检索结果-内蒙古大学图书馆

中国植物病理学会2016年学术年会

作者：曲正谢甲涛付艳萍陈桃程家森姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学植物科学技术学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

菌核病是由核盘菌引起的重要病害,严重影响了油菜、大豆和向日葵等作物及蔬菜的生产安全。本课题组前期从感染油菜的菌株DT-8中分离和鉴定了一种核盘菌低毒衰退相关DNA病毒1(SsHADV-1),该DNA病毒不仅可导致核盘菌毒力衰退,而且可以在核... 详细信息

菌核病是由核盘菌引起的重要病害,严重影响了油菜、大豆和向日葵等作物及蔬菜的生产安全。本课题组前期从感染油菜的菌株DT-8中分离和鉴定了一种核盘菌低毒衰退相关DNA病毒1(SsHADV-1),该DNA病毒不仅可导致核盘菌毒力衰退,而且可以在核盘菌不同营养亲和型菌株间进行有效传播,具有很大的生防价值,有潜力发展成一种新型生物"杀菌剂"。本研究在前期研究的基础上,通过优化发酵条件,发现在100r/min,不调节pH值,初始接种浓度为9%的条件下,获得的发酵产物干重最高,可达(5.329±0.750)g/L。产物经研磨,添加防腐剂0.05%硫酸链霉素、防霉剂液体石蜡油、保护剂4%海藻糖、防冻剂甘油、紫外保护剂核黄素后,得到了活菌数达10CFU/mL的水悬浮剂。制剂的悬浮率达91.83%,消泡性优良,在4℃下贮藏28d后带毒率达65%,且贮藏期间没有腐败发霉现象。这些发酵条件、助剂和剂型的优化,为DT-8菌株的规模化生产和商品制剂开发奠定了基础。田间防效实验在湖北省鄂州市、江陵县试验田进行。设置蕾薹期喷施、始花期喷施、盛花期喷施3个单独生长期喷施处理,蕾薹期、始花期连续喷施和蕾薹期、始花期、盛花期连续喷施2个不同生长期连续喷施处理。每次以每亩施用10%的发酵液15L为标准进行喷施。在收获期调查各处理发病情况,证明我们研制的DT-8制剂在油菜蕾薹期、始花期、盛花期连续喷施后,油菜菌核病的发病程度均显著降低,可以起到明显的防病效果,具有一定的应用前景。

关键词：弱毒菌株 DT-8 剂型

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猕猴桃病毒A和B的RT-PCR检测及分子变异初步研究

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园艺学报 2015年第4期42卷 665-671页

作者：郑亚洲王国平周菊芳朱晨熹王利平徐文兴洪霓华中农业大学植物科技学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 农业微生物学国家重点实验室武汉430070

为明确猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,Ac VA)和猕猴桃病毒B(Actinidia virus B,Ac VB)在中国猕猴桃(Actinidia sp.)上的侵染状况和分子特性,采用RT-PCR技术对151份猕猴桃样品的Ac VA和Ac VB进行检测,检出率分别为15.2%和17.9%,所收集的... 详细信息

为明确猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,Ac VA)和猕猴桃病毒B(Actinidia virus B,Ac VB)在中国猕猴桃(Actinidia sp.)上的侵染状况和分子特性,采用RT-PCR技术对151份猕猴桃样品的Ac VA和Ac VB进行检测,检出率分别为15.2%和17.9%,所收集的6种猕猴桃样品中均检测到一种或两种病毒。发现Ac VA的ORF1、ORF4和ORF5扩增片段序列存在较大分子变异,不同分离物的269 bp片段(ORF1)核苷酸序列相似性为77.3%~99.3%。在基于各扩增片段核苷酸序列的系统进化树中,Ac VA分离物聚为2~3组。采用引物Ac VB5F/5R扩增获得20个Ac VB分离物的342 bp或338 bp的ORF5片段,核苷酸序列相似性为81%~100%,与新西兰Ac VB分离物TP7-93B相应片段的核苷酸序列相似性为83.9%~99.7%,在系统进化树中聚为3组。

关键词：猕猴桃猕猴桃病毒A 猕猴桃病毒B RT-PCR 序列分析

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腐烂病菌的GFP标记及其在梨叶片组织中的侵染和扩展观察

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果树学报 2015年第6期32卷 1195-1200,I0004,I0005页

作者：贾娜娜翟立峰白晴陈晓忍王彩霞洪霓王国平华中农业大学植物科学技术学院湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 青岛农业大学山东青岛266109

