检索结果-内蒙古大学图书馆

农业环境科学学报 2012年第4期31卷 736-742页

作者：陈俊辉王扬扬郑婕李荣闫新李顺鹏蒋建东南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物重点开放实验室南京210095

以转基因抗虫棉(GK12、33B)及其亲本对照(SM、5415)为材料,利用稀释平板法和基于rRNA基因PCR扩增的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了棉田土壤中细菌数量和群落结构在转基因棉种植第一年的动态变化。结果表明:棉田土壤细菌数量随棉花生... 详细信息

以转基因抗虫棉(GK12、33B)及其亲本对照(SM、5415)为材料,利用稀释平板法和基于rRNA基因PCR扩增的变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了棉田土壤中细菌数量和群落结构在转基因棉种植第一年的动态变化。结果表明:棉田土壤细菌数量随棉花生育期逐渐增加,于花铃中期达到最大值,转基因棉与其亲本之间细菌数量差异不显著。放线菌数量随生育期变化较小,转基因棉与其亲本之间在花铃中期出现显著差异。DGGE结果显示,转基因棉和亲本都存在丰富且相似的条带,聚类分析表明大多数转基因棉和亲本间条带相似性达80%以上,根据不同的生理期分成2个簇;主成分分析表明转基因棉和亲本细菌群落结构没有显著差异,但在不同生育期存在一定差异,表明生育期是影响细菌群落结构的主要因素,与聚类分析结果相吻合。研究结果初步说明转基因棉对棉田土壤细菌数量和群落结构没有显著影响。

关键词：转基因抗虫棉细菌群落变性梯度凝胶电泳(DGGE) 主成分分析

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一株产铁载体细菌的筛选及其与云母的相互作用

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高校地质学报 2012年第1期18卷 117-124页

作者：何琳燕张垠盛下放黄智南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重晨开放实验室南京210095

产铁载体细菌与云母类矿物相互作用的研究有助于了解矿物生物风化和土壤形成的演化规律和机理。采用纯培养法自南京龙山废钾矿区酸模根际土壤分离筛选到一株高产荧光铁载体的细菌Z6,通过16SrDNA序列分析和生理生化反应将其鉴定为假单胞... 详细信息

产铁载体细菌与云母类矿物相互作用的研究有助于了解矿物生物风化和土壤形成的演化规律和机理。采用纯培养法自南京龙山废钾矿区酸模根际土壤分离筛选到一株高产荧光铁载体的细菌Z6,通过16SrDNA序列分析和生理生化反应将其鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.);通过室温静置培养试验研究Z6菌株与云母的相互作用结果表明,细菌生长代谢前期(8～15d)快速产生大量铁载体,菌株与矿物共培养75d后,产铁载体细菌对云母类矿物确实产生了风化作用,黑云母组发酵液中Fe含量增加了211倍,Si含量增加了约27.8倍,SEM显示云母表面出现溶蚀坑,细菌可以在矿物表面形成生物膜或矿物-细菌复合物。不同矿物对共培养体系中细菌数量、荧光铁载体含量、溶液pH的影响不同。

关键词：荧光铁载体细菌云母类矿物生物风化作用

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农药污染微生物降解研究及应用进展

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南京农业大学学报 2012年第5期35卷 93-102页

作者：崔中利崔利霞黄彦闫新何健李顺鹏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物重点开放实验室江苏南京210095

农药污染与人们的日常生活息息相关,一直是科学家关注的环境污染热点问题。微生物因其种类丰富、分布广泛、适应性强和代谢途径多样的特点显现出自身在农药污染治理方面的优势。本文总结了近10年来,南京农业大学农业部农业环境微生物重... 详细信息

