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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：李波付艳苹谢甲涛程家森姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学武汉430070 农业微生物学国家重点实验室华中农业大学武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学武汉430070

真菌病毒是一种能够感染真菌的病毒,在真菌中分布广泛,而且种类十分丰富,目前只在真菌中报道一例负单链RNA病毒。本研究从陕西省采集分离得到1064株核盘菌菌株,筛选出100株表型异常的菌株,通过高通量测序及RT-PCR技术,发现弱毒菌株SX27...

真菌病毒是一种能够感染真菌的病毒,在真菌中分布广泛,而且种类十分丰富,目前只在真菌中报道一例负单链RNA病毒。本研究从陕西省采集分离得到1064株核盘菌菌株,筛选出100株表型异常的菌株,通过高通量测序及RT-PCR技术,发现弱毒菌株SX276携带有一个负单链RNA(-ssRNA)病毒,该病毒与弹状病毒科病毒有同源性,因此将其暂命名为核盘菌弹状病毒1(Sclerotinia sclerotiorum Rhabdovirus 1,SsRhV1)。

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具有防治水稻纹枯病潜能的根际有益微生物筛选

具有防治水稻纹枯病潜能的根际有益微生物筛选

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：崔琳琳钱瑶吴吞程家森陈桃付艳苹姜道宏谢甲涛湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学) 武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 武汉430070

水稻纹枯病是由茄丝核菌(Rhizoctonia solani)AG-1IA融合亚群引起的水稻常见病害，发病严重的年份，可以造成50％的水稻产量损失。因其具有土传和叶传双重特点，使其成为防治极其困难的一种顽固性病害。在生产中主要采用农业栽培措施、...

水稻纹枯病是由茄丝核菌(Rhizoctonia solani)AG-1IA融合亚群引起的水稻常见病害，发病严重的年份，可以造成50％的水稻产量损失。因其具有土传和叶传双重特点，使其成为防治极其困难的一种顽固性病害。在生产中主要采用农业栽培措施、化学农药、选育抗病品种和生物防治等措施来进行防治水稻纹枯病。近年来生物防治日益受到人们的重视，成为国内外植物病害防治研究的重要内容之一。

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核盘菌和灰葡萄孢受病毒SsPV1感染后弱毒特性的研究

核盘菌和灰葡萄孢受病毒SsPV1感染后弱毒特性的研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：谢甲涛程家森陈桃付艳苹姜道宏华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学植物科学技术学院

核盘菌和灰葡萄孢同属于核盘菌科的世界性分布重要植物病原真菌,在我国造成的危害重大。采用PEG介导灰葡萄孢原生质体的方法,将源自核盘菌弱毒菌株WF-1中的双分病毒科病毒Sclerotinia sclerotiorum partitivirus 1（SsPV1）转染灰葡萄... 详细信息

核盘菌和灰葡萄孢同属于核盘菌科的世界性分布重要植物病原真菌,在我国造成的危害重大。采用PEG介导灰葡萄孢原生质体的方法,将源自核盘菌弱毒菌株WF-1中的双分病毒科病毒Sclerotinia sclerotiorum partitivirus 1（SsPV1）转染灰葡萄孢菌株KY-1后,导致被转染的灰葡萄孢菌株KY-1V表型发生变化。相比于野生型灰葡萄孢菌株,被病毒感染的菌株在PDA培养基上生长速度缓慢,产分生孢子时间提前且产孢子量显著增加,后期产菌核数量少或不产菌核,对番茄、拟南芥等植物的致病力减低。表明病毒SsPV1在灰葡萄孢中可以引致毒力衰退特性,目前已报道的双分病毒可以侵染真菌、植物及原生动物,但是感染该类病毒的自然寄主均不表现明显病毒症状。真菌病毒难以突破营养体亲和型限制进行有效传播是真菌病毒作物生物防治资源进行应用时的瓶颈。菌株WF-1与雪腐核盘菌和小核盘菌对峙培养后,发现对峙后的雪腐核盘菌和小核盘菌生长速度减缓、致病力减弱,呈现弱毒特性。dsRNA提取及RT-PCR证实病毒SsPV1已转移至两个不同种的核盘菌菌株中。首次证明真菌中的dsRNA可以在不同种的真菌间水平传播,表明菌株SsPV1的侵染力强,同时也预示SsPV1在灰葡萄孢不同种间可能也具有强传播能力。因此,SsPV1是可以引致真菌毒力衰退且具有较强传播特性的一种极具生防潜力的新型真菌病毒。

