检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1234-1239页

作者：马文杰冯亚文陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 河北省兽药监察所河北石家庄050050

动物在生命活动过程中会接触细菌、病毒以及寄生虫等病原微生物,绝大多数病原微生物可通过黏膜侵入感染机体。为了预防黏膜途径感染的发生,动物机体演化出一套防御系统—黏膜免疫系统。黏膜免疫系统是动物机体免疫网络中极其重要的组成... 详细信息

动物在生命活动过程中会接触细菌、病毒以及寄生虫等病原微生物,绝大多数病原微生物可通过黏膜侵入感染机体。为了预防黏膜途径感染的发生,动物机体演化出一套防御系统—黏膜免疫系统。黏膜免疫系统是动物机体免疫网络中极其重要的组成部分,是机体抵抗病原微生物感染的第一道防线。它除了包含屏障结构如紧密排列的上皮细胞外,还包含效应细胞如先天淋巴细胞(Innate lym-phoid cells,ILCs)、M细胞(Membranous cell)和单核细胞等免疫细胞。ILCs主要存在于黏膜中,参与共生微生物的调控、淋巴细胞的发育、受损组织的修复及上皮屏障的保护作用。近年来,越来越多的研究发现在病原感染过程中,ILCs参与协调黏膜免疫抵抗病原微生物的感染。本文着重对ILCs协助机体拮抗几种不同类型病原微生物感染的功能进行综述,为进一步研究ILCs在病原感染中的作用提供参考。

关键词：病原微生物病原感染黏膜免疫系统免疫细胞第一道防线淋巴细胞 M细胞效应细胞

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肠道菌群参与宿主免疫应答的作用及机制研究进展

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微生物学报 2020年第4期60卷 629-640页

作者：张贺王玉娥陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

肠道菌群作为动物体内重要的组成部分,能够直接参与机体的免疫调控作用,促进机体免疫系统发育,维持正常免疫功能。同时,免疫系统对肠道菌群又有调控和制约作用。本文主要综述了肠道菌群的组成以及影响肠道菌群变化的因素,系统阐述了肠... 详细信息

肠道菌群作为动物体内重要的组成部分,能够直接参与机体的免疫调控作用,促进机体免疫系统发育,维持正常免疫功能。同时,免疫系统对肠道菌群又有调控和制约作用。本文主要综述了肠道菌群的组成以及影响肠道菌群变化的因素,系统阐述了肠道菌群与疾病相互作用的机制,总结了肠道菌群在宿主感染与免疫应答中的作用,为开展肠道菌群参与机体免疫应答的机制方面的研究提供新的思路。

关键词：肠道菌群免疫应答机制

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非洲猪瘟病毒p72蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2021年第9期43卷 946-951页

作者：庚辛孙明霞王淑杰汤艳东高金源蔡雪辉吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国兽医药品监察所北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)的血清学检测方法,本研究根据ASFV Georgia2007/1株基因组合成其p72全长基因,并将其克隆至p GEX6p-1载体,构建重组质粒pGEX6p-1-p72并经酶切、PCR和测序鉴定正确后转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后经SDS-P... 详细信息

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)的血清学检测方法,本研究根据ASFV Georgia2007/1株基因组合成其p72全长基因,并将其克隆至p GEX6p-1载体,构建重组质粒pGEX6p-1-p72并经酶切、PCR和测序鉴定正确后转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示获得了可溶性表达且纯度较高的重组p72蛋白(rp72)。利用GST亲和纯化层析柱纯化,得到浓度为0.2 mg/mL的rp72。以rp72作为包被抗原,通过优化各反应条件建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法,结果显示,rp72最佳包被浓度为1.25μg/mL,封闭时间为37℃1 h;待检血清稀释度为1.100,孵育时间为37℃30 min;羊抗猪IgG-HRP孵育时间为37℃1 h。利用该方法检测280份阴性血清,确定其临界值为0.412。采用建立的间接ELISA抗体方法对PEDV、PRRSV、CSFV、PRV、TGEV、PPV、PCV、***阳性猪血清进行检测,结果显示,除ASFV阳性对照为阳性外,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,该方法特异性强;将非洲猪瘟抗体阳性猪血清2倍倍比稀释(1.100~1.6400)后,利用该方法进行检测,结果显示其检测阳性血清的稀释度为1.3200倍时OD_(450nm)值仍大于临界值,敏感性高于市售西班牙ASFV阻断ELISA试剂盒检测结果,本研究建立的方法敏感性较高;对该方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批内和批间的变异系数均<10%,重复性良好。利用本研究建立的ASFV ELISA抗体检测方法(p72)对184份临床血清进行检测,结果显示该方法敏感性为100%,特异性为98.70%;与ASFV阻断ELISA抗体检测试剂盒方法总符合率为98.91%,kappa值为0.961。本研究首次基于rp72建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为ASFV抗体检测提供了一种快速、精准、经济、高效的方法。