农药污染与人们的日常生活息息相关,一直是科学家关注的环境污染热点问题。微生物因其种类丰富、分布广泛、适应性强和代谢途径多样的特点显现出自身在农药污染治理方面的优势。本文总结了近10年来,南京农业大学农业部农业环境微生物重点开放实验室在农药残留微生物降解方面取得的进展,从降解性微生物资源的分离收集,到微生物降解代谢途径分析、降解过程中的关键基因或基因簇的克隆,及在微生物遗传操作方法 SEFA PCR(self-formed adaptor PCR)、基因工程菌的构建等方面进行了详细论述,旨在为降解性微生物在环境修复、生物转化等方面的应用提供理论和实践依据。

关键词：农药污染微生物资源代谢途径基因或基因簇 SEFA PCR 基因工程菌

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Methylobacterium sp. YAL-2对乙酰甲胺磷的降解特性

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应用与环境生物学报 2012年第3期18卷 438-443页

作者：王莉凌琪汤利华李顺鹏蒋建东安徽建筑工业学院环境与能源工程系合肥230022 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

从有机磷生产厂家的下水道污泥中分离出一株对高浓度和低浓度乙酰甲胺磷都具有高效降解能力的寡营养菌YAL-2,根据形态、生理生化和16S rRNA基因系统发育分析,将菌株YAL-2鉴定为Methylobacterium sp.降解特性实验表明,菌株YAL-2能利用乙... 详细信息

从有机磷生产厂家的下水道污泥中分离出一株对高浓度和低浓度乙酰甲胺磷都具有高效降解能力的寡营养菌YAL-2,根据形态、生理生化和16S rRNA基因系统发育分析,将菌株YAL-2鉴定为Methylobacterium sp.降解特性实验表明,菌株YAL-2能利用乙酰甲胺磷为唯一碳源生长和降解;在添加了甲醇的无机盐培养基中,84 h可完全降解300mg L-1乙酰甲胺磷,24 h将50 mg L-1和10 mg L-1乙酰甲胺磷降至非检测水平;4 d能完全去除100 mg L-1甲胺磷,5 d分别降解58.4%和40.6%的100 mg L-1乐果、敌敌畏.小青菜农药残留去除实验显示,菌株YAL-2可在7 d内将乙酰甲胺磷和甲胺磷将至限量水平.结果表明,将菌株YAL-2应用于保证果蔬等食品的食用安全是可行的.

关键词：乙酰甲胺磷 Methylobacterium sp. YAL-2 降解特性系统发育分析农药残留去除

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假单胞菌菌株CTN-3对百菌清污染土壤的生物修复

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应用生态学报 2012年第3期23卷 807-811页

作者：王光利陈宏宏毕萌李顺鹏南京农业大学生命科学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 淮北师范大学生命科学学院资源植物学安徽省重点实验室安徽淮北235000

百菌清被美国环境保护署列为优先控制污染物,利用微生物的降解作用修复被污染的土壤、清除环境中的污染物等具有重要的现实意义.假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株CTN-3是一株从污染土壤中分离得到的百菌清降解菌,考察了其在实验室条件下... 详细信息

百菌清被美国环境保护署列为优先控制污染物,利用微生物的降解作用修复被污染的土壤、清除环境中的污染物等具有重要的现实意义.假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株CTN-3是一株从污染土壤中分离得到的百菌清降解菌,考察了其在实验室条件下对百菌清污染土壤的生物修复能力及其影响因素.结果表明:降解菌株在灭菌土壤中的降解效果略好于未灭菌土壤;在外源添加降解菌106CFU.g-1、温度15～30℃和pH 5.8～8.3条件下,该菌株能有效降解土壤中10～200 ***-1的百菌清.菌株CTN-3在百菌清污染土壤的生物修复中具有良好的应用前景.

