赵莹程家森谢甲涛付艳苹姜道宏陈桃华中农业大学植物科学技术学院/华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070

为探寻根肿菌侵染拟南芥后期寄主代谢的生物标志物,将罹患根肿病的油菜根切块进行组织培养,获得较为纯化的、单一的根肿菌接种体,与拟南芥种子在1/2MS培养基上共培养,利用液相色谱-质谱联用(LCMS)技术的非靶向代谢组学方法分析根肿菌侵... 详细信息

为探寻根肿菌侵染拟南芥后期寄主代谢的生物标志物,将罹患根肿病的油菜根切块进行组织培养,获得较为纯化的、单一的根肿菌接种体,与拟南芥种子在1/2MS培养基上共培养,利用液相色谱-质谱联用(LCMS)技术的非靶向代谢组学方法分析根肿菌侵染后期拟南芥根部代谢物差异。组织培养结果表明,根肿菌可以在愈伤组织中生长和繁殖;共培养结果显示45d后拟南芥侧根尖端肿大,显微观察显示根肿菌能完成侵染循环;代谢组数据PCA和PLS-DA分析结果显示试验组(接种根肿菌)和对照组(未接种根肿菌)明显分离;OPLSDA分析和t检验结果表明重要的差异代谢物包括油菜素内酯、类黄酮、木质素、萜类、甾体皂苷和磷脂等物质。提示这些物质可能在根肿菌侵染后期时拟南芥与根肿菌的相互作用中起重要作用。

关键词：根肿菌拟南芥组织培养代谢变化 LC-MS

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不同时期的柑橘果实中真菌种类分析

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植物病理学报 2017年第3期47卷 389-397页

作者：赵莹梁克力贾纪春郭大勇程家森谢甲涛陈桃付艳苹华中农业大学湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学园艺林学学院武汉430070

柑橘采后真菌病害发生普遍,对柑橘产业造成了极大的威胁。柑橘体内存在丰富的真菌类群,为了了解柑橘成熟和衰老过程中果实内生真菌的多样性和变化动态,本论文通过MiSeq技术解读真菌ITS区域序列,分别对生长期、成熟期和贮藏期的晚蜜一号... 详细信息

柑橘采后真菌病害发生普遍,对柑橘产业造成了极大的威胁。柑橘体内存在丰富的真菌类群,为了了解柑橘成熟和衰老过程中果实内生真菌的多样性和变化动态,本论文通过MiSeq技术解读真菌ITS区域序列,分别对生长期、成熟期和贮藏期的晚蜜一号果实的果皮和果肉的内生真菌种类进行了分析。发现相比于果肉,果皮中真菌在目和属水平的多样性更为丰富,而成熟期果肉中真菌种类多于果皮。不同生长阶段的两种组织中优势的真菌属也不同,果皮在生长期以Medicopsis和刺盘孢属(Colletotrichum)占绝对优势,成熟期为刺盘孢属,贮藏期以葡萄孢属(Botrytis)、Erythrobasidium和Strelitziana较为常见;而果肉中生长期主要为青霉属(Penicillium)和枝孢菌属(Cladosporium),约占1/4,成熟期半数以上为葡萄孢属,及至贮藏期约90%为链格孢属(Alternaria)和青霉属,其中链格孢属约占2/3。常见植物病原真菌如枝孢菌属(Cladosporium)、巨座壳属(Magnaporthe)、核盘菌属(Sclerotinia)、葡萄孢属(Botrytis)、白粉菌属(Erysiphe)、青霉属(Penicillium)、链格孢属(Alternaria)和镰孢霉属(Fusarium)等在果肉中的数量高于果皮。果肉中存在较大数量的常见植物病原真菌,不同属真菌在不同样品中呈不同的变化动态,暗示采后病变是多种真菌交互作用的结果,采后病害的防治可以提前至开花期。

关键词：柑橘真菌多样性 Illumina MiSeq 采后病害

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梨泡状溃疡类病毒的RT-PCR检测及序列分析

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植物病理学报 2017年第4期47卷 558-562页

作者：朱慧王国平杨作坤文立红陈婕徐文兴洪霓华中农业大学植物科技学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

梨泡状溃疡类病毒（Pear blister canker viroid,PBCVd）为马铃薯纺锤块茎类病毒科（Pospiviroidae）苹果锈果类病毒属（Apscaviroid）成员）。该类病毒在自然条件下主要侵染野生和栽培的梨和苹果,梨和榅桲多数品种感染PBCVd后无明显症状,

关键词：泡状溃疡 RT-PCR检测类病毒序列分析分离物野生梨二级结构分子特性扩增产物克隆病毒属

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根肿菌MAPK级联在病原菌致病过程中生物学功能初步研究

根肿菌MAPK级联在病原菌致病过程中生物学功能初步研究

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：赵艳丽陈桃谢甲涛程家森付艳苹姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学)

