检索结果-内蒙古大学图书馆

鸡传染性支气管病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因分型

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中国免疫学杂志 1998年第1期14卷

作者：江国托刘思国步志高祁贤康丽娟卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨南京农业大学动物医学系江苏南京东北农业大学生物工程系黑龙江哈尔滨

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PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

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中国兽医学报 1997年第5期17卷 431-433页

作者：刘滨东刘思国袁秀芳万梅梅孔宪刚卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标... 详细信息

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。

关键词： PCR 核酸探针传染性支气管炎病毒鸡病

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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 555-558页

作者：陈化兰于康震田国斌唐秀英卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ... 详细信息

禽流感病毒（ＡＩＶ）的表面结构蛋白血凝素（ＨＡ）是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的Ｈ７亚型ＡＩＶ的ＨＡ基因序列，设计合成了１对Ｈ７ＨＡ特异引物，以ＡＩＶＡ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ－Ｑ／９８３／７９／（Ｈ７Ｎ１）（Ａ／Ａｆｒｉ．Ｓｔａｒ．／Ｅｎｇ）核酸为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出１条１．７ｋｂｃＤＮＡ片段。将这一片段定向克隆到ｐＵＣ１８中，对其５′端及３′端部分序列测定后，确证其为ＨＡｃＤＮＡ。将ＨＡ基因置于ＳＶ４０启动子和增强子下游，构建了这一基因的真核表达质粒ｐＳＶＨ７。以此质粒１００μｇ肌肉注射免疫３周龄ＳＰＦ鸡６只，４周后以１００倍鸡胚感染剂量（ＥＩＤ）的ＨＡ基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，１周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离；免疫后１～６周每周对所有鸡翅静脉采血，分离血清，检测ＨＩ抗体。结果，１００μｇ免疫组鸡病毒分离数为０／６，对照组为６／６；攻毒后１周免疫组鸡ＨＩ效价为１∶３２～１∶６４，对照组为１∶４～１∶１６。表明所构建的ＨＡ基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。

关键词：禽流感病毒血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗

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鸡传染性喉气管炎病毒中国王岗株gX基因的克隆及鉴定

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中国兽医学报 1997年第3期17卷 219-221页

作者：张绍杰宋程于力王玫王柳李昌仁童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

以ｐＵＣ１９质粒为载体克隆鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）中国王岗株的ＤＮＡ，构建了鸡传染性喉气管炎病毒ＤＮＡ的ＫｐｎⅠＤＮＡ文库。参考ＩＬＴＶ－ＳＡ２株ｇＸ基因的核酸序列，设计并合成了分别为１２ｂｐ和１３ｂｐ的１对... 详细信息

以ｐＵＣ１９质粒为载体克隆鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）中国王岗株的ＤＮＡ，构建了鸡传染性喉气管炎病毒ＤＮＡ的ＫｐｎⅠＤＮＡ文库。参考ＩＬＴＶ－ＳＡ２株ｇＸ基因的核酸序列，设计并合成了分别为１２ｂｐ和１３ｂｐ的１对引物。以ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法特异性地扩增出０．８４ｋｂ的ＩＬＴＶ－ｇＸ基因片段。以地高辛标记该０．８４ｋｂ的片段为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交从ＩＬＴＶ中国王岗株ＫｐｎⅠＤＮＡ文库中筛选出３个含５．２ｋｂ外源ＩＬＴＶＤＮＡ片段的ｇＸ基因阳性重组子。经酶切分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ检测和该片段部分酶谱分析表明，ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ５．２ｋｂ的ＫｐｎⅠ片段无论是片段大小还是酶切图谱均与ＩＬＴＶ－ＳＡ２株完全相同，而且Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ检测均为ｇＸ阳性。

关键词：传染性喉气管炎病毒基因聚合酶链反应重组子

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新城疫病毒F_(48)E_(9)株HN基因的克隆与酶切分析

