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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第6期30卷 480-485,490页

作者：蒲元华张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生虫,对人类健康和畜牧业的发展造成严重危害。近年来,对弓形虫入侵宿主的机制及免疫学方面进行了大量研究,取得了许多重要的研究进展,有助于深入了解弓形虫的致病机制和进行免疫预防... 详细信息

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生虫,对人类健康和畜牧业的发展造成严重危害。近年来,对弓形虫入侵宿主的机制及免疫学方面进行了大量研究,取得了许多重要的研究进展,有助于深入了解弓形虫的致病机制和进行免疫预防。本文拟从细胞与分子生物学角度阐述弓形虫入侵宿主细胞的过程,并综述宿主感染弓形虫后不同免疫细胞的作用以及不同器官的免疫应答。

关键词：弓形虫入侵机制免疫细胞免疫学

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寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第2期30卷 146-151页

作者：姚菊霞付宝权中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿... 详细信息

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿主免疫应答,适应寄生生活中起着重要作用。本文综述了半胱氨酸蛋白酶抑制剂的基本类型、结构特征和作用机制,以及寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展。

关键词：寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂免疫调节

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日本血吸虫SjELAV-like 1的克隆、表达及功能分析

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中国农业科学 2018年第13期51卷 2600-2613页

作者：许蓉张媛媛李肖纯程贵凤何川川郭露李浩刘金明古少鹏金亚美山西农业大学动物科技学院中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海师范大学生命科学学院

【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1(Sj ELAV-like 1),分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得Sj ELAV-like 1基因序列提交至... 详细信息

【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1(Sj ELAV-like 1),分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得Sj ELAV-like 1基因序列提交至NCBI,Gene Bank登录号:MG515727,构建该序列的重组表达质粒p ET28-Sj ELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集不同诱导时间的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用于Western blotting分析虫体内该天然蛋白的免疫原性,以及间接免疫荧光检测该蛋白在虫体内的分布情况。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集不同发育阶段混合虫体和合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体,通过荧光定量PCR分析该基因的表达情况。通过尾静脉注射小干扰RNA(si RNA)于感染小鼠体内,使该基因表达沉默,筛选最佳干扰效果的si RNA,用于长期RNA干扰(RNAi)试验,分析其对日本血吸虫雌虫产卵及卵胚孵化的影响。利用扫描电镜和透射电镜观察RNAi对虫体体被结构及雌、雄虫生殖器官的影响。【结果】获得的1 797 bp的Sj ELAV-like 1基因序列含有poly A尾,其中编码序列为1 533 bp,编码510个氨基酸。重组质粒p ET28-Sj ELAV-like 1在诱导4 h时表达量最高,主要以包涵体的形式存在,利用纯化蛋白获得了优质多抗,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,经分析发现Sj ELAV-like 1蛋白主要分布在虫体体被。荧光定量分析发现Sj ELAV-like 1在不同时期雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无明显差异。RNAi试验中,与NC组相比,长期干扰组小鼠肝减卵率、雌虫对肝卵贡献减少率和卵胚减孵化率分别为58.27%(P<0.05)、40.59%(P<0.01)和74.58%(P<0.01);电镜观察发现,干扰组虫体体被结构改变,雄虫体表粘附的泡状物消失,立体的褶脊结构塌陷,整齐排列的条索状皮脊变的疏松,网状结构消失,雌虫体壁表面组织间隙增宽,分布于其上的体棘减少、变钝,雄虫精母细胞数目减少,其内的染色质减少,细胞肿大,细胞间隙增宽,雌虫卵黄细胞中卵黄球减少,其中包含的卵黄滴也减少,内质网肿大,皮质颗粒排列散乱。【结论】成功克隆和表达了在日本血吸虫发育阻遏雌虫中高表达的部分Sj ELAV-like 1基因序列,且该基因主要在虫体体被表达。该基因沉默使肝脏荷卵数、雌虫对肝卵贡献率和卵胚孵化率均显著降低,并改变虫体体被结构,抑制生殖腺的正常发育,提示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的作用。

关键词：日本血吸虫 SjELAV-like 1 原核表达免疫定位 RNA干扰电镜

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东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 963-968页

作者：宋震宇刘金明何金桃孙帅石耀军李浩陆珂林矫矫岳城新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

本研究利用前期研究中东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库获得的10个阳性克隆中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。研究发现与... 详细信息