【目的】明确梨腐烂病菌强、弱致病力菌株在梨树叶片组织中的侵染及扩展情况。【方法】利用农杆菌介导的遗传转化(agrobacterium-mediated transformation technique,ATMT)方法对梨腐烂病菌强、弱致病力菌株进行绿色荧光蛋白(green loor... 详细信息

【目的】明确梨腐烂病菌强、弱致病力菌株在梨树叶片组织中的侵染及扩展情况。【方法】利用农杆菌介导的遗传转化(agrobacterium-mediated transformation technique,ATMT)方法对梨腐烂病菌强、弱致病力菌株进行绿色荧光蛋白(green looresent protein,GFP)标记,并筛选出和野生型菌株比较在生长速度、培养特性以及致病力都没有发生显著变化的阳性转化子菌株;利用荧光显微技术观察其在梨树叶片组织中的侵染和扩展,比较强、弱致病力菌株的侵染差异。【结果】强、弱致病力菌株在叶片上侵染存在差异。菌丝主要在叶片的上表皮扩展,菌丝扩展前端的叶片组织颜色发生变化,形成一段变色带,强致病力菌株侵染形成的变色带较弱致病力菌株形成的变色带宽,强致病力菌株菌丝在叶片组织上的分布较稀疏。【结论】梨腐烂病菌菌丝主要在叶片的上表皮组织扩展;强致病力菌株的侵入能力较强,其在叶片上扩展时菌丝分布较稀疏,扩展前端形成的变色带宽。

关键词：梨腐烂病菌农杆菌介导遗传转化绿色荧光蛋白标记侵染扩展

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分析来源于病毒的小RNA深度测序数据挖掘新的核盘菌病毒

分析来源于病毒的小RNA深度测序数据挖掘新的核盘菌病毒

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中国植物病理学会第十二届青年学术研讨会

作者：王前前程家森付艳苹陈桃姜道宏谢甲涛湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

真菌病毒(fungal virus或mycovirus)是一类感染真菌并在其中复制的病毒,在真菌中分布广泛,而且种类丰富。课题组前期分离得到一株形态异常核盘菌菌株SZ-150,该菌株对油菜及其他寄主表现出弱毒性状,是一株典型弱毒菌株。提取菌株dsRNA并... 详细信息

真菌病毒(fungal virus或mycovirus)是一类感染真菌并在其中复制的病毒,在真菌中分布广泛,而且种类丰富。课题组前期分离得到一株形态异常核盘菌菌株SZ-150,该菌株对油菜及其他寄主表现出弱毒性状,是一株典型弱毒菌株。提取菌株dsRNA并克隆其序列,先前确定菌株SZ-150中含有两种病毒(SsRV1和SsHV1)和一种卫星RNA(SatH)。其中,病毒SsRV1与来自葱属葡萄孢的双节段病毒BpRV1属于同一个种的不同菌株,病毒SsHV1与感染板栗疫病菌的低毒病毒科(Hypoviridae)中的低毒病毒3(Cryphonectria hyypovirus 3)有很高同源性,而SatH是病毒Ss-HV1的卫星RNA。为了验证菌株SZ-150是否仅仅含有以上病毒信息,对该菌株中来源于病毒的小RNA进行了深度测序,进一步对菌株中病毒产生的小RNA序列分析拼接。结果发现,除了获得来源于上述两种病毒及卫星RNA的小RNA信息外,还获得了来自另外一种未被报道的RNA病毒(暂且命名为SsTV1)的小RNA信息。随后根据小RNA序列信息对该病毒进行序列拼接、克隆,获得了病毒SsTV1不完整序列。序列分析表明该病毒3′端具有Poly(A)结构,仅含有一个开放阅读框,编码1 757个氨基酸的多聚蛋白,含有甲基转移酶(methyltransferase)、解旋酶(helicase)以及依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)三个保守结构域,与芜菁花叶病毒科(Tymoviridae)内的病毒具有低同源性,相似性仅为26%左右。遗传聚类分析表明SsTV1隶属于芜菁花叶病毒目(Tymovirales),且与Tymoviridae的病毒在进化树中关系最近,但其独立成为一支。而且病毒SsTV1基因组结构与隶属于Tymoviridae的典型病毒有显著区别,因此,初步推定SsTV1是隶属于Tymovirales目的一个全新正单链RNA病毒,建议以该病毒为模式种建立一个新病毒科。利用原生质体再生技术,得到一株含有SsTV1病毒但致病力等表型正常的再生菌株,由此推断病毒SsTV1对寄主的致病力等生物学特性影响有限。对病毒SsTV1的分子特性及其在病毒中的进化关系正在进一步分析中。

