检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2022年第3期52卷 292-297页

作者：于志亚杨鸣发马云云康洪涛姜骞刘家森李广兴曲连东东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法,根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检... 详细信息

为建立快速、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)检测方法,根据GenBank中发热伴血小板减少综合征病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)基因的保守序列设计引物和探针。通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。当质粒标准品浓度为4.22×10^(2)~4.22×10^(9)copies/μL时,荧光定量标准曲线C;值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数可达0.9998。该方法对发热伴血小板减少综合征病毒最低检测限为4.22×10^(1)copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍;该方法可特异性地检测出SFTSV,而对同科其他病毒检测结果均为阴性;批内、批间变异系数均小于2%。对采集的200只蜱进行检测,阳性检出率为3.5%,而常规RT-PCR方法的阳性检出率为2%。研究结果表明,本研究建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好,为发热伴血小板减少综合征的检测提供了技术手段。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR

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欧洲型PRRSV竞争ELISA抗体检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 617-623页

作者：许浒相丽润张文立汤艳东赵静李超龚邦俊李宛生付军彭金美王倩周国辉冷超粮安同庆蔡雪辉张洪亮田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点猪病实验室黑龙江哈尔滨150069 南阳师范学院河南南阳473061

为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA... 详细信息

为快速准确地监测1型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)在我国的流行情况,本研究以分子筛纯化灭活的PRRSV-1(ZD-1株)为包被抗原,利用PRRSV-1的特异性单克隆抗体(MAb EU-1)为竞争抗体,经条件优化,建立了检测PRRSV-1的竞争ELISA(EU-C-ELISA)方法。反应条件优化结果显示,最佳抗原包被量为455 ng/孔,PRRSV-1 MAb EU-1的最佳稀释度为1:8。EU-C-ELISA结果判定标准:血清样品抑制率PI≥45%时判定为阳性,PI<45%判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能检测PRRSV-1阳性血清,与各谱系PRRSV-2及其他常见猪病毒和细菌阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出16倍稀释的阳性标准血清,并且最早可在PRRSV ZD-1株感染猪后第7 d检测到血清中PRRSV-1抗体阳转;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,对比试验结果显示该方法特异性和敏感性均显著优于现有试剂盒对PRRSV-1抗体的检测。利用该方法对2020年采自黑龙江、辽宁、河北、山东省10个猪场的432份临床血清样品进行检测,2个猪场检出PRRSV-1抗体阳性,猪场阳性率达20%,样品总阳性率为15.0%,显示PRRSV-1抗体已存在于我国部分地区猪群中。本研究在我国首次建立了PRRSV-1竞争ELISA抗体检测方法,为监测PRRS-1在我国的流行情况及科学防控该病提供了检测手段。

关键词： 1型猪繁殖与呼吸综合征病毒竞争ELISA 流行病学调查

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基于ANP32蛋白的B型流感病毒聚合酶的纯化及其单克隆抗体的高效制备

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中国预防兽医学报 2022年第2期44卷 162-168页

作者：纪玉洁郭兴张振宇王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为同时制备B型流感病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)各亚基(PB1、PB2、PA)的单克隆抗体(MAb),本研究利用融合有flag标签的鼠源酸性核磷酸蛋白32B羧基末端结构域[muANP32B(111-C)-flag]与RdRp之间特异性的强亲和作用,将表达IBV RdRp各亚基(... 详细信息

