检索结果-内蒙古大学图书馆

河南农业科学 2021年第1期50卷 152-157页

作者：鲍印翟洪月李慧敏袁志乔马玉静丁雨善阚云超姚伦广田志军冷超粮南阳师范学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/河南省动物疫病诊断与综合防控工程技术研究中心河南南阳473000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和247... 详细信息

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和2476份血液样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗原和抗体检测。结果表明,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的感染具有普遍性,病原平均阳性率分别达到了42.20%(192/455)、56.85%(328/577)、45.03%(136/302)和28.85%(73/253),且部分存在以PRRSV为主的混合感染。抗体检测结果显示,CSFV、PRRSV、PCV2、PRV gE和PRV gB抗体的平均阳性率分别为78.37%(1841/2349)、75.93%(1565/2061)、84.62%(682/806)、33.12%(627/1893)和94.00%(1504/1600)。此外,CSFV、PCV2和PRV的病原检出率在2019年大幅下降。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒病毒性传染病流行病学调查

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甜菜糖蜜发酵饲料对肉羊生长、屠宰性能、肉品质以及表观消化率的作用

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饲料工业 2022年第19期43卷 7-13页

作者：成思源马涛杨东王文义柏映国马书林马友记刁其玉中国农业科学院饲料研究所农业农村部饲料生物技术重点实验室北京100081 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070 巴彦淖尔市农牧业科学研究所内蒙古巴彦淖尔015000 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 河北省农林科学院粮油作物研究所河北石家庄050035

试验将甜菜糖蜜发酵饲料按不同比例添加在肉羊饲粮中,旨在研究其对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质以及表观消化率的作用。选取体重为(21.0±0.2)kg的寒杂羊公羔54只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6只羊。分别添加0、10、50 kg/... 详细信息

试验将甜菜糖蜜发酵饲料按不同比例添加在肉羊饲粮中,旨在研究其对肉羊生长性能、屠宰性能、肉品质以及表观消化率的作用。选取体重为(21.0±0.2)kg的寒杂羊公羔54只,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6只羊。分别添加0、10、50 kg/t甜菜糖蜜发酵饲料(对照组、FⅠ组、FⅡ组)。试验共计100 d,预试期10 d,正试期90 d,每30 d进行一次称重,正试期第70天到第80天进行消化代谢试验,正试期结束后,每组选取8只羊屠宰并采样,测定屠宰性能与肉品质指标。结果显示:①各组生长性能无显著差异(P>0.05),但FⅡ组的平均日增重较对照组提高,而采食量低于对照组,饲粮转化率较对照组有所改善。②各试验组胴体重、胴体脂肪含量值无显著差异(P>0.05),FⅡ组肉羊屠宰率、眼肌面积显著高于对照组(P<0.05)。③各组肉品质指标无显著差异(P>0.05)。④FⅡ组粗蛋白、粗脂肪、中性洗涤纤维以及酸性洗涤纤维的消化率显著高于对照组(P<0.05),各组干物质、代谢能的表观消化率无显著差异(P>0.05)。综上所述,试验采用的发酵饲料可以明显提高饲粮粗蛋白、粗脂肪、酸性洗涤纤维以及中性洗涤纤维的表观消化率,对肉羊的平均日增重有促进作用,能显著提高肉羊的屠宰率,每吨添加50 kg发酵饲料的作用较优。

关键词：肉羊酿酒酵母甜菜糖蜜发酵饲料生长性能屠宰性能肉品质表观消化率

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H10N8亚型禽流感病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1233-1238页

作者：包红梅田国彬曾显营王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方... 详细信息

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法。该方法可特异性地检测出H10N8亚型AIV的HA和NA基因,与其它亚型AIV及其他常见禽呼吸道病原均无交叉反应;能够检测到AIV的最低检出量为10-1 EID50/0.1 mL,比常规RT-PCR方法敏感100倍;批内和批间重复性试验的变异系数(CV)均小于2%。SPF鸡感染试验样品检测结果显示,该双重荧光定量RT-PCR方法和病毒分离鉴定方法的符合率为94.44%,与常规RT-PCR方法的符合率为88.23%,而常规RT-PCR方法与病毒分离方法的符合率为83.33%,表明该方法与病毒分离方法的准确率更接近,可以用于临床检测。本实验结果表明H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为H10N8亚型AIV的检测及监测提供了有力的技术手段。

关键词：禽流感 H10N8 双重荧光定量RT-PCR 检测方法

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一株G6P型牛轮状病毒的分离鉴定与全基因组序列分析

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中国预防兽医学报 2021年第9期43卷 939-945页