关键词：百菌清假单胞菌生物修复影响因素

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灵芝中基于内源ura3基因的多基因沉默系统的建立及其应用

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菌物研究 2013年第2期11卷 145-145页

作者：穆大帅师亮任昂李梦娇吴凤礼姜爱良赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

灵芝是一种重要的药用真菌,然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究,灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢。该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法,利用灵芝内源乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向筛选标... 详细信息

灵芝是一种重要的药用真菌,然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究,灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢。该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法,利用灵芝内源乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向筛选标记,构建4种沉默载体(颈环结构沉默载体,正向沉默载体,反向沉默载体以及正反双向启动子沉默载体),并基于此转基因方法实现了对灵芝内源基因的沉默。通过系统比对以上4种沉默方法,发现4种沉默方法都不同程度地下调了ura3基因的表达,其中双向启动子沉默不仅载体构建方便并且能够获得最高的沉默效率(达到81.9%)。利用这种双向启动子沉默载体以及ura3的反向筛选特性,建立了灵芝的共沉默体系,发现共沉默下基因转录的下调有一定的相关性,提高了基因沉默的筛选效率。该反向遗传体系的建立有助于深入研究灵芝中单基因或多基因的功能,推动灵芝等大型担子菌的分子遗传研究进展。

关键词：灵芝基因沉默共沉默电击转化

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灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因的克隆及其表达特性

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菌物研究 2013年第2期11卷 142-142页

作者：任昂欧阳翔师亮姜爱良穆大帅李梦娇韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标。灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(A hy-droxymethylglutary-l CoA synthase,GlHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标。灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(A hy-droxymethylglutary-l CoA synthase,GlHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化酶,催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,对于灵芝三萜的合成起着十分重要的作用。分别以灵芝总基因组DNA和反转录的原基cDNA为模板,扩增得到GlHMGS基因的全长DNA和cD-NA序列,该基因DNA全长1 870 bp,其中ORF为1 413 bp,编码471个氨基酸,推测的分子量为51.14kD。通过比对获得的DNA和cDNA序列,发现GlHMGS由5个外显子和4个内含子构成。与NCBI数据库中HMGS的蛋白序列比对发现,GlHMGS与解脂耶罗威亚酵母的HMGS表现出最高的同源性(51%)。进化树分析也表明GlHMGS与真菌亲缘关系最近,这与灵芝的物种分类相吻合。通过酿酒酵母HMGS缺陷的菌株证实所得GlHMGS能够使HMGS缺陷的表型得到互补,证实GlHMGS的功能。利用SEFA-PCR技术扩增GlHMGS基因上游启动子序列,该序列长约1 561 bp,用Softberry等软件对启动子序列进行分析,发现GlHMGS基因启动子中包含有明显的TATA-box和CAAT-box,并发现了多个与甾醇、激素和环境压力等调节相关的顺式作用元件。进一步研究发现,茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸能够提高GlHMGS基因的转录水平。在研究不同发育阶段和不同碳源对GlHMGS基因的影响时,发现GlHMGS基因的表达水平分别在第16天和以麦芽糖为碳源时达到最大。通过过量表达GlHMGS基因能够显著提高灵芝三萜含量。

关键词：灵芝三萜 HMG-CoA合酶功能验证表达谱过量表达

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茉莉酸甲酯对灵芝三萜生物合成的影响及其灵芝应答基因的差异表达

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菌物研究 2013年第2期11卷 141-141页

作者：任昂李梦娇师亮穆大帅姜爱良韩琴赵明文南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标。经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合... 详细信息

灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标。经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合成酶等基因的表达。通过在灵芝中建立的cDNA-AFLP体系,采用64对引物组合对灵芝的转录组进行分析。64对引物组合共产生3 910个TDFs。茉莉酸甲酯不同诱导条件下约有919个TDFs的表达谱发生了变化,占表达谱的23.5%,其中上调表达的有703个,下调表达的有216个。选择458个TDFs进行回收、TA克隆、测序后,获得390个高质量的TDFs片段。通过蛋白数据库同源性检索,并对蛋白功能进行GO分类,结果表明:390个高质量的TDFs中,BlastX比对后没有显著匹配的序列占77.1%。在有匹配蛋白的序列中,与碳代谢及能量相关的基因为最大一组,占35.2%,转录调控类及信号传导类基因分别占14.3%和11.0%。通过荧光定量PCR技术考察了茉莉酸甲酯对20个基因转录水平的影响,与cDNA-AFLP分析的结果相一致。并通过灵芝基因过量表达技术和基因沉默技术对筛选到的相关基因进行沉默和过量表达,研究筛选到的基因在灵芝三萜生物合成与调控中的作用,获得大量参与灵芝三萜生物合成与调控的候选基因,进一步阐明了茉莉酸甲酯诱导下灵芝基因表达的变化图。