为同时制备B型流感病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)各亚基(PB1、PB2、PA)的单克隆抗体(MAb),本研究利用融合有flag标签的鼠源酸性核磷酸蛋白32B羧基末端结构域[muANP32B(111-C)-flag]与RdRp之间特异性的强亲和作用,将表达IBV RdRp各亚基(PB1、PB2、PA)的质粒与表达鼠muANP32B(111-C)-flag的质粒共转染ANP32A/ANP32B双敲除的293T细胞(DKO细胞),36 h后通过免疫沉淀(IP)试验,富集并纯化RdRp(由PB1、PB2、PA亚基组成),经SDS-PAGE检测获得了纯度较高的ANP32B(111-C)-RdRp复合物。以纯化的该复合物免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选能稳定分泌IBV RdRp和ANP32B(111-C)特异性MAb的杂交瘤细胞株。利用western blot鉴定各杂交瘤细胞株分泌MAb所结合的RdRp亚基。从获得的各种MAb中分别选取效价最高的1株制备小鼠腹水,利用间接ELISA方法测定各腹水的效价。将表达A、B、C、D型流感病毒RdRp各亚基(PB1、PB2、PA)的质粒分别转染293T细胞,24 h后裂解细胞,利用所制备的RdRp各MAb经western blot鉴定其交叉反应性;分别将表达不同物种ANP32B蛋白的质粒转染DKO细胞,24 h后利用制备的muANP32B(111-C)MAb经western blot鉴定。上述试验结果显示,共筛选到27株阳性杂交瘤细胞。Western blot结果显示,获得了多株稳定分泌PB1亚基、PB2亚基、PA亚基及muANP32B(111-C)MAb的杂交瘤细胞株;间接ELISA结果显示,上述各类MAb制备的小鼠腹水最高效价为1:1.28×10^(5)~1:6.4×10^(4),分别命名为1D10、1E9、2E9、6C7。Western blot结果显示,制备的IBV RdRp各单亚基MAb均能与IBV RdRp对应单亚基蛋白发生特异性反应,而不与A、C、D型流感病毒RdRp对应的单亚基反应,表明各MAb对IBV的特异性较强;其中MAb 6C7可以识别鼠、人、鸡、牛、猪、犬的ANP32B蛋白及鸡的ANP32A蛋白,表明该MAb的物种广谱性较好,可用于不同物种ANP32蛋白的检测。将MDCK细胞感染IBV,并分别以转染IBV RdRp各亚基质粒的293T细胞作为阳性对照;培养鼠源SP2/0细胞,并以转染muANP32B质粒的DKO细胞作为阳性对照,利用制备的MAb分别经激光共聚焦试验检测病毒RdRp各亚基在MDCK细胞及muANP32B在SP2/0细胞中的定位。结果显示,各MAb均能够与细胞中病毒RdRp各单亚基及SP2/0细胞中的内源性muANP32B蛋白反应,出现相应荧光。且PB1、PA亚基及内源性muANP32B主要定位在细胞质,PB2亚基主要定位在细胞核。本研究首次利用ANP32(111-C)蛋白富集IBV RdRp,并采用免疫ANP32(111-C)-RdRp复合物的方式同时获得了针对IBV RdRp 3个亚基和ANP32(111-C)蛋白的4株MAb,且能识别出多种与IBV感染相关的关键互作蛋白,可为IBV相关研究及检测提供有效的技术支持。

关键词： B型流感病毒 RNA依赖性RNA聚合酶 ANP32蛋白单克隆抗体

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猫疱疹病毒ERA-LFD检测技术的建立与应用

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中国兽医科学 2022年第1期52卷 11-18页

作者：刘迪许鑫燕郑亚婷杨育鹏康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种快速检测猫疱疹病毒(FHV)的酶促恒温扩增-横向流动试纸条(ERA-LFD)方法,根据GenBank上FHV TK基因保守区域序列,设计多对ERA特异性引物用于筛选最佳引物对及探针,以现场快速检测FHV。灵敏性试验表明,该方法的检测限为7.86×... 详细信息

为建立一种快速检测猫疱疹病毒(FHV)的酶促恒温扩增-横向流动试纸条(ERA-LFD)方法,根据GenBank上FHV TK基因保守区域序列,设计多对ERA特异性引物用于筛选最佳引物对及探针,以现场快速检测FHV。灵敏性试验表明,该方法的检测限为7.86×10^(1)copies/μL,比普通PCR的检测下限高10倍,与实时荧光定量PCR方法的检测限相当。特异性试验表明,该检测方法与猫细小病毒、猫杯状病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应。重复性试验表明,组内的变异系数在1.15%~4.76%之间,组间变异系数在2.09%~2.66%之间,均小于5%。对30份临床样品进行检测,该方法的阳性检出数为6,包含用普通PCR方法的检出的5份阳性病料。对临床检测为阳性的ERA扩增产物进行测序,BLAST对比结果证实为FHV毒株。综上所述,建立的ERA-LFD方法可用于猫疱疹病毒的快速检测及流行病学调查。

关键词：猫疱疹病毒 ERA-LFD 快速检测

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副结核分枝杆菌胞外GDSL脂肪酶MAP_2739的酶学特性研究

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中国预防兽医学报 2023年第4期45卷 331-338页