作者：曹存于德斌徐晓静于力常继涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司研发部黑龙江哈尔滨150069 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010

为了对患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛轮状病毒(BRV)的流行病学数据,本研究采用RT-PCR方法对8份腹泻犊牛的粪便样品进行BRV VP7基因检测,结果显示有1份样品为阳性。将该阳性病料样品接种Marc-145细胞。对产生细胞病... 详细信息

为了对患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛轮状病毒(BRV)的流行病学数据,本研究采用RT-PCR方法对8份腹泻犊牛的粪便样品进行BRV VP7基因检测,结果显示有1份样品为阳性。将该阳性病料样品接种Marc-145细胞。对产生细胞病变(CPE)的阳性样品连续传5代后,经间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察,结果表明从粪便样品中分离的病毒为BRV,命名为DZ株。对DZ株的11个基因节段进行RTPCR扩增、测序、拼接后对11个基因节段进行同源性及分型分析;构建分离病毒VP7、VP4基因进化树,分析其遗传进化关系及其氨基酸序列的变异情况。结果显示,DZ株基因组10个基因节段分别与来源于牛(VP2、VP7、NSP1、NSP3)、犬(VP3、NSP5)、羔羊(NSP2)、马(VP6)、猕猴(VP1)、人(NSP4)以及人-牛基因重配(VP4)的轮状病毒株。其中VP1基因与猕猴轮状病毒(RRV)的同源性最高,为81.3%,但低于VP1基因分型的临界值83%,因此DZ株的VP1为新出现的基因型,命名为R17;分离株NSP3基因与法国RF株NSP3基因的同源性高达98%,DZ株与RF株的NSP3属于同一基因型,命名为T18型。所以,本研究分离的BRV DZ株的基因型为G6-P5-I2-R17-C2-M2-A3-N2-T18-E2-H5。VP7和VP4基因遗传进化分析结果显示,DZ株VP7基因来源于韩国KJ69-1株,VP4基因来源于美国疫苗株RotaTeq-SC2-9。与同源性最高的病毒株相比,DZ株VP4、VP7蛋白氨基酸序列分别发生了9处和8处突变。这些突变可能会引起VP7和VP4蛋白的抗原性和组织嗜性变化,进而影响病毒的免疫原性、宿主嗜性以及致病性。综上所述,DZ株是多宿主来源的基因重配病毒株,且主要抗原蛋白VP7和VP4发生了较大变异。本研究为我国BRV遗传进化及其分子流行病学和疫苗的研究奠定了实验基础。

关键词：牛轮状病毒基因序列分析重配株分离鉴定

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牛轮状病毒NSP5基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2021年第4期43卷 399-404,424页

作者：于德斌曹存徐晓静于力常继涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司研发部黑龙江哈尔滨150069 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010

为建立检测牛轮状病毒(BRV)快速特异的荧光定量RT-PCR方法,本研究针对BRV NSP5基因设计了一对特异性引物经PCR扩增目的片段,并克隆于pCI载体作为重组质粒标准品(pCI-NSP5),经优化反应条件,建立了基于NSP5基因的BRV荧光定量RT-PCR方法,... 详细信息

为建立检测牛轮状病毒(BRV)快速特异的荧光定量RT-PCR方法,本研究针对BRV NSP5基因设计了一对特异性引物经PCR扩增目的片段,并克隆于pCI载体作为重组质粒标准品(pCI-NSP5),经优化反应条件,建立了基于NSP5基因的BRV荧光定量RT-PCR方法,并对其进行了特异性、敏感性及重复性试验。结果显示,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法最佳引物浓度为10μmol/L,模板为2μL,退火温度为58℃;特异性试验结果显示,该方法除对BRV的检测结果为阳性外,对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、牛副流感3型病毒、牛呼吸道合胞体病毒的检测结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品的最低检测限为12拷贝/μL,对BRV的最低检测限为1×102TCID50/反应;批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。利用该方法检测30份BRV接种犊牛的粪便样品,结果 25份呈阳性,而利用VP7基因的常规RT-PCR和病毒分离方法检出的阳性样品分别为20份和25份,表明本研究建立的检测方法的敏感性高于VP7基因的常规RT-PCR方法,而与病毒分离方法的符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的BRV NSP5基因荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以用于BRV的快速检测、病原流行病学调查以及疫苗免疫攻毒试验的病毒载量定量等研究。