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中国兽医学报 1997年第4期17卷 326-330页

作者：曹殿军刘春丽王莉林张莹卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，... 详细信息

为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，结果得到１条分子量约１．８ｋｂ的ＤＮＡ带，与ＮＤＶＨＮ基因的大小一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交进一步证实其为ＨＮ特异性ｃＤＮＡ。随后采用平端连接法将其克隆到ｐＳＶ·Ｓｐｏｒｔｌ质粒中，应用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳｃａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＡｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、和ＳｍａⅠ对ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮｃＤＮＡ重组质粒作单酶或双酶切，结果表明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ基因较ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株的ＨＮ基因缺少１个ＭｌｕⅠ位点（７０５ｂｐ左右），多１个ＰｓｔⅠ位点（８０２ｂｐ左右）。

关键词：新城疫病毒 HN基因克隆与鉴定

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旋毛虫肌幼虫ES抗原特异性蛋白2个结构基因的分子克隆及其高效表达

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 581-588页

作者：阎玉河童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室河南省农业科学院畜牧兽医研究所

旋毛虫肌幼虫排泄－分泌（ＥＳ）抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄－分泌物。为研制具有ＥＳ抗原功能的旋毛虫基因重组抗原，首先用ＡＧＰＣ法提取旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析，发现它缺少真核生物所具有... 详细信息

旋毛虫肌幼虫排泄－分泌（ＥＳ）抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄－分泌物。为研制具有ＥＳ抗原功能的旋毛虫基因重组抗原，首先用ＡＧＰＣ法提取旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ并进行变性琼脂糖凝胶电泳分析，发现它缺少真核生物所具有的２８ＳｒＲＮＡ。根据编码４５０００和４９０００蛋白的基因结构，设计并合成２对ＰＣＲ引物，用ＲＴ－ＰＣＲ方法分别扩增出了２个目的基因（ＴＳＰＧ和ＴＳＰＧⅡ）。序列分析发现，ＴＳＰＧ在第４５８到５０５位之间的核苷酸编码框架与结构基因Ｐ４５的不同，此外，还有多处出现与Ｐ４５不同的碱基。在ＴＳＰＧⅡ核苷酸序列中只有１个碱基与Ｐ４９不同。根据可识别的糖基化位点判定，ＴＳＰＧ和ＴＳＰＧⅡ各含有１个Ｎ－型连接的糖基化位点。将构建的３个重组质粒转化大肠杆菌，通过温度诱导培养，分别在大肠杆菌中表达出３７０００、４６０００和３４０００的重组蛋白，三者的表达水平分别为２２％、１０％和８％；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和ＥＬＩＳＡ检测表明，它们均可被猪旋毛虫病阳性血清和单克隆抗体识别，但特异性有所不同。将ＴＳＰＧⅡ克隆至Ｅ．ｃｏｌｉ－Ｙｅａｓｔ穿梭载体ｐＨＩＬ－Ｓ１上，经内切酶消化和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定后，?

关键词：旋毛虫 ES抗原基因克隆高效表达

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抗新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体的研制及其特异性分析

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中国畜禽传染病 1997年第3期19卷 21-24页

作者：曹殿军刘明王莉林张莹卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

应用纯化的新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ９株免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法检测筛选到４２株分泌抗ＮＤＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并对各株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类、血凝抑制... 详细信息

应用纯化的新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ９株免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法检测筛选到４２株分泌抗ＮＤＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并对各株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类、血凝抑制效价（ＨＩ）、溶血抑制效价（ＨＬＩ）、ＥＬＩＳＡ效价及中和效价加进行了测定，结合单克隆抗体的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应结果鉴定出抗ＮＤＶＨＮ蛋白１１株。

关键词：新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体

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鸡T细胞表面抗原生物学特性

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 559-562页

作者：李一经刘宝全贾永清李海滨卢景良东北农业大学动物医学系中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

对鸡Ｔ细胞特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）１Ｂ６识别的Ｔ细胞膜抗原的理化特性、组织学分布及相应Ｔ细胞的免疫学功能进行了研究。结果表明，由１Ｂ６ＭｃＡｂ识别的Ｔ细胞膜抗原为１条６００００～６５０００的单链蛋白；该抗原分布于... 详细信息