关键词：非洲猪瘟病毒 p72蛋白 ELISA

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非洲猪瘟病毒pI215L蛋白单克隆抗体的制备及其反应性研究

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中国预防兽医学报 2021年第4期43卷 405-410页

作者：许文杰薛梦迪张元峰李长尧黄丽熊涛翁长江长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种高致病性的传染病,研究显示,抑制宿主干扰素(IFN)产生的能力与ASFV的致病力密切相关。本实验室前期的研究结果表明,ASFV pI215L蛋白能够显著抑制病毒诱导IFN的产生。为研究pI215L抑制Ι型干扰素(IFN-Ι)的机制提供物质基础,本研究构建了重组原核表达质粒pET-21a-pI215L,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后经SDS-PAGE鉴定,结果显示表达了可溶性的pI215L蛋白。进一步纯化pI215L蛋白后免疫小鼠,并经脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选,获得能够分泌pI215L蛋白单克隆抗体(MAb)的细胞株。Western blot结果显示,该MAb能够特异性识别25 ku处的外源转染过表达不同浓度的pI215L蛋白,并且能够识别感染MOI 1、MOI 10接毒剂量的ASFV编码的内源pI215L蛋白,以及感染ASFV 2 h后不同时间点表达的内源pI215L蛋白;真核表达质粒pET-21a-pI215L转染HEK293T细胞后,以及以MOI 1的ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后分别进行间接免疫荧光(IFA)检测,结果显示,使用兔源标签HA抗体以及Flag抗体为一抗染色的细胞可见绿色荧光,使用抗ASFV pI215L MAb为一抗染色的细胞可见红色荧光,表明本实验制备的MAb可用于IFA试验,识别内外源pI215L蛋白;免疫沉淀(IP)试验结果显示,纯化的MAb能够特异性结合HEK293T细胞中外源过表达的pI215L蛋白以及ASFV感染PAMs细胞中表达的内源pI215L蛋白。本研究为进一步探究pI215L的分子免疫机制以及ASFV疫苗的研制奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pI215L 单克隆抗体

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稳定表达Venus基因的重组猪瘟病毒的构建

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黑龙江畜牧兽医 2020年第20期 67-71,80,158,159页

作者：孙慧敏仇华吉李素李永锋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

为了利用CRISPR/Cas9技术高通量筛选介导猪瘟病毒入侵的功能性受体,试验首先用融合PCR技术,将Venus基因融合至Npro蛋白的第13位与14位氨基酸之间,获得全长感染性克隆pCSFVVenus;之后将pCSFV-Venus转染至SK6细胞拯救重组猪瘟病毒(rCSFV-V... 详细信息

为了利用CRISPR/Cas9技术高通量筛选介导猪瘟病毒入侵的功能性受体,试验首先用融合PCR技术,将Venus基因融合至Npro蛋白的第13位与14位氨基酸之间,获得全长感染性克隆pCSFVVenus;之后将pCSFV-Venus转染至SK6细胞拯救重组猪瘟病毒(rCSFV-Venus),并将拯救的病毒感染猪肾细胞(PK-15细胞)进行连续传代观察其稳定性;最后将rCSFV-Venus和表达EGFP的重组病毒rCSFV-EGFP以相同剂量感染PK-15细胞,通过流式细胞仪分析荧光强度及感染效率。结果表明:rCSFV-Venus全长感染性克隆构建成功;转染后传至第4代可观察到绿色荧光,表明重组病毒拯救成功;将拯救的病毒连续传代10代,每代感染的PK-15细胞都可观察到绿色荧光,表明重组病毒具有良好的稳定性;流式细胞仪分析结果表明,rCSFV-Venus比rCSFV-EGFP荧光强度强且感染效率高。说明本研究成功拯救了稳定表达Venus基因的rCSFV-Venus,为筛选介导CSFV入侵的功能性受体提供了有力工具。