关键词：牛轮状病毒 NSP5基因荧光定量RT-PCR

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HN蛋白糖基化位点缺失的新城疫病毒的生物学特性研究

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中国兽医杂志 2020年第6期56卷 1-4页

作者：艾惠孙军峰陈琳娜李乐韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

从黑龙江某鸡场中分离到1株新城疫病毒(NDV),命名为ck/CH/LHLJ170302株。全基因组序列测定和遗传进化分析表明,ck/CH/LHLJ170302株属于NDV class II类中的基因II型,与LaSota疫苗株的亲缘关系较近。分析基因分子特征发现,与LaSota株相比,... 详细信息

从黑龙江某鸡场中分离到1株新城疫病毒(NDV),命名为ck/CH/LHLJ170302株。全基因组序列测定和遗传进化分析表明,ck/CH/LHLJ170302株属于NDV class II类中的基因II型,与LaSota疫苗株的亲缘关系较近。分析基因分子特征发现,与LaSota株相比,ck/CH/LHLJ170302株编码的HN蛋白缺失了433位的糖基化修饰位点,而其他基因之间没有明显差异。进一步比较分析了ck/CH/LHLJ170302株与LaSota株在生长特性、致病性、抗原相关性方面的差异。结果发现,接种SPF鸡胚后,ck/CH/LHLJ170302株在24 h、48 h和72 h的病毒滴度均显著高于LaSota疫苗株(P<0.05),表明ck/CH/LHLJ170302株的增殖速度要快于LaSota株。毒力指标测定结果显示,ck/CH/LHLJ170302株引起鸡胚死亡平均时间(MDT)较LaSota株提前了近20 h,1日龄SPF雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)略低于LaSota株。此外,ck/CH/LHLJ170302株与LaSota株的抗原相关性分析结果表明,ck/CH/LHLJ170302与LaSota株没有明显的抗原性差异。本研究结果为我国NDV的遗传变异的研究提供了参考数据。

关键词：新城疫病毒 HN蛋白糖基化位点生物学特性

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新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

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畜牧兽医学报 2020年第4期51卷 794-800页

作者：吴寒光孙军峰梁雨萌刘胜旺李海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队哈尔滨150069

本研究旨在明确新城疫病毒(NDV)溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检... 详细信息

本研究旨在明确新城疫病毒(NDV)溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。

关键词：新城疫病毒复制溶瘤病毒细胞周期细胞凋亡

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B亚型禽偏肺病毒灭活疫苗对商品肉鸡免疫效果的研究

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中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1071-1075页

作者：包媛玲何锡栋于蒙蒙刘鹏陶蓉蓉肖美丽王素艳李欣翼胡守平刘爱晶张艳萍刘长军祁小乐王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 福建圣泽生物科技发展有限公司福建南平354100 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为了研究B亚型禽偏肺病毒(a MPV/B)灭活疫苗对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品肉鸡,将前期研制的a MPV/B灭活疫苗通过肌肉注射的方式免疫商品肉鸡(0.5 mL/只),以注射相同剂量PBS的商品肉鸡作为阴性对照组。于首免后3周... 详细信息

为了研究B亚型禽偏肺病毒(a MPV/B)灭活疫苗对商品肉鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品肉鸡,将前期研制的a MPV/B灭活疫苗通过肌肉注射的方式免疫商品肉鸡(0.5 mL/只),以注射相同剂量PBS的商品肉鸡作为阴性对照组。于首免后3周加强免疫1次,分别采用ELISA和中和试验检测首免1周~6周后各组鸡血清中的IgG抗体效价和中和抗体效价。结果显示,首免后3周及加强免疫后3周(首免后6周),各组鸡血清平均IgG抗体效价分别为1:11864和1:36619,平均中和抗体效价分别为4.7 log2和6.5 log2。而阴性对照组鸡血清均无IgG抗体和中和抗体产生。加强免疫后3周以a MPV/B LN16株(5000 TCID_(50)/只)攻毒,观察攻毒后1 d~7 d各组鸡的临床症状,统计免疫保护率。结果显示,免疫组有一只鸡挤压有鼻液,其他鸡均无明显症状,发病率为10.0%,而对照组鸡出现混浊或粘稠泡沫样、牵丝状鼻液,鼻痂等症状,且发病率达90.0%,经计算,疫苗免疫保护率达88.9%;通过RT-qPCR检测首免后1 d~6 d采集的各组鸡鼻腔拭子中的病毒基因拷贝数,分析其排毒情况。结果显示,攻毒后1 d~6 d,免疫组鸡鼻腔拭子中的病毒拷贝数较对照组鸡下降64.6%~80.7%;攻毒后9 d剖杀各组鸡,采集各组鸡鼻甲、气管及肺组织,制作病理切片后观察各组织病理学变化。结果显示,对照组鸡的鼻甲黏膜、气管黏膜及肺房壁均可见炎性细胞浸润,而免疫组鸡上述各组织均未见明显病理变化。本研究首次表明,aMPV/B灭活疫苗能够诱导商品肉鸡产生较高水平的体液免疫反应,并且对鸡产生较好的免疫保护效果。本研究对控制a MPV/B的传播与流行具有重要意义。