作者：王建国陈凡若鹿萍臧鑫鑫党光辉姜艳艳崔宁冯婷婷张嘉俊王慧崔莹莹崔子寅刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 辽宁中医药大学辽宁沈阳110847

本实验室前期研究发现了未见报道的副结核分枝杆菌(MAP)GDSL脂肪酶家族蛋白MAP_2739。为进一步分析MAP_2739的酶学特性,本实验利用生物信息学网站和软件对MAP_2739保守结构域、二级结构、3D同源建模等分析,进一步确认其属于GDSL脂肪酶... 详细信息

本实验室前期研究发现了未见报道的副结核分枝杆菌(MAP)GDSL脂肪酶家族蛋白MAP_2739。为进一步分析MAP_2739的酶学特性,本实验利用生物信息学网站和软件对MAP_2739保守结构域、二级结构、3D同源建模等分析,进一步确认其属于GDSL脂肪酶家族蛋白。以MAP参考株基因组DNA为模板,PCR扩增获得map_2739目的基因约891 bp,克隆于表达载体pET-22b中,构建重组质粒pET-22b-map_2739,转化大肠杆菌感受态细胞,经IPTG诱导表达、蛋白复性、Ni-TNA柱亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达及纯化效果,并通过western blot鉴定。结果显示,获得了以包涵体形式表达的经复性的纯化重组MAP_2739蛋白(rMAP_2739)。利用该蛋白制备兔多克隆抗体,通过ELISA方法检测,多抗血清效价为1∶51200。经差速离心法分离MAP参考株组分,利用该多克隆抗体为一抗,通过western blot检测,结果显示在细胞壁、细胞膜和细胞浆均出现35 ku的特异性条带,表明MAP_2739为胞外蛋白。以对硝基苯基酯(p-NPs)为底物进行酶活测定,结果显示MAP_2739蛋白为脂肪酶,可水解短链和长链脂肪酸,其最适酶反应pH值为9.0,且rMAP_2739蛋白经巴氏消毒法预处理后,仍具有脂肪酶活性。以重组质粒pET-22b-map_2739为模板,利用各定点突变引物,经PCR扩增各突变的map_2739基因,并测序后转化大肠杆菌感受态细胞,通过western blot鉴定蛋白表达及纯化情况,并进行了酶活测定分析,结果显示获得各定点突变纯化蛋白,确定S46和D204为MAP_2739的酶活性位点。综上所述,本研究首次证明MAP_2739是MAP胞外GDSL脂肪酶,该结果为进一步研究其在MAP致病中的作用机制奠定了基础。

关键词：副结核分枝杆菌 GDSL脂肪酶 MAP_2739 酶学特性

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宿主细胞转录因子E2相关因子2对EIAV复制影响的初步研究

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中国预防兽医学报 2022年第2期44卷 119-125页

作者：马官芹王岩林跃智王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

转录因子E2相关因子2(Nrf2)是细胞重要的调节抗氧化应激的转录因子,其活性状态与病毒感染引起的炎症及免疫清除相关。为研究Nrf2对马传染性贫血病毒(EIAV)复制的影响,本研究通过CRISPR在线设计工具,靶向于Nrf2设计2条特异性sgRNAs,经程... 详细信息