关键词：猪瘟病毒 Venus基因重组病毒稳定性荧光强度感染效率

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非洲猪瘟病毒A137R蛋白多克隆抗体的制备与应用

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中国预防兽医学报 2021年第1期43卷 60-64页

作者：向志达张涛清张元峰黄丽杨玉莹翁长江长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病。为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高致病性病毒性传染病。为制备兔抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018分离株基因组DNA为模板扩增ASFV A137R基因,将其克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组表达质粒pET-21a-A137R,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的A137R重组蛋白分子质量约15.0 ku,其主要以可溶形式表达。利用HisTrap亲和层析和凝胶过滤层析纯化获得高纯度的A137R重组蛋白,利用该纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ASFV A137R蛋白多克隆抗体,经Protein G亲和层析介质纯化后经western blot、间接免疫荧光和免疫共沉淀试验检测结果显示,制备的兔抗ASFV A137R蛋白的多克隆抗体能特异性地识别HEK293T细胞中瞬时表达的ASFV Flag-A137R蛋白和ASFV感染猪肺泡巨噬细胞中表达的ASFV A137R蛋白。本研究为进一步探究ASFV A137R蛋白的功能、其在ASFV感染及致病性中的作用和诊断技术研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 A137R蛋白多克隆抗体

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1例梅花鹿狂犬病的病理学诊断及其病原遗传进化分析

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 39-45页

作者：高雅智宇张迪乔蕾邵国玉丁玉林葛金英王金玲内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古呼和浩特010051 内蒙古通辽市科尔沁区畜牧水产工作站内蒙古通辽028000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古自治区兴安盟科尔沁右翼前旗动物疫病预防控制中心内蒙古科尔沁右翼前旗137713

为了探明1例梅花鹿病例的死亡原因,本试验通过组织病理学检查、直接免疫荧光法和免疫组织化学检测对其进行诊断,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增狂犬病病毒(RABV)核蛋白(N)和糖蛋白(G)基因序列,测序后进行同源性、分子进化和系统发... 详细信息

为了探明1例梅花鹿病例的死亡原因,本试验通过组织病理学检查、直接免疫荧光法和免疫组织化学检测对其进行诊断,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增狂犬病病毒(RABV)核蛋白(N)和糖蛋白(G)基因序列,测序后进行同源性、分子进化和系统发育关系分析。结果显示,患病梅花鹿临床表现出狂暴型神经症状。组织病理学表现为典型的非化脓性脑炎,在大脑、小脑、脑干、脊髓和海马等部位的神经细胞胞浆内均有大小不等、圆形或椭圆形的嗜酸性RABV包涵体。采用直接免疫荧光法和免疫组织化学法均在小脑组织中检测到大量特异性的RABV阳性信号。基因测序和分析结果显示,分离毒株N和G基因分别长1424和1675 bp,均与2015年呼和浩特牛源毒株Rabies virus isolate CNM1101C(KC193267)核苷酸同源性最高,分别为99.5%和99.3%。分离毒株N和G基因与从河南、甘肃、湖北、福建和山东等省分离的毒株位于同一分支,属于Asian谱系。结果表明,该梅花鹿感染狂犬病,RABV分离毒株属于中国地区流行的Asian谱系,与国内流行毒株起源于共同的祖先。

关键词：梅花鹿狂犬病内基氏小体病理学遗传进化

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利用量子点单病毒示踪技术研究水貂肠炎病毒的感染机制

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中国兽医学报 2025年第1期45卷 30-38页

作者：董奕彤王晓萌岳凤娇王淑杰王春生东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨市兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150040