本研究利用前期研究中东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库获得的10个阳性克隆中的8个噬菌体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因。研究发现与空白对照组相比,展示血吸虫锌指蛋白的1号噬菌体克隆免疫组在两次实验中分别获得了32.10%和31.25%的减虫率、61.14%和47.31%的肝脏减卵率,虫体合抱率分别由92.59%、57.39%下降到69.09%、41.03%;其它噬菌体克隆单独免疫组或联合免疫组在第一次实验中均获得了8.02%～32.72%的减虫率和40.19%～69.53%的减卵率,但在第二次实验中未能得到验证。研究结果提示,日本血吸虫环状锌指蛋白(1号克隆)编码基因在疫苗方面具有重要研究价值。

关键词：日本血吸虫噬菌体展示抗原免疫环状锌指蛋白

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日本血吸虫章鱼胺受体基因的克隆表达及分析

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中国兽医科学 2013年第8期43卷 776-781页

作者：孟培培魏梅梅熊雅念黄莉妮艾德宙洪炀伍妙梨程相朝林矫矫傅志强河南科技大学河南洛阳471003 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

为克隆日本血吸虫章鱼胺受体(SjOAR)基因,揭示其表达情况以及表达产物的分布情况,利用PCR方法克隆了SjOAR基因。Blast分析表明,该基因与终末宿主对应的肾上腺素受体基因的同源性较低。利用大肠杆菌表达了受体蛋白的保守区段。Western-b... 详细信息

为克隆日本血吸虫章鱼胺受体(SjOAR)基因,揭示其表达情况以及表达产物的分布情况,利用PCR方法克隆了SjOAR基因。Blast分析表明,该基因与终末宿主对应的肾上腺素受体基因的同源性较低。利用大肠杆菌表达了受体蛋白的保守区段。Western-blot分析结果表明,重组蛋白能被成虫抗原抗血清识别,其特异性抗体也能识别天然受体蛋白。实时定量RT-PCR分析结果显示,SjOAR基因在血吸虫的童虫和成虫中转录差异不大。免疫组化观察显示,该受体蛋白在日本血吸虫体被下方的肌层和生殖系统中分布较多。结果表明,日本血吸虫章鱼胺受体有作为抗血吸虫药物研究靶标的潜力。

关键词：日本血吸虫章鱼胺受体基因转录分布

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吡喹酮直肠给药治疗小鼠血吸虫病实验研究

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第6期23卷 674-676,686页

作者：杨艺王建民江艳李小红刘毅朱传刚石耀军沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室

目的观察吡喹酮直肠给药对小鼠日本血吸虫病的治疗效果。方法各实验组每只小鼠分别腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴40±2条。感染后第42天以吡喹酮直肠给药,按给药不同剂量设为3组,每组每只小鼠按100、200、400mg/kg一次给药,同时设不... 详细信息

目的观察吡喹酮直肠给药对小鼠日本血吸虫病的治疗效果。方法各实验组每只小鼠分别腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴40±2条。感染后第42天以吡喹酮直肠给药,按给药不同剂量设为3组,每组每只小鼠按100、200、400mg/kg一次给药,同时设不给药对照组。给药1周后进行剖杀,计算减虫率、减肝卵率以及减配对率。结果 200mg/kg组减虫率为57.63%,减配对率为76.60%;400mg/kg组减虫率为49.15%,减配对率为51.06%,减虫率、减配对率效果优于100mg/kg组。结论吡喹酮直肠给药方式效果较好,可为防治家畜血吸虫病提供新的选择。

关键词：日本血吸虫病吡喹酮直肠给药小鼠

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高效液相色谱法测定鱼饲料中的喹烯酮

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畜牧与兽医 2007年第1期39卷 35-37页

作者：刘元元张丽芳邹思湘薛飞群南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部寄生虫病学重点开放实验室上海200232

建立了高效液相色谱法来测定鱼饲料中的喹烯酮含量。饲料用乙腈提取,色谱柱:Scienhome Kromasil C18(4.6×250,5μm);流动相:乙腈-水(体积比为45∶55),流速为1.0 mL/min,在380 nm下检测,喹烯酮的质量在0.04-0.6μg范围内与峰面积呈... 详细信息

建立了高效液相色谱法来测定鱼饲料中的喹烯酮含量。饲料用乙腈提取,色谱柱:Scienhome Kromasil C18(4.6×250,5μm);流动相:乙腈-水(体积比为45∶55),流速为1.0 mL/min,在380 nm下检测,喹烯酮的质量在0.04-0.6μg范围内与峰面积呈良好线性关系,R2=0.9999,3个不同浓度下样品的回收率分别为90.27%,95.47%和97.49%。