关键词：植物病原真菌核盘菌灰葡萄孢真菌病毒弱毒现象

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荸荠感染两种RNA病毒的鉴定

荸荠感染两种RNA病毒的鉴定

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中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会

作者：张方鹏洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

荸荠属莎草科（Cyperaceae）荸荠属（Eleocharis ***.）一种营养价值较高的水生蔬菜。在生产中,荸荠一经感染病毒,通过球茎无性繁殖后代带毒,导致荸荠产量和品质的降低。目前,国内外对于荸荠病毒病的报道仅有CMV感染和一种DNA病毒（未... 详细信息

荸荠属莎草科（Cyperaceae）荸荠属（Eleocharis ***.）一种营养价值较高的水生蔬菜。在生产中,荸荠一经感染病毒,通过球茎无性繁殖后代带毒,导致荸荠产量和品质的降低。目前,国内外对于荸荠病毒病的报道仅有CMV感染和一种DNA病毒（未发表）。本研究于2014年至今对湖北团风县及广西农科院资源圃的荸荠样品进行了疑似病毒病害调查,采集其叶状茎材料进行小RNA测序,通过数据分析发现样品中潜带两种新的正单链RNA病毒,暂且命名为Water chestnut virus 1（WCV1）和Water chestnut virus 2（WCV2）。利用数据拼接得到的contigs设计引物对其序列进行扩增,获得的序列进行生物信息学分析,WCV1基因组含有的开放阅读框分别编码甲基转移酶（Met）、解旋酶（Hel）、依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）、热激70蛋白（HSP70h）、外壳蛋白（CP）。基于RdRp和HSP70h氨基酸序列分析,WCV1与长线形病毒科（Closteroviridae）其他成员的相似性分别为30%9%和27%7%;与Closteroviridae病毒其他几个属成员进化树分析,WCV1独立为一个组群,推测WCV1为Closteroviridae新属的一个成员。另外,WCV2基因组编码的开放阅读框主要有外壳蛋白（CP）、NTP结合结构域（NTPbinding domin）、蛋白酶（Pro）、依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）;基于RdRp氨基酸序列分析,WCV2与伴生病毒科（Secoviridae）矮化病毒属（Waikavirus）成员相似性最高,为55%7%,在系统进化中与该属其他成员聚集为独立分支,推测WCV2为Waikavirus的一个新成员。此外,基于WCV1HSP70h保守区域以及WCV2 RdRp区域设计引物对采集自湖北团风和广西农科院的样品进行检测。结果表明,湖北样品中携带有WCV1,广西样品复合感染WCV1和WCV2,且WCV1核苷酸序列分析表明来源于湖北和广西样品的相似性为98%9%。本研究首次明确了荸荠样品感染两种新的RNA病毒,相关内容还在进一步研究中。

关键词：荸荠小RNA测序 Closteroviridae Secoviridae HSP70h RdRp

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荸荠潜带一种DNA病毒,为Soymovirus一个新种

荸荠潜带一种DNA病毒,为Soymovirus一个新种

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：张方鹏洪霓王国平王利平华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室

荸荠是一种营养价值较高的蔬菜,目前报道仅感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。2012年至今对荸荠种植区和资源圃进行了疑似病毒病害调查,发现一些荸荠样品表现为扭曲、矮化、褪绿等症状。本研究从湖北团风县采集的表现为褪绿... 详细信息