关键词： RNA 深度测序同源性数据挖掘

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核盘菌弱毒菌株767中所携带病毒Ss-NorV的分子特性研究

核盘菌弱毒菌株767中所携带病毒Ss-NorV的分子特性研究

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：郑丹程家森陈桃付艳苹姜道宏谢甲涛湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是一种世界性分布的植物病原真菌,其引发的油料作物菌核病,严重影响作物的产量和质量。部分真菌病毒可引起植物病原真菌的弱毒特性,使之具有防治病害的潜能,而且利用弱毒菌株防治病害的策略已经成功应... 详细信息

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是一种世界性分布的植物病原真菌,其引发的油料作物菌核病,严重影响作物的产量和质量。部分真菌病毒可引起植物病原真菌的弱毒特性,使之具有防治病害的潜能,而且利用弱毒菌株防治病害的策略已经成功应用在板栗疫病的防治实践中。因此,从核盘菌群体中筛选与其弱毒相关且具有生防潜力的真菌病毒,是防治作物菌核病的重要生物防治策略之一。前期对采自湖南省、黑龙江省及内蒙古等省的核盘菌菌核进行分离纯化,根据菌落形态特征,共筛选共得到150余株异常菌株(菌落扩展速度慢、产色素多、气生菌丝发达、产菌核异常等特性)。通过高通量测序技术,发现一种与侵染哺乳动物的正单链Norovirus病毒有同源性的真菌病毒,并将该病毒暂且命名为Ss-NorV。借助RT-PCR技术,证实病毒Ss-NorV存在于核盘菌菌株767中。相比与不携带病毒且基因组测序菌株1980,菌株767具有以下异常特性:菌落扩展速度缓慢,菌落不规则,产黄色色素,对油菜叶片无致病力,因此,菌株767是一株典型的弱毒菌株。为了进一步明确病毒Ss-NorV的分子特性,采用末端克隆技术及测序分析,获得Ss-NorV全长cDNA序列。Ss-NorV全长含有11022核苷酸,包含两个推定的开放阅读框(ORF)。其中ORF1编码含有143个氨基酸的推定假定蛋白,该蛋白序列与NCBI数据库中序列无任何相似性。ORF2编码含有3330个氨基酸的推定多聚蛋白,在该蛋白C-端仅包含一个RDRP保守结构域,而其他区域功能未知;多重比对分析,Ss-NorV的RDRP结构域与杯状病毒科(Caliciviridae)部分病毒的RDRP有同源性,相似性为27%。基于此,推测病毒Ss-NorV是一种新型真菌病毒,该病毒与核盘菌弱毒特性的相关性,正在通过病毒水平传播、原生质体再生等策略进行验证。

关键词：弱毒菌株核盘菌 Ss-NorV 分子特性

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根肿菌侵染早期分泌蛋白的筛选及其功能研究

根肿菌侵染早期分泌蛋白的筛选及其功能研究

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：高知枭陈桃谢甲涛程家森付艳苹姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室(华中农业大学) 农业微生物学国家重点实验室(华中农业大学)

芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae）在分类上属于原生动物界,根肿菌门（Plasmodiophoromycota）,是活体专性寄生的土传病原菌,可以危害100多种十字花科植物,引起主根或侧根形成指状、棒状或球形的肿瘤,已经在全球超过60个国家或地...

芸薹根肿菌（Plasmodiophora brassicae）在分类上属于原生动物界,根肿菌门（Plasmodiophoromycota）,是活体专性寄生的土传病原菌,可以危害100多种十字花科植物,引起主根或侧根形成指状、棒状或球形的肿瘤,已经在全球超过60个国家或地区发生危害,造成严重的产量损失。目前,根肿菌不能人工纯培养,也无法进行遗传转化,因而在分子水平的研究极其有限。本研究建立了利用水培法培养油菜,高效收集侵染早期根肿菌游动孢子的方法,以休眠孢子为对照,提取其总蛋白;通过SDS-PAGE电泳,蛋白质胶内酶解以及肽段提取,进行液相串联质谱（liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）分析。质谱数据与根肿菌基因组进行匹配,得到了接种油菜48h后根肿菌特异表达的207个蛋白。根据稻瘟菌及卵菌等病原物预测分泌蛋白方法,对所得蛋白信号肽、跨膜结构域、GPI锚定位点等经过预测分析,结果显示,其中可能的分泌蛋白有11个。同时,结合根肿菌侵染油菜的转录组数据,筛选其中特异表达的分泌蛋白10个进行后续研究。目前已经克隆其中5个分泌蛋白,并对其中两个利用TRV在烟草中进行了外源表达。同时将在油菜中表达相关分泌蛋白编码基因,在获得转基因植株后接种根肿菌,观察其对根肿菌侵染的反应,并进行蛋白细胞定位,寄主互作蛋白筛选等深入研究。

关键词：

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DNA病毒SsHADV-1侵染核盘菌引发寄主的差异表达基因的分析鉴定与抗病毒机制相关基因的功能研究

DNA病毒SsHADV-1侵染核盘菌引发寄主的差异表达基因的分析鉴定与...