对鸡Ｔ细胞特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）１Ｂ６识别的Ｔ细胞膜抗原的理化特性、组织学分布及相应Ｔ细胞的免疫学功能进行了研究。结果表明，由１Ｂ６ＭｃＡｂ识别的Ｔ细胞膜抗原为１条６００００～６５０００的单链蛋白；该抗原分布于６３．３％的胸腺细胞、１７．３％的脾细胞以及２５％的外周血淋巴细胞。体外试验表明，采用补体介导的细胞溶解试验除去脾细胞中的１Ｂ６＋Ｔ细胞后，其淋巴因子产生活性显著降低。由此证明，１Ｂ６＋Ｔ细胞是淋巴因子产生的主要细胞。根据１Ｂ６ＭｃＡｂ鉴定的Ｔ细胞理化特性、组织学分布及功能特性，１Ｂ６＋Ｔ细胞属于ＣＤ４＋Ｔ细胞。

关键词：鸡 T淋巴细胞表面抗原

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嗜水气单胞菌HEC毒素基因的克隆及酶谱分析

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中国兽医学报 1997年第4期17卷 339-343页

作者：陈怀青陆承平袁世山于康震卢景良南京农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素是该菌重要的致病因子和保护性抗原。为了解其分子生物学特性，用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取了嗜水气单胞菌Ｊ－１株的染色体，经ＥｃｏＲＩ酶切、琼脂糖凝胶电泳后作Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，用ＤＩＧ标... 详细信息

嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素是该菌重要的致病因子和保护性抗原。为了解其分子生物学特性，用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取了嗜水气单胞菌Ｊ－１株的染色体，经ＥｃｏＲＩ酶切、琼脂糖凝胶电泳后作Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，用ＤＩＧ标记的ＨＥＣ毒素探针检测，其５．０ｋｂ的酶切片段呈阳性。回收该片段，与ｐＵＣ１９相连，转化大肠杆菌ＪＭ１０９。提取Ｘ－ｇａｌ平板上白色菌落的质粒，经大小比较、ＥｃｏＲＩ酶切分析及ＤＩＧ标记ＨＥＣ毒素核酸探针斑点杂交鉴定，获得ｐＨＥＣ１１等含５．０ｋｂ目的ＤＮＡ片段的重组质粒。ｐＨＥＣ１１质粒经酶切、电泳，证实目的ＤＮＡ片段中含有ＢａｍＨＩ、ＳｍａⅠ、ＰｓｔⅠ及ＰｖｕⅡ等酶切位点，并绘制了其物理图谱。同时还构建了若干亚克隆，为研制嗜水气单胞菌基因工程苗提供了目的基因片段。

关键词：嗜水气单胞菌 HEC 毒素基因分子克隆物理图谱

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传染性支气管炎病毒中国地方分离株RFLP基因分型的研究

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 530-534页

作者：步志高江国托刘思国王秀荣康丽娟祁贤陈万芳卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学南京农业大学动物医学院

为初步确定我国不同地区流行的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的基因分型，对分离自国内８个不同地域疫区的ＩＢＶＱＤ、ＧＺ、ＺＺ、ＴＪ、ＤＬ、ＹＣ、ＪＳ１和ＪＳ２及参考株Ｍ４１、Ｈ５２和Ｔ的Ｓ１基因ＲＴ－ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ进... 详细信息

为初步确定我国不同地区流行的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的基因分型，对分离自国内８个不同地域疫区的ＩＢＶＱＤ、ＧＺ、ＺＺ、ＴＪ、ＤＬ、ＹＣ、ＪＳ１和ＪＳ２及参考株Ｍ４１、Ｈ５２和Ｔ的Ｓ１基因ＲＴ－ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ进行ＨａｅⅢ的ＲＦＬＰ分析。结果，ＱＤ与ＭＤ４１、Ｈ５２同属Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｅ基因型，ＧＺ、ＺＺ、ＹＣ与Ｔ的基因型相同，ＤＬ、ＪＳ１和ＪＳ２则表现为各自独立的基因型，而ＴＪ则为ＤＬ和Ｔ２种基因型毒株的混合感染，表明我国的广大地域内存在着Ｍａｓｓ基因型、Ｔ基因型和可能的变异株ＩＢＶ的流行。

关键词：传染性支气管炎病毒 RFLP 基因型

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