荸荠是一种营养价值较高的蔬菜,目前报道仅感染黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)。2012年至今对荸荠种植区和资源圃进行了疑似病毒病害调查,发现一些荸荠样品表现为扭曲、矮化、褪绿等症状。本研究从湖北团风县采集的表现为褪绿,皱缩,扭曲疑似病毒病症状荸荠样品,于华农果树脱毒中心温室进行盆栽保存,取其叶状茎材料进行深度测序,将所得片段进行拼接后得到contigs,在数据库中比对发现与Peanut chlorotic streak virus(PCSV)核苷酸序列相似性较高,设计引物扩增其基因组全长序列,获得该DNA病毒的基因组全长序列为7.5kb,全长核苷酸序列同源性与大豆褪绿斑驳病毒属(Soymovirus)成员最高,为48%2%。软件预测其该病毒基因组全长序列含有8个ORFs,基于序列生物信息学分析推测其ORFⅠ编码运动蛋白(movement protein,MP)ORFⅣ编码外壳蛋白(coat protein,CP),ORFV编码多聚蛋白,包括逆转录酶蛋白,天冬氨酸蛋白酶和核糖核酸酶(reverse transcriptase,aspartic proteinase和ribonuclease H),ORFⅥ编码转录激活蛋白(translational transactivator protein),其他几个ORFs在数据库中比对不到任何同源性,其功能未知。WCV不同ORFs核苷酸序列与花椰菜花叶病毒科(Caulimoviridae)不同成员进化树分析显示该病毒聚集在Soymovirus组群中,与该组群其他种病毒处于不同分支,该DNA病毒为该属中一新成员,暂命名为WCV(Water chestnut DNA virus)。此外,采集自广西和湖北疑似病毒症状和无任何症状表现的荸荠样品进行WCV检测,结果表明100%荸荠潜带WCV;进而采用WCV cp基因标记探针进行Southern杂交,发现荸荠植物基因组DNA有杂交条带,结果表明WCV序列整合于荸荠基因组,为内源性DNA病毒,是否存在游离形式正在研究中。另外,通过对荸荠样品小RNA序列分析,结果表明来源于WCV的荸荠小RNA(virus-derived small RNAs,vsRNA)主要为21和22nt,22nt为峰值,vsRNA对负义链具有一定的偏向性;vsRNA在WCV基因组中分布不均匀,在一些区域存在沉默热点,推测该病毒触发了寄主基因沉默机制,相关研究需进一步证实。

关键词：荸荠 Soymovirus Southern杂交小RNA测序 virus-derived small RNAs

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高温对感染ASGV沙梨离体植株体内microRNAs的影响

高温对感染ASGV沙梨离体植株体内microRNAs的影响

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：刘娟张雪娇洪霓王国平王利平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室石河子大学

我国梨产区种植的梨树普遍感染苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV),对树势、产量和品质都有严重影响。目前,防治梨树病毒的有效措施是获得无病毒苗木,而热处理结合茎尖组织培养是获取无病毒苗的主要方法,但有关热处理脱除病... 详细信息

我国梨产区种植的梨树普遍感染苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV),对树势、产量和品质都有严重影响。目前,防治梨树病毒的有效措施是获得无病毒苗木,而热处理结合茎尖组织培养是获取无病毒苗的主要方法,但有关热处理脱除病毒的分子机理尚不清楚,严重影响了病毒的脱除效率。最近文献也报道了许多关于外界环境条件下植物寄主体内microRNA(miRNA)调控与病毒之间的互作研究。本研究对37℃热处理和作为对照的24℃正常培养1 d和5d的感染ASGV沙梨"金水二号"茎尖组织部位混合样品进行取样作为研究材料,采用小RNA高通量测序发掘了热处理条件下沙梨茎尖组织部位相应的miRNAs,鉴定了保守的和新的miRNAs;对其高温条件下梨差异表达miRNAs调控的靶标基因进行GO功能分析,结果表明miRNAs调控的靶基因涉及代谢,刺激反应等生物过程,参与抗病防卫反应,激素信号转导途径等,揭示了高温诱导下miRNA在梨寄主基因调控网络方面有重要作用,推测其在寄主与病原互作中起重要调控作用。此外对热处理条件miRNAs及靶基因与病毒累积量之间的关系进行了分析,结果表明高温条件下差异表达的miRNAs在梨茎尖与基部部位的表达模式不同,具有组织特异性。关联分析了miRNA靶标基因在梨茎尖和基部的表达模式,结果表明茎部组织miRNA大多负调控相应抗病防御作用的靶标基因。Real-time检测结果显示ASGV cp基因在热处理条件下梨茎尖和基部表达量均降低,表明高温抑制了病毒在寄主体内的复制。因此,高温处理条件下miRNA及调控靶标基因在梨茎尖和基部表达模式与病毒积累量之间的对应分析结果揭示了miRNA参与调控靶标基因在降低梨茎尖病毒浓度过程中具有重要的调控作用。研究结果为明确高温热处理脱梨茎尖除病毒的分子机理提供了一定的信息。