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：赵真珍谢甲涛程家森陈桃付艳萍姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

核盘菌是广泛分布的十分重要的植物病原真菌,引发多种农作物的菌核病病害。实验室前期从油菜罹病植株的菌核中分离获得了带有弱毒特性的核盘菌菌株DT-8,并经克隆和测序分析发现2.0 kb DNA片段的单链环状DNA病毒,首次证实丝状真菌核盘菌... 详细信息

核盘菌是广泛分布的十分重要的植物病原真菌,引发多种农作物的菌核病病害。实验室前期从油菜罹病植株的菌核中分离获得了带有弱毒特性的核盘菌菌株DT-8,并经克隆和测序分析发现2.0 kb DNA片段的单链环状DNA病毒,首次证实丝状真菌核盘菌中存在ssDNA病毒SsHADV-1。挑取DT-8的菌丝尖端进行培养,可以获得不携带这两条DNA片段的培养物DT-8VF,菌株DT-8VF在生长、菌核形成和致病力等方面与正常菌株没有显著区别。为了明确SsHADV-1影响核盘菌致病力的分子机理,本研究以感染真菌病毒的弱毒菌株DT-8和无毒菌株DT-8VF为材料进行了RNA-seq测序分析,结果发现在DT-8中有930个基因表达显著上调,337个基因表达显著下调(p-val值≤0.05,log2 FOLD CHANGE的绝对值≥2)。对显著上调和显著下调表达的基因用spring软件预测它们之间可能存在的互作网络关系。发现DT-8中337个显著下调表达的基因编码的蛋白存在较为紧密的互作网络关系。从显著差异表达基因GO功能分析和互作网络关系的结果上看,DT-8菌株中大部分被抑制表达的基因与碳代谢,三羧酸循环,丙酮酸盐代谢,乙醛酸代谢,乙酸代谢,氧化磷酸化半胱氨酸和甲硫氨酸代谢等相关,而这些代谢与寄主核盘菌的生长发育也密切相关,表明在被真菌病毒SsHADV-1侵染后,核盘菌的生长代谢在整体上受到一定影响。同时我发现角质酶、果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶以及蛋白酶和淀粉酶等相关基因在DT-8菌株中受到明显抑制,生成草酸唯一来源草酰乙酸的相关基因以及草酰乙酸水解酶基因在DT-8菌株中也显著下调,而与草酸降解有关的草酸脱羧酶在DT-8菌株中上调,结果提示真菌病毒SsHADV-1感染对核盘菌致病重要因子草酸及细胞壁降解酶等均有重要影响。

关键词：核盘菌 SsHADV-1 相关基因抗病毒机制差异表达基因 DNA 分析鉴定功能研究

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核盘菌中一个与病毒SsHADV-1侵染相关基因的功能研究

核盘菌中一个与病毒SsHADV-1侵染相关基因的功能研究

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：张春燕谢甲涛程家森陈桃付艳萍姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

核盘菌是一种世界性分布的植物病原真菌,能够侵染许多重要的农作物,造成严重的经济损失。核盘菌弱毒相关DNA病毒SsHADV-1可导致核盘菌出现严重的弱毒现象,目前该病毒导致核盘菌弱毒的分子机理仍不清楚。为了明确病毒SsHADV-1与核盘菌分... 详细信息