关键词： B亚型禽偏肺病毒灭活疫苗商品肉鸡免疫保护

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人源H7N9流感病毒促进Ⅰ型干扰素产生机制的研究

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中国预防兽医学报 2020年第1期42卷 1-5页

作者：李继清万晓朋于晓菲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为阐明不同来源H7N9流感病毒诱导Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)产生水平差异及其机制,本研究选取人源流感病毒A/Anhui/1/2013(AH/1)株和禽源流感病毒A/Pigeon/Shanghai/S1421/2013(PG/S1421)株作为模式病毒株,利用C57BL/6小鼠进行致病性试验。结... 详细信息

为阐明不同来源H7N9流感病毒诱导Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)产生水平差异及其机制,本研究选取人源流感病毒A/Anhui/1/2013(AH/1)株和禽源流感病毒A/Pigeon/Shanghai/S1421/2013(PG/S1421)株作为模式病毒株,利用C57BL/6小鼠进行致病性试验。结果显示,AH/1株感染可以致小鼠发病死亡,而PG/S1421株则不会致小鼠发病。采用间接免疫荧光试验和流式细胞试验分别对两株病毒在A549细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中的感染效率进行检测,结果显示两株病毒在两种细胞中的感染效率无显著差异。将该两株病毒分别感染小鼠腹腔巨噬细胞,在感染后不同时间点收集培养上清,并裂解细胞收取细胞总蛋白。采用ELISA方法对细胞培养上清IFN-Ⅰ含量进行测定。结果显示,感染后不同时间,AH/1株和PG/S1421株均可以诱导IFN-Ⅰ产生,但相较于PG/S1421株,AH/1株感染可以诱导细胞产生更多的IFN-Ⅰ;利用western blot对细胞总蛋白中IFN-Ⅰ产生信号通路的上游感受器分子视黄酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的表达水平进行检测。结果显示,在PG/S1421株感染细胞的12 h内,胞内RIG-Ⅰ分子的表达量无显著变化,而AH/1株感染后,胞内RIG-Ⅰ分子的表达量增加,并且表达量随时间延长而上升。以上试验结果表明,AH/1株感染可以通过上调RIG-Ⅰ表达进而诱导宿主细胞产生更多IFN-Ⅰ。本研究阐明了人源H7N9流感病毒促进IFN-Ⅰ产生的初步机制,为进一步解析人源H7N9流感病毒促进IFN-Ⅰ产生的精细分子机制以及免疫逃逸机制奠定了基础,为H7N9流感防控提供参考依据。

关键词： H7N9流感病毒 Ⅰ型干扰素 RIG-Ⅰ

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抗犬细小病毒单克隆抗体的制备与鉴定

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畜牧与兽医 2020年第10期52卷 54-58页

作者：杨凯越宋彩玲李彤彤王文静陈慧宇赵爽爽刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为制备针对犬细小病毒(CPV)的单克隆抗体,以纯化的CPV免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。利用超速离心纯化的病毒作为包被抗原,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤... 详细信息

为制备针对犬细小病毒(CPV)的单克隆抗体,以纯化的CPV免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。利用超速离心纯化的病毒作为包被抗原,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D9、3G9和4F6。单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶64、1∶64、1∶128,腹水效价为1∶10^4、1∶10^4、1∶10^5。3株杂交瘤细胞的染色体数分别为92、94、98。亚类鉴定结果显示1D9和3G9重链为IgG1,4F6重链为IgG2b,轻链均为kappa链。病毒中和试验表明,单克隆抗体4F6对CPV具有明显的病毒中和活性。交叉试验表明,3株单克隆抗体均可与CPV特异性结合,与其他犬类常见病毒无交叉反应。本研究制备的单克隆抗体为CPV的检测及其感染动物的治疗提供了物质基础。

关键词：犬细小病毒单克隆抗体中和活性

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