检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第3期34卷 311-317页

作者：金亚美林矫矫冯新港张亮吴祥甫周元聪蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室

根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白基因SmGcp序列和日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区的基因片段SjGcp1分别设计三对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 1949bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段含编码日本... 详细信息

根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白基因SmGcp序列和日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区的基因片段SjGcp1分别设计三对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出大小为 1949bp的基因片段。经序列分析推断该基因片段含编码日本血吸虫抱雌沟蛋白基因的完整阅读框 ,与SmGcp碱基一致性为 85 % ,其理论推测氨基酸组成与曼氏血吸虫抱雌沟蛋白的一致性为 83.7%。将上述扩增的基因片段克隆到表达载体pET2 8c(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得表达 ,融合表达产物分子量约为 80kD。利用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,说明该编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因的表达产物具有抗原性

关键词：日本血吸虫抱雌沟蛋白基因克隆基因表达

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柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株与敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

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生物工程学报 2005年第3期21卷 435-439页

作者：姜连连黄兵韩红玉赵其平董辉陈兆国中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有5个蛋白质斑点,利用MALDI_TOF_TOF质谱技术对其中4个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得4个明... 详细信息

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有5个蛋白质斑点,利用MALDI_TOF_TOF质谱技术对其中4个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得4个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中2个蛋白质分别为球虫子孢子表面抗原TA4和热休克蛋白Hsp70 ,另外两种为真核细胞的功能蛋白。上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫地克株利抗药株的分子标志物提供了研究方向。

关键词：柔嫩艾美耳球虫,抗药性,地克株利,蛋白质组

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血吸虫性别特异性表达产物研究现状及展望

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中国人兽共患病杂志 2000年第5期16卷 91-93页

作者：朱建国蔡幼民林矫矫中国农科院上海家畜寄生虫研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

血吸虫病(schistosomiasis)为世界性分布、危害严重的人畜共患的寄生虫病 . 研究表明,血吸虫在脊椎动物体内不繁殖,其成虫致病作用不大,而性成熟雌虫产生的大量虫卵在动物肝脏形成肉芽肿是导致发病的主要原因[1].

关键词：血吸虫病性别特异性表达产物 cDNA文库

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日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析

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生物工程学报 2010年第3期26卷 317-323页

作者：彭金彪韩宏晓洪炀王艳郭凡吉石耀军傅志强刘金明程国锋林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cD... 详细信息

本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cDNA,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665。荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白。利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为672bp。经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18d童虫期表达量最高,32d次之。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5kDa。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率。本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。

关键词：日本血吸虫 Cyclophilin B(CyPB) 克隆和表达免疫保护效果

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柔嫩艾美耳球虫HSP基因的克隆、表达及鉴定

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生物工程学报 2009年第8期25卷 1121-1129页

作者：颜彦韩红玉黄兵赵其平董辉姜连连李玉剑樊玉娟姚倩中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为研究柔嫩艾美耳球虫热激蛋白(Heat shock proteins,HSPs)的生物学特性,应用RACE和RT-PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫子孢子中首次克隆获得了EtHSP的全长cDNA(GenBank Accession ***911605)。EtHSP包含一个1455 bp的开放阅读框,编码484个氨... 详细信息

为研究柔嫩艾美耳球虫热激蛋白(Heat shock proteins,HSPs)的生物学特性,应用RACE和RT-PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫子孢子中首次克隆获得了EtHSP的全长cDNA(GenBank Accession ***911605)。EtHSP包含一个1455 bp的开放阅读框,编码484个氨基酸,预测表达蛋白的分子量大小为53.5 kD。应用Real-time PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析,发现该基因在子孢子阶段的表达明显高于其他阶段。同时,构建了原核表达重组质粒pET28a(+)-EtHSP,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。结果显示,重组质粒pET28a(+)-EtHSP在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经1 mmol/L IPTG诱导6 h后的表达量最高,该蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美球虫热激蛋白发育阶段免疫原性

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日本血吸虫重组抗原SjPGAM-SjEnol的保护性免疫效果评价

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第4期28卷 246-251页

作者：郭凡吉王艳李晔彭金彪洪炀邱春辉陈实傅志强石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（*** BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表... 详细信息

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（*** BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a（＋）-SjPGAM-SjEnol,并在*** BL21中表达。用蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol（A组）、pET28a-SjPGAM（B组）、pET28a-SjEnol（C组）（各27μg）与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组（D组）和空白对照组（E组）。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数（EPG）,计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量（Mr）为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组（18.5%）、C组（14.7%）比较,差异有统计学意义（均P〈0.05）;肝减卵率与B组（47.5%）、C组（30.5%）比较,差异也有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平（2.372±0.268）,与D组（0.490±0.138）、E组（0.220±0.088）间的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论成功构建了重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol,多表位重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol在小鼠抗血吸虫感染中比单一重组抗原pET28a-SjPGAM和pET28a-SjEnol诱导了更高的免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶烯醇酶多表位疫苗免疫保护