利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)在细胞内的感染过程,为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记,经TCID_(50)滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾细... 详细信息

利用量子点单病毒示踪技术探究水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)在细胞内的感染过程,为MEV的抗病毒治疗提供了潜在靶点。本研究通过生物素-链霉亲和素系统对MEV进行了量子点标记,经TCID_(50)滴度测定和电镜表征后用于感染猫肾细胞(CRFK)。CRFK细胞膜经DiO染色后用量子点标记的MEV进行侵染,利用活细胞工作站系统GE Dleta vision观测病毒进入细胞膜的过程;对CRFK细胞转染pEGFP-Rab5和pEGFP-Rab7载体来标记早期内体和晚期内体,当细胞感染量子点标记的MEV后观测MEV病毒粒子与早期内体和晚期内体的相互作用。为了进一步验证内体与病毒感染的关系,利用氯喹(chloroquine,CQ)和NH_(4)Cl两种内体酸性抑制剂来抑制内体的酸性环境,对加入抑制剂的感染后的细胞提取细胞内总RNA和蛋白,通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量;MEV在胞内的转运与细胞骨架相关,为了探究MEV转运与哪种细胞骨架相关,对CRFK细胞分别转染GFP-lifeact和EGFP-MAP4质粒,经GE Dleta vision观测MEV与细胞骨架的关系。选择微管抑制剂Nocodazole和微丝抑制CytoD剂对感染MEV的CRFK细胞提取细胞内RNA及总蛋白,通过qPCR及Western blot检测细胞内MEV的含量。活细胞成像显示MEV首先附着在细胞膜上,并通过内吞作用进入细胞;成像结果显示MEV与Rab5和Rab7在宿主细胞中共定位,用内体酸化抑制剂NH_(4)Cl或CQ预处理宿主细胞后,病毒感染被抑制,表明MEV感染需要内体的酸性环境;活细胞图像显示量子点(QD)-MEV沿着微管运动,使用微管抑制剂Nocodazole抑制了病毒感染,而微丝抑制剂CytoD的加入对感染没有影响。研究结果表明,MEV是通过内吞作用进入CRFK细胞膜,随后进入早期内体及晚期内体,在细胞内的转运过程依赖于微管。

关键词：水貂肠炎病毒量子点单病毒示踪侵染机制

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TRIM30α^(-/-)小鼠模型的构建及其表型分析

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 191-197页

作者：李昂王辉邵玉乐许曼张子博田璐史鑫琪孟庆文陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

TRIM30α作为TRIM蛋白家族成员,在天然免疫系统中发挥重要作用。为了研究TRIM30α基因的特性及功能,本研究在小鼠TRIM30α基因第一段编码区选择一段作为靶序列,合成了2条sgRNA,构建了重组质粒pUC19-TRIM30α-sgRNA1/2并体外转录后分别... 详细信息

TRIM30α作为TRIM蛋白家族成员,在天然免疫系统中发挥重要作用。为了研究TRIM30α基因的特性及功能,本研究在小鼠TRIM30α基因第一段编码区选择一段作为靶序列,合成了2条sgRNA,构建了重组质粒pUC19-TRIM30α-sgRNA1/2并体外转录后分别与体外转录并加poly(A)尾的pT7-SpCas9-SV40混合后经显微注射至C57BL/6近交系小鼠的受精卵中,获得第一代(F0代)TRIM30α基因敲除的小鼠并经PCR鉴定。将其与野生型(WT)小鼠合笼繁育出TRIM30α^(+/-)小鼠(F1代),经PCR鉴定后再通过全同胞交配的方式获得TRIM30α基因敲除的纯合子(TRIM30α^(-/-))小鼠(F2代)。通过PCR和测序在DNA水平鉴定TRIM30α^(-/-)小鼠各组织(心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉)TRIM30α基因的敲除情况;经RT-PCR检测TRIM30α^(-/-)小鼠上述各组织TRIM30α基因mRNA的转录水平;利用PCR分别扩增小鼠中的3个高频脱靶位点(Trim30d、D6WSu163e、Sbk1)后经T7E1酶切检测TRIM30α^(-/-)小鼠的脱靶效应。结果显示,分别获得了缺失了4 bp和7 bp片段的两种TRIM30α基因缺失的F0代小鼠(TRIM30α^(+/-)),选择缺失7 bp的TRIM30α^(+/-)小鼠繁育获得F1、F2代小鼠。PCR鉴定结果显示,共获得了7只TRIM30α^(-/-)纯合子小鼠;从DNA水平和mRNA转录水平鉴定结果显示,TRIM30α^(-/-)小鼠各组织的基因组DNA扩增条带均小于WT小鼠的扩增条带;且其体内未检测到TRIM30α基因的mRNA;TRIM30α^(-/-)小鼠体内也未检测到其他位点的脱靶编辑;TRIM30α^(-/-)小鼠的生长发育、血常规、血生化指标与WT小鼠相比均无显著差异。以上结果表明TRIM30α^(-/-)小鼠模型构建成功。本研究为探究DNA病毒介导的天然免疫应答中TRIM30α所发挥的作用提供了实验材料和研究依据。