关键词：沙梨热处理高通量小RNA测序 ASGV miRNA

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来源于湖北省枣疯病植原体分离物16S rDNA和rp基因的序列分析

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植物病理学报 2014年第1期44卷 1-7页

作者：王利平洪霓王国平华中农业大学湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

以田间采集的来源于我国湖北省枣树产业主产区随州市随县种植的表现为"枣疯病"症状的枣树分离株为试材,对其16S rDNA和核糖体蛋白(ribosomal protein,rp)基因采用Nested-PCR进行扩增以及序列分析。结果表明,湖北JWB-Hubei植... 详细信息

以田间采集的来源于我国湖北省枣树产业主产区随州市随县种植的表现为"枣疯病"症状的枣树分离株为试材,对其16S rDNA和核糖体蛋白(ribosomal protein,rp)基因采用Nested-PCR进行扩增以及序列分析。结果表明,湖北JWB-Hubei植原体分离物16S rDNA基因的核苷酸序列与我国山东、河南等地的分离株一致率均为99%以上,在进化树中位于同一亚组的不同进化分支;虚拟RFLP图谱分析表明,JWB-Hubei属于16SrV-B亚组一个成员,与其进化树分组结果一致。JWBHubei分离株rp基因的核苷酸序列也与我国山东、陕西等地区的分离株一致率均为99%以上,在进化树中聚为同一亚组,与报道的基于RFLP分类属于rpV-C亚组的中国枣疯病分离物(JWB)聚集于同一亚组不同分支。该研究结果明确了湖北省枣疯病植原体的分类地位以及与来源于我国不同地区枣疯病分离株之间的遗传进化关系,为进一步研究植原体的株系划分、基因遗传变异研究提供了理论基础。

关键词：枣疯病 16S rDNA rp基因进化树分析

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真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘四谢甲涛程家森姜道宏付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协... 详细信息

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进化。目前关于真菌病毒与寄主互作的研究主要集中在栗疫病菌弱毒病毒与栗疫病菌之间的互作,其他真菌病毒与寄主（病毒与核盘菌等）的互作体系也已陆续建立。前期研究过程中克隆得到真菌病毒BfHV-2/10HN454,该病毒基因组由6 251个核苷酸（不含Poly A结构）组成,含有两个推定的开放性阅读框（ORF）。ORF1编码具有RdRp结构域特性的蛋白,基于该结构域分析,病毒BfHV-2/10HN454与Hypoviridae科的病毒亲缘关系较近;ORF2推定编码的蛋白与人及动物的epidermal growth factor receptor（EGFR）pathway substrate（EGFRS）蛋白具有一定的相似性。其中与西印度海牛（Trichechus manatus latirostris）的EGFRS蛋白（XP04384482.1）相似性最高为25%,E值为0.053。保守结构域搜索发现该蛋白存在Chromosome segregation ATPases（Cell division and chromosome partitioning）保守结构域,E值为1.17e-07,并将该蛋白命名为EGFRS-1ike蛋白。EGFRS蛋白在生物体内与突触囊泡的回收和EGFR受体的内吞及其在质膜上的定位相关,但在病毒基因组中尚未见报道。该蛋白的类似基因为何会出现在真菌病毒BfHV-2/10HN454基因组中,其在寄主体内是否会表达并对寄主产生影响?为了解答该问题,我们通过农杆菌介导转化（ATMT）技术将该基因分别导入核盘菌和灰葡萄孢菌中,同时获得了生长缓慢、畸形扇变、菌丝尖端变细且分支增多、产孢量降低及致病力减弱的转化子;进一步通过DAPI染色及电镜观察细胞核,发现转化子的细胞核形态异常、核仁较少见且发生聚集现象。这些生物学表型与原始携带病毒BfHV-2/10HN454的菌株10HN454表型相似。说明该蛋白可能在核盘菌和灰葡萄孢菌中表达并且具有一定的功能,对寄主产生了一定的影响,相关分子机理研究正在进行之中。

关键词：真菌病毒 EGFRS-like蛋白病毒与寄主互作

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禾谷镰刀菌中microRNA的检测及其通路相关基因的功能研究