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日本血吸虫凋亡基因Sjcaspase3的克隆、真核表达及其功能分析

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生物工程学报 2016年第7期32卷 889-900页

作者：王涛洪炀韩宏晓吕超贾秉光曹晓丹韩倩陆珂李浩傅志强林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为深入研究日本血吸虫细胞凋亡机制。利用PCR技术扩增得到Sjcaspase3的全长序列,其ORF含900 bp,编码299个氨基酸,理论分子量为33 509.7 Da,理论等电点为6.39。Real-time PCR分析表明该基因在日本血吸虫生长发育的各个时期均有表达,其中2... 详细信息

为深入研究日本血吸虫细胞凋亡机制。利用PCR技术扩增得到Sjcaspase3的全长序列,其ORF含900 bp,编码299个氨基酸,理论分子量为33 509.7 Da,理论等电点为6.39。Real-time PCR分析表明该基因在日本血吸虫生长发育的各个时期均有表达,其中21 d表达量最高,42 d雌虫表达量高于42 d雄虫。成功构建了p XJ40-FLAG-Sjcaspase3重组质粒并转染到Hela细胞内,荧光定量PCR和Western blotting分析表明Sjcaspase3成功在Hela细胞中表达。酶活分析提示重组Sjcaspase3具有切割特异性底物天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(DEVD)的活性。流式细胞术检测了Sjcaspase3可诱导Hela细胞发生早期细胞凋亡。研究结果为深入探讨Sjcaspase3的生物学功能及日本血吸虫细胞凋亡机制奠定了基础。

关键词：日本血吸虫 caspase3 细胞凋亡酶活细胞流式

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银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

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中国兽医学报 2006年第4期26卷 369-372页

作者：韩红玉姜连连赵其平董辉陈兆国林矫矫黄兵中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

以柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料,用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板,用O ligo(dT)12GG为锚定引物和... 详细信息

以柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料,用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板,用O ligo(dT)12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RT-PCR,产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5条差异条带,进行2次PCR扩增,产物回收后与PGEM-T-easy V ector连接转化。经PCR鉴定正确后,再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现,地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段(可能为新的基因片段),这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫抗药性银染mRNA差异显示基因克隆

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柔嫩艾美耳球虫抗马杜拉霉素、地克珠利虫株特异消减文库的构建

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中国农业科学 2005年第8期38卷 1712-1716页

作者：韩红玉赵其平姜连连董辉陈兆国黄兵中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)敏感株孢子化卵囊为驱动组,马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子... 详细信息

以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)敏感株孢子化卵囊为驱动组,马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子化卵囊之间差异表达基因的消减cDNA文库。随机从两个消减文库中分别挑取50个克隆,经PCR鉴定马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊的消减文库重组率分别为96%和98%,差异基因片段大小分布在250bp～1.0kb之间。从每个文库中随机挑取65个阳性克隆经斑点杂交试验,分别选择表达量上调的6个克隆进行序列分析和同源性比较。结果发现,有4个cDNA片段可能是新基因片段,与地克珠利抗药株的产生有关;有3个新的cDNA片段可能与马杜拉霉素抗药株的产生有关。这些结果将为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生及发展的分子机理奠定了一定的基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素地克珠利抗药性相关基因抑制消减杂交基因克隆

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日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白编码基因的克隆和表达

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生物化学与生物物理学报 2000年第5期32卷 545-549页

作者：朱建国林矫矫冯新港吴祥甫周元聪蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室!上海200232 中国科学院上海生物化学研究所上海200031中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室!上海200232中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫

根据曼氏血吸虫肌动蛋白基因SmAct2设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出一大小为 1131bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框基因 ,与SmAct2碱基同源性为 92 %。将... 详细信息

根据曼氏血吸虫肌动蛋白基因SmAct2设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用RT PCR法扩增出一大小为 1131bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段为编码肌动蛋白基因的完整阅读框基因 ,与SmAct2碱基同源性为 92 %。将其克隆到表达载体 pET2 8a(+)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得了较高量的表达 ,融合表达产物分子量约为 47kD。利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Western印迹检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,说明所克隆的基因为编码日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白基因。

关键词：日本血吸虫肌动蛋白基因克隆基因表达

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