关键词： TRIM30α CRISPR/Cas9 表型分析动物模型

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2株海鸭源H3亚型禽流感病毒全基因组分子特征分析

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中国畜牧兽医 2023年第4期50卷 1319-1328页

作者：谢守玉王睿敏崔鹏飞施开创韦显凯冯淑萍龙凤屈素洁陆文俊黄金山黄凤梅温新瑞尹彦文邓国华广西动物疫病预防控制中心南宁530001 贵港市动物疫病预防控制中心贵港537100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业农村部动物流感重点实验室哈尔滨150069 百色市右江区动物疫病预防控制中心百色533000 钦南区动物疫病预防控制中心钦州535000 北海市动物疫病预防控制中心北海536000

【目的】了解广西沿海地区水禽H3亚型禽流感病毒的基因组分子特征。【方法】本研究通过RT-PCR一步法分段扩增法,对2020年从广西沿海地区分离到的2株海鸭源H3亚型禽流感病毒A/duck/Guangxi/S11359/2020(H3N1)与A/duck/Guangxi/S11374/202... 详细信息

【目的】了解广西沿海地区水禽H3亚型禽流感病毒的基因组分子特征。【方法】本研究通过RT-PCR一步法分段扩增法,对2020年从广西沿海地区分离到的2株海鸭源H3亚型禽流感病毒A/duck/Guangxi/S11359/2020(H3N1)与A/duck/Guangxi/S11374/2020(H3N8)进行全基因组测序与进化分析。【结果】2株H3亚型禽流感病毒的HA蛋白裂解位点序列均为340 PEKQTR↓GLFG 349,为低致病性禽流感病毒的分子特征,与受体嗜性关联的第226、228位氨基酸均为Q和T,可能仍主要结合禽类受体;BLAST分析结果显示,本研究H3N1亚型禽流感病毒的M、NP基因及H3N8亚型禽流感病毒的PA基因,与H7亚型禽流感病毒相似性最高,分别为99.5%、98.7%和98.9%,表明H3可能与H7亚型禽流感病毒发生了基因交换;2株H3亚型禽流感病毒与越南、孟加拉国、韩国等周边国家水禽源的H3、H4、H6、H7、H9等亚型相似性较高,可能拥有相同的进化来源;遗传进化分析表明,H3亚型禽流感病毒各基因进化分支均属于欧亚谱系,与水禽源毒株遗传距离较近,犬源、猫源的毒株次之,人源、猪源的毒株较远,但H3N1亚型禽流感病毒的NS基因与日本早期人源流感毒株A/Aichi/2/1968遗传关系最近,可能发生了基因置换。H3N8亚型禽流感病毒的HA基因检测有重组信号,重组的亲本毒株分别为A/duck/Beijing/40/04(相似性为93.1%)和A/canine/Beijing/20121215-34/2012(相似性为97.1%)。【结论】广西沿海地区的2株H3亚型禽流感病毒基因来源复杂,表现出遗传多样性特征。

关键词：海鸭 H3亚型禽流感病毒遗传进化

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