有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在细胞生长、繁殖和生存中扮演着重要的角色。在模式植物、哺乳动物、酵母和真菌中,MAPK级联相关基因已经被广泛的研究,但是在根肿菌(Plasmodiophora brassicae)与寄主互作中,该类基因的功能还未曾被报道... 详细信息

有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在细胞生长、繁殖和生存中扮演着重要的角色。在模式植物、哺乳动物、酵母和真菌中,MAPK级联相关基因已经被广泛的研究,但是在根肿菌(Plasmodiophora brassicae)与寄主互作中,该类基因的功能还未曾被报道。由根肿菌引起的十字花科植物根肿病是一种重要病害,对油菜等作物的危害日渐严重。前期笔者课题组完成了根肿菌基因组测序工作,分析预测到根肿菌基因组中含有7个MAPK、3个MAPKK和9个MAPKKK基因。转录组分析表明,其中的6个MAPK,3个MAPKK和2个MAPKKK基因在根肿菌的皮层侵染阶段上调表达。通过酵母双杂交分析,在酵母中证实了PbMAKKK7与PbMAKK3存在相互作用,PbMAKK3和PbMAK1,PbMAKK3和PbMAK3存在相互作用。因此,推测在根肿菌侵染寄主植物过程中可能存在PbMAKKK7-PbMAKK3-PbMAK1/PbMAK3级联反应。U0126是MAPKK的一种特异性的抑制剂,它可以抑制根肿菌休眠孢子的萌发。用U0126抑制剂处理根肿菌的休眠孢子后接种油菜,液体培养35d后,统计结果表明U0126抑制剂可以减轻根肿病的病情指数,降低发病根部根肿菌的含量,并且推迟了根肿菌的发育状态,阳性对照植株根肿菌处于休眠孢子状态,而抑制剂处理后根肿菌仅处于次级游动孢子囊的状态。综合以上研究结果,MAPK信号通路可能在根肿菌的生长、发育和致病过程中起着重要的作用。本研究结果将为根肿菌的致病机理提供分子生物学证据,也为研究根肿菌的基因功能的方法提供参考。

关键词：根肿菌致病分子生物学

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患黄龙病和溃疡病的柑橘韧皮部组织内微生物多样性分析

患黄龙病和溃疡病的柑橘韧皮部组织内微生物多样性分析

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中国植物病理学会2017年学术年会

作者：贾纪春姜道宏谢甲涛程家森陈桃付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学)

柑橘黄龙病是由韧皮部杆菌属类细菌（Candidatus Iiber4bacter）引起的柑橘毁灭性细菌病害。柑橘溃疡病是由薄壁菌门黄单胞杆菌属地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种（Xanthomonas axonopodis ***）引起的柑橘重要细菌性病害。研究柑橘植株... 详细信息

柑橘黄龙病是由韧皮部杆菌属类细菌（Candidatus Iiber4bacter）引起的柑橘毁灭性细菌病害。柑橘溃疡病是由薄壁菌门黄单胞杆菌属地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种（Xanthomonas axonopodis ***）引起的柑橘重要细菌性病害。研究柑橘植株内生微生物和黄龙病菌、溃疡病菌之间的相互关系,有助于从微生态角度防控黄龙病菌和溃疡病菌。本研究利用高通量测序技术对患有黄龙病菌或溃疡病及健康的柑橘植株韧皮部内细菌和真菌多样性进行了测序分析。对OTU进行统计分析发现,韧皮部组织内生细菌群落结构在属水平上,患黄龙病植株与健康植株内群落存在显著差异,而患溃疡病植株与健康植株内微生物群落差异不显著,但三者都是拟杆菌属（Bacteroides）最为丰富。对韧皮部组织内生真菌进行丰度聚类分析,在属水平上,患黄龙病植株、溃疡病柑橘植株与健康植株特异性积累的真菌均存在显著性差异。健康植株中主要以Medicopsis、Periconia、曲霉属（Aspergillus）、核盘菌属（Sclerotinia）、镰刀菌属（Fusarium）内的真菌为主,而患黄龙病植株中主要以毛双孢属（Lsiodiplodia）、德福霉属（Devriesia）和Sarcopodium内的真菌为主,患溃疡病植株中主要是以赤霉属（Gibberella）和Bacidina内的真菌为主。全样本菌群结构分析结果表明柑橘黄龙病菌和溃疡病菌对柑橘韧皮部内生微生物均有不同程度的影响,健康植株韧皮部内生微生物的种类和积累量均显著多于患病植株。

关键词：黄龙病溃疡病微生物多样性分析

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