核盘菌是一种世界性分布的植物病原真菌,能够侵染许多重要的农作物,造成严重的经济损失。核盘菌弱毒相关DNA病毒SsHADV-1可导致核盘菌出现严重的弱毒现象,目前该病毒导致核盘菌弱毒的分子机理仍不清楚。为了明确病毒SsHADV-1与核盘菌分子互作模式,探究该病毒引起核盘菌致病力衰退的机理,课题组前期利用Solexa技术获得了核盘菌受SsHADV-1侵染前后的基因表达谱,找到了多个表达上调或下调明显的差异基因。本研究从中挑选了病毒侵染后表达明显下调的SS1G6180基因进行了深入研究。SS1G6180基因全长1498bp,有3个外显子和两个内含子,编码具有410个氨基酸的假定蛋白,软件预测显示编码蛋白有Pal1和filamentead两个保守结构域。RT-PCR结果证实SS1G6180在核盘菌受病毒SsHADV-1侵染后显著下调。为了深入研究该基因的生物学功能,通过农杆菌介导转化正常菌株EP-1PNA367,获得了SS1G6180基因的22个超表达转化子和15个沉默转化子,并通过Real-time PCR定量分析进行了验证,选取了表达量差异明显的3个超表达转化子和3个沉默转化子进行表型分析。研究结果表明,超表达SS1G6180基因对核盘菌的菌丝生长和致病力均无明显影响,但SS1G6180基因的沉默转化子生长速度减慢,菌丝尖端发生扭曲,致病力减弱,在高盐和高渗环境下生长受到显著抑制,说明该基因对核盘菌的生长和致病有一定的影响,该基因是否参与病毒SsHADV-1与核盘菌互作,并导致核盘菌毒力衰退还有待进一步研究。

关键词：核盘菌 SsHADV-1 功能研究相关基因

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核盘菌线粒体病毒多样性研究

核盘菌线粒体病毒多样性研究

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：许智勇谢甲涛程家森陈桃付艳苹姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）是一种典型死体营养型植物病原真菌,可以引起油菜、大豆及向日葵等油料作物菌核病,每年造成巨大经济损失。前期研究表明核盘菌自然群体中含有种类丰富的病毒,有些弱毒相关病毒具有防治菌核病的潜力,...

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）是一种典型死体营养型植物病原真菌,可以引起油菜、大豆及向日葵等油料作物菌核病,每年造成巨大经济损失。前期研究表明核盘菌自然群体中含有种类丰富的病毒,有些弱毒相关病毒具有防治菌核病的潜力,如真菌首例DNA病毒SsHADV-1在油菜田间具有降低菌核病发病率的能力。线粒体病毒仅在真菌中发现,一般认为存在于寄主线粒体中,其基因组是目前所发现的真菌病毒中最为简单的一类病毒,仅含有一个编码RDRP（RNA依赖的RNA聚合酶）的开放阅读框。近期,在核盘菌中陆续发现隶属于7个线粒体病毒种的12个病毒株系,分别分离自美国、新西兰和中国的核盘菌菌株,而且多数线粒体病毒与核盘菌弱毒菌株相关且多为复合侵染核盘菌菌株。为了进一步深入认识线粒体病毒在核盘菌群体中的分布及种类多样性,挖掘更多与核盘菌弱毒相关线粒体病毒,本研究通过深度高通量测序技术筛选新型核盘菌线粒体病毒。从陕西、四川、湖南、黑龙江和甘肃等省罹患菌核病的农作物植株上收集了大量的核盘菌菌核,经在PDA培养基上培养和纯化,筛选获得菌落形态异常的菌株200余株。经测序、同源比对分析,结合国际病毒分类委员会线粒体分类标准,发现用于测序的异常核盘菌菌株中至少含有54个线粒体病毒新种。线粒体病毒新种的发现,不仅表明核盘菌群体具中线粒体病毒呈现极大的丰富多样性,而且为研究线粒体病毒与寄主互作体系、线粒体病毒进化提供了丰富研究材料。目前正在克隆分析所发现的核盘菌线粒体病毒的分子特性、种类分布及其与菌株生物学特性的相关性。

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茄丝核菌两个双分病毒分子特性及其对寄主潜在影响的研究

茄丝核菌两个双分病毒分子特性及其对寄主潜在影响的研究

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中国植物病理学会2015年学术年会

作者：吕锐玲谢甲涛程家森陈桃付艳苹姜道宏湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学武汉430070 农业微生物学国家重点实验室华中农业大学武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学武汉430070

茄丝核菌(Rhizoctonia solani)是引起水稻纹枯病的重要植物病原真菌。真菌病毒是感染真菌的一类病毒，在植物病原真菌中广泛存在。利用弱毒相关真菌病毒在板栗疫病防治上已成功实践，近期研究也表明DNA真菌病毒防治油菜菌核病效果明显...

茄丝核菌(Rhizoctonia solani)是引起水稻纹枯病的重要植物病原真菌。真菌病毒是感染真菌的一类病毒，在植物病原真菌中广泛存在。利用弱毒相关真菌病毒在板栗疫病防治上已成功实践，近期研究也表明DNA真菌病毒防治油菜菌核病效果明显。因此，利用真菌病毒防治植物真菌病害，不仅可以成功应用于林业生态系统中，而且在大田生态系统中应用潜力同样大。

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