转录因子E2相关因子2(Nrf2)是细胞重要的调节抗氧化应激的转录因子,其活性状态与病毒感染引起的炎症及免疫清除相关。为研究Nrf2对马传染性贫血病毒(EIAV)复制的影响,本研究通过CRISPR在线设计工具,靶向于Nrf2设计2条特异性sgRNAs,经程序性退火后连接到LentiCRISPRv2-GFP载体中构建重组质粒并分别经测序鉴定正确后,转染HEK293T细胞,24 h后通过western blot筛选沉默Nrf2基因效率最高的sgRNA,结果显示,2条sgRNAs均具有较高的沉默效率。将重组质粒LentiCRISPRv2-GFP-sgRNA-N1转染HEK293T细胞,利用流式细胞仪筛选表达GFP的单细胞克隆,并扩大培养后,经western blot和测序鉴定,筛选到2株不表达Nrf2的细胞,这2株细胞基因组均缺失一个碱基T,导致Nrf2基因发生移码突变而无法表达。选择其中一株细胞,将该细胞连续传代,选择第10代(G10)、15代(G15)、20代(G20)细胞经western blot鉴定其遗传稳定性,结果显示各代次细胞均未检测到Nrf2基因的表达,表明该敲除细胞系可稳定遗传,将其命名为HEK293T-Nrf2^(KO)细胞。将EIAV感染性克隆CMV_(3-8)及Nrf2基因回补的感染性克隆CMV_(3-8)+pVR_(1012)-flag-Nrf2分别转染HEK293T-Nrf2^(KO)细胞,24 h后收获细胞和上清,通过western blot分别检测细胞和上清中的病毒蛋白Gag及利用反转录酶活性试验(RT)检测上清中病毒的复制。western blot结果显示,与CMV_(3-8)转染的HEK293T细胞相比,转染CMV_(3-8)的HEK293T-Nrf2^(KO)细胞和上清中病毒蛋白Gag表达均上调约1.5倍,而转染CMV_(3-8)+pVR_(1012)-flag-Nrf2HEK293T-Nrf2^(KO)细胞和上清中的病毒蛋白Gag表达下调约50%;RT的检测结果与western blot的检测结果一致。结果表明Nrf2基因可以抑制EIAV在HEK293T细胞中的表达。通过将相关质粒转染HEK293T细胞包装EIAV假病毒,并将其分别感染HEK293T和HEK293T-Nrf2^(KO)细胞24 h后,分别检测病毒的荧光素酶信号,结果显示,与对照组相比,感染假病毒的细胞病毒复制能力显著增强。进一步表明,敲除Nrf2基因有助于病毒对细胞的感染。以上结果表明,Nrf2能够抑制EIAV在HEK293T细胞中的复制。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建的敲除Nrf2基因的HEK293T细胞系,可以用于研究宿主Nrf2对EIAV复制的影响,本研究首次证实了宿主Nrf2可以抑制EIAV的复制。本研究构建的HEK293T-Nrf2^(KO)细胞系为宿主Nrf2调控EIAV复制机制的研究提供了有效工具。

关键词： Nrf2 CRISPR/Cas9 敲除细胞系马传染性贫血病毒

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病毒载体疫苗免疫效力的增强策略

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中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1116-1124页

作者：张心雨吴红霞王涛潘力付强孙元仇华吉佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

自从人类首次发现痘苗病毒可以用于预防天花以来,疫苗一直在疾病防控中发挥着至关重要的作用。随着免疫学与分子生物学理论和技术的发展及应用,疫苗的安全性、有效性、稳定性等得到全面提高。基于基因工程技术的病毒载体疫苗与传统疫苗... 详细信息

自从人类首次发现痘苗病毒可以用于预防天花以来,疫苗一直在疾病防控中发挥着至关重要的作用。随着免疫学与分子生物学理论和技术的发展及应用,疫苗的安全性、有效性、稳定性等得到全面提高。基于基因工程技术的病毒载体疫苗与传统疫苗相比,安全性、靶向性和可控性更高,且适于研制多价或多联疫苗,因此成为疫苗研发的热点。但该类疫苗存在免疫效力低等问题,仍需改进。本文分别通过对目的基因和病毒载体的改造,以及免疫策略的改进等方面总结了几种提高病毒载体疫苗免疫效力的策略,为相关疫苗的研究提供参考。

关键词：免疫效力疾病防控病毒载体疫苗痘苗病毒传统疫苗疫苗研发基因工程技术免疫学

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兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重PCR检测方法的建立

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实验动物科学 2023年第4期40卷 10-16页

作者：张贺陶坤盛陈见兴王豪杰陈洪岩王玉娥夏长友中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的建立兔源多杀性巴氏杆菌(Pm)、金黄色葡萄球菌(Sa)和肺炎克雷伯菌(Kp)的多重PCR方法。方法本研究参考Pm kmt1基因、Sa nuc基因和Kp kh1基因的保守区域,设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm),采用控制单一变量法... 详细信息