禾谷镰刀菌中microRNA的检测及其通路相关基因的功能研究

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：曾文萍王颖付艳苹谢甲涛姜道宏陈桃程家森湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室/华中农业大学

禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的小麦赤霉病(Wheat head scab)为小麦最主要的病害之一,世界各地流行发生,近年为害日趋严重。MicroRNA(miRNA)是一类在真核生物中普遍存在的、内源性非编码小分子RNA,其可在转录后调节靶基因表达... 详细信息

禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的小麦赤霉病(Wheat head scab)为小麦最主要的病害之一,世界各地流行发生,近年为害日趋严重。MicroRNA(miRNA)是一类在真核生物中普遍存在的、内源性非编码小分子RNA,其可在转录后调节靶基因表达,在正常发育以及疾病发生过程中具有重要作用。目前有关植物病原真菌中miRNA研究也日益增多,而且最近研究表明miRNA在植物病原真菌的致病过程中也发挥重要作用。本研究以产孢前后及致病过程的禾谷镰刀菌为材料,采用高通量测序技术进行了small RNA(10～34nt)测序,并将测序得到的small RNA比对Genbank、Rfam(10.1)、miRBase19等数据库从而进行分类注释,并结合小RNA在基因组上侧翼序列的二级结构进行分析,最终预测出28个可能的miRNA或milRNA,这些序列长度分布具有两个高峰(21 nt与24nt),在5′末端无明显碱基偏好。我们同时应用RT-PCR及Northern blot技术对部分miRNA进行了验证,检测到了部分预测miRNA的前体及成熟体结构。此外,我们采用分割标记法对小RNA通路相关基因DCL1、DCL2进行了单敲除及双敲除,获得了相应的敲除转化子。通过对敲除转化子的部分表型分析,目前暂无发现明显变化,而这两个基因在禾谷镰刀菌microRNA通路中的相关功能及作用机制等正在深入研究中。

关键词：禾谷镰刀菌 MicroRNA 基因敲除

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灰葡萄孢致病相关基因BC1G07326的克隆及其功能验证

灰葡萄孢致病相关基因BC1G07326的克隆及其功能验证

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘信强谢甲涛付艳苹姜道宏陈桃李国庆程家森湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学)

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害,灰葡萄孢的寄主范围极其广泛,能侵染400多种植物,造成严重的经济损失。灰葡萄孢对寄主的致病作用是一个极其复杂的过程,多种致病因子参与其中,例如,细胞壁... 详细信息

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是一种世界性分布的重要植物病害,灰葡萄孢的寄主范围极其广泛,能侵染400多种植物,造成严重的经济损失。灰葡萄孢对寄主的致病作用是一个极其复杂的过程,多种致病因子参与其中,例如,细胞壁降解酶、毒素、抵抗寄主防卫反应的酶类及小分子物质。灰霉病的防治是农业生产上的难题之一,从分子水平上探究灰葡萄孢的致病机制可为灰霉病的防治奠定一定的基础。本研究主要利用基因敲除和基因互补技术对灰葡萄孢基因BC1G7326的功能进行初步研究,目前主要取得以下研究结果。灰葡萄孢基因BC1G7326在致病过程中表达显著上调,该基因开放阅读框1 911bp,包含12个外显子,11个内含子,编码一种含有346个氨基酸的未知蛋白。通过SingalP4.1 server软件预测显示,位于其N端的前20个氨基酸为信号肽序列,因此,推测该蛋白可能是分泌蛋白。通过Blast分析表明,BC1G7326蛋白仅在核盘菌中发现了同源蛋白,未发现保守结构域。我们以灰葡萄孢菌株B05.10为研究材料,利用同源重组的方法对该基因进行了敲除,采用PEG介导原生质体转化技术共获得20个敲除转化子,通过PCR和Southern blot技术对部分敲除转化子进行验证,并对敲除转化子的生物学特性进行了初步研究。结果显示,与出发菌株B05.10相比,敲除转化子的生长速度、菌丝形态、菌落形态和产酸没有显著差异,致病力显著减弱。关于敲除转化子的其他生物学特性的研究正在进行当中。

关键词：灰葡萄孢致病 BC1G07326

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