关键词：灵芝茉莉酸甲酯均匀设计 cDNA-AFLP分析过量表达基因沉默

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细胞自噬在多柔比星诱导淋巴瘤细胞凋亡中的作用

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第二军医大学学报 2012年第6期33卷 595-598页

作者：范佳君曾贤李玉彬王晓丹王子玉鞠佃文同济大学生命科学与技术学院上海200092 复旦大学药学院生物合成教研室上海200433 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095

目的研究细胞自噬在多柔比星诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。方法以含不同浓度多柔比星的培养液培养Raji细胞,采用蛋白质印迹法观察Raji细胞自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况... 详细信息

目的研究细胞自噬在多柔比星诱导Raji细胞发生细胞凋亡过程中所起的作用。方法以含不同浓度多柔比星的培养液培养Raji细胞,采用蛋白质印迹法观察Raji细胞自噬相关蛋白的表达,并用MDC染色法观察Raji细胞内的自噬体和自噬溶酶体的形成情况;在给予多柔比星的同时使用PI3K通路抑制剂3-MA和自噬溶酶体抑制剂NH4Cl对细胞自噬进行抑制,利用MTT法和流式细胞术测定Raji细胞的细胞活力与凋亡情况。结果给予多柔比星后,Raji细胞的LC3Ⅱ表达水平和MDC染色荧光强度均高于对照组(P<0.05),证明多柔比星能诱导Raji细胞发生细胞自噬。给予多柔比星后,Raji细胞生长受到抑制,凋亡增加(P<0.01);用细胞自噬抑制剂3-MA和NH4Cl抑制自噬后,细胞生长受抑和凋亡增加现象更加显著(P<0.05,P<0.01)。结论在多柔比星杀伤Raji细胞的过程中会诱导细胞发生自噬,抑制自噬能够增强多柔比星对Raji细胞的杀伤作用。

关键词：多柔比星自噬细胞凋亡淋巴瘤

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降解菌djl-6多菌灵水解酶的提取及性质

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应用与环境生物学报 2012年第2期18卷 272-275页

作者：许敬亮王志春王堃洪青李顺鹏南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 中国科学院广州能源研究所/中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室广州510640

以往对多菌灵降解菌Rhodococcus qingshengii ***-6的降解途径研究显示,该菌株首先通过多菌灵水解酶将多菌灵水解成二氨基苯并咪唑,从而对多菌灵进行脱毒.为开发酶制剂并有效应用于环境中残留污染物多菌灵的降解,比较了不同提取方法（... 详细信息

以往对多菌灵降解菌Rhodococcus qingshengii ***-6的降解途径研究显示,该菌株首先通过多菌灵水解酶将多菌灵水解成二氨基苯并咪唑,从而对多菌灵进行脱毒.为开发酶制剂并有效应用于环境中残留污染物多菌灵的降解,比较了不同提取方法（高压细胞破碎、超声波破碎和添加溶菌酶破碎）对多菌灵水解酶提取效率的影响,并对其酶学特性进行了初步研究.结果表明,djl-6菌株在LB培养基中培养72~84 h,生长量和产酶量均达到最大值.采用超声波破碎提取酶的效率较高（蛋白浓度为7.92 mg/mL）,但酶活损失较大（比酶活只有1.2 U/μg protein）.多菌灵水解酶属于一种胞内组成型酶.该酶水解多菌灵的最适pH值为7.0,最适温度为30℃,Zn2＋和K＋对酶活有一定的抑制作用.

关键词： Rhodococcus qingshengii sp.nov.djl-6 多菌灵水解酶降解途径提取方法酶学特性

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