目的建立兔源多杀性巴氏杆菌(Pm)、金黄色葡萄球菌(Sa)和肺炎克雷伯菌(Kp)的多重PCR方法。方法本研究参考Pm kmt1基因、Sa nuc基因和Kp kh1基因的保守区域,设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm),采用控制单一变量法优化引物浓度,构建kmt1、nuc和kh1基因的重组质粒标准品pMDPm、pMD-Sa和pMD-Kp,确定最小检测量;以兔源支气管败血波氏杆菌和产气荚膜梭菌等9种病原体核酸样本确定多重PCR法的特异性;通过批间和批内实验验证其重复性;经检测疑似感染的临床样本与已报道的检测方法进行比较,评估其临床应用效果。结果最适退火温度为54.5℃;扩增kmt1和nuc基因的引物最适浓度均为1μL(10μmol/L),扩增kh1基因的引物最适浓度为0.5μL(10μmol/L);pMD-Pm最低检测限为20.6 copies/μL,pMDSa最低检测限为18.2 copies/μL,pMD-Kp最低检测限为23.2 copies/μL,表明其灵敏性高;该方法仅对Pm、Sa和Kp有特异性扩增条带,对其他病原体均无扩增条带,表明特异性较强;批间和批内检测结果一致,表明重复性较好;经临床样本检测Pm、Sa和Kp单独的阳性率分别为62.92%、25.84%和49.43%,与已报道的检测方法结果一致。结论本研究成功建立了一种能够同时快速检测兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的多重PCR方法。

关键词：多杀性巴氏杆菌金黄色葡萄球菌肺炎克雷伯菌多重PCR

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表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪瘟兔化弱毒疫苗的构建及其免疫原性评价

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中国兽医学报 2024年第10期44卷 2094-2100,2122页

作者：李树稳杨晓柯管翔雨张广柱黄淑坚李永锋仇华吉佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

通过同源重组构建pHCLV-p54感染性克隆,将其转染至SK6细胞盲传拯救出重组病毒rHCLV-p54,并测定其在体外的遗传稳定性、生长曲线,同时免疫家兔评价其免疫效果。结果显示,E183L基因能够在重组病毒中稳定遗传,但是插入的外源基因影响C株的... 详细信息

通过同源重组构建pHCLV-p54感染性克隆,将其转染至SK6细胞盲传拯救出重组病毒rHCLV-p54,并测定其在体外的遗传稳定性、生长曲线,同时免疫家兔评价其免疫效果。结果显示,E183L基因能够在重组病毒中稳定遗传,但是插入的外源基因影响C株的复制;家兔免疫试验结果显示,重组病毒rHCLV-p54能够诱导家兔产生抗ASFV的特异性抗体。结果表明,表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p54蛋白的重组病毒rHCLV-p54具有良好的免疫原性,有望作为候选疫苗进一步评价。

关键词：非洲猪瘟猪瘟猪瘟兔化弱毒疫苗活载体疫苗

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内蒙古地区牛冠状病毒的分离鉴定及S1基因遗传进化分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 82-87,141页

作者：梁彤曹存于德斌王芳姜志刚徐晓静刘春东尹鑫常继涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司研发部哈尔滨150069 内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010010 北大荒完达山乳业股份有限公司哈尔滨150036

为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时... 详细信息

为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时通过序列比对分析与GenBank中具有代表性的BCoV S1基因组序列的同源性,利用MEGA 7.0.14软件构建S1基因组系统进化树。结果表明:9份样本中有2份为BCoV N基因阳性,PCR扩增得到大小约为730 bp的目的条带;用阳性样本接种HRT-18G细胞并进行3次传代培养,可见细胞出现以变圆、融合形成合胞体、融合细胞脱落为主要特征的典型细胞病变;分离株能够与兔抗BCoV N蛋白的多克隆抗体发生特异性反应,透射电镜观察可见有囊膜、表面有纤突、直径约为120 nm的病毒粒子;将分离获得的BCoV毒株命名为HM-XC,该分离株感染HRT-18G细胞的病毒含量为1×10^(5.75)TCID_(50)/0.1 mL;分离株HM-XC S1基因的核苷酸序列与我国青海省牦牛源毒株BCoV Yak/BCoV-China/QH1的相似性最高,为99.61%,与近年来辽宁省流行毒株的相似性为96.4%~99.0%,与美国经典参考毒株BCoV Mebus的相似性较低,为96.3%;与相似性最高的Yak/BCoV-China/QH1毒株相比,分离株HM-XC的S1蛋白存在7个氨基酸突变,分别是H115D、S186W、Y509H、V528A、N531D、L563S和I640T。说明内蒙古地区牛场中已有BCoV的流行,并且在犊牛腹泻粪便中分离获得BCoV内蒙古流行毒株,分离株具有我国新流行BCoV株的序列特征。

关键词：牛冠状病毒分离鉴定 S1蛋白编码基因序列分析

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