关键词：喹烯酮高效液相色谱法鱼饲料喹恶啉-1,4-二氧化物

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堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建及鉴定

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复旦学报（自然科学版） 2007年第6期46卷 937-940,946页

作者：闫晓菲韩红玉岳城黄兵赵其平姜连连董辉卞庆松张建哲新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

构建堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊cDNA表达文库,以筛选其功能性基因.用TRI-ZOL Reagent试剂提取堆形艾美耳球虫总RNA,再用Oligo（dT）12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,RT-PCR法反转录合成cDNA第一链,用LD... 详细信息

构建堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊cDNA表达文库,以筛选其功能性基因.用TRI-ZOL Reagent试剂提取堆形艾美耳球虫总RNA,再用Oligo（dT）12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,RT-PCR法反转录合成cDNA第一链,用LD-PCR法扩增合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离去除小于400 bp的片段后,将cDNA与已经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体按一定比例连接,经体外包装,建立堆形艾美耳球虫孢子化卵囊的噬菌体表达文库.随后测定文库容量为4.6×10^6pfu/mL,扩增文库的滴度为4.4×10^10pfu/mL,重组率达到98%,插入片段大小为750-1 000 bp,并从扩增文库中扩增出了堆形艾美耳球虫巨噬细胞游走抑制因子基因片段.

关键词：鸡球虫堆形艾美耳球虫孢子化卵囊 cDNA文库

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豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)的多抗制备、组织分布及活性研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第5期38卷 595-601页

作者：王莉杰王立群刘婷丽张少华刘光学李艳萍梁盼红骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

目的研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。方法利用原核表达的重组Cpserpin (rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blot... 详细信息

目的研究豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂(Cpserpin)的组织分布及其对丝氨酸蛋白酶的抑制效果。方法利用原核表达的重组Cpserpin (rCpserpin)免疫家兔,采用间接ELISA检测免疫后血清的效价,取免疫兔血清,制备抗体并纯化后,采用Western blotting对多克隆抗体进行特异性分析,通过免疫组化试验分别观察rCpserpin在豆状带绦虫成虫和幼虫中的组织分布。构建重组质粒pPIC9K-Cpserpin,线性化后转化至毕赤酵母KM71感受态细胞,用G418筛选的高拷贝菌株进行诱导表达并纯化rCpserpin,采用发色底物法检测不同浓度(6、9、 18、 21μg/ml) rCpserpin对0.5μg/mlα-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等3种丝氨酸蛋白酶活性的抑制效果。结果间接ELISA检测结果显示,免疫血清多抗IgG抗体的效价达1∶51 200。Western blotting分析结果显示,纯化后的多克隆抗体可与rCpserpin和兔豆状囊尾蚴虫体可溶性抗原产生特异性反应。免疫组化试验结果显示,Cpserpin在囊尾蚴阶段表达量很低,但在成节和孕节中高度表达,广泛分布于虫体体壁和虫卵中。酵母表达的rCpserpin随浓度增加对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶的抑制效果分别增强,在21μg/ml浓度时,对3种丝氨酸蛋白酶的抑制率最高,分别为(50.5±2.5)%、(71.5±1.5)%和(77.4±1.5)%(均P <0.05)。结论 rCpserpin多克隆抗体具有特异性,在豆状囊尾蚴成节和孕节中高表达,且其对α-糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶有较强的抑制作用。

关键词：豆状囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂组织分布酶活性

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感染日本血吸虫小鼠肝脏miR-17-92簇表达变化的研究

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中国动物传染病学报 2018年第3期26卷 64-71页

作者：刘军涛陈永军朱丽慧夏天奇王立辉程国锋中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241 天津农学院天津300384

研究表明miR-17-92簇在诸多生命进程中发挥着重要作用。本研究目的是分析感染日本血吸虫小鼠肝脏不同时期miR-17-92簇的表达水平及其靶基因蛋白水平的表达变化,为进一步研究肝脏病理损害的分子机理奠定基础。q RT-PCR分析表明miR-17-92... 详细信息

研究表明miR-17-92簇在诸多生命进程中发挥着重要作用。本研究目的是分析感染日本血吸虫小鼠肝脏不同时期miR-17-92簇的表达水平及其靶基因蛋白水平的表达变化,为进一步研究肝脏病理损害的分子机理奠定基础。q RT-PCR分析表明miR-17-92簇在感染日本血吸虫小鼠肝脏的不同感染时期呈现差异变化,随着时间延长呈现升高趋势;q RT-PCR和免疫印迹分析表明miR-17-92簇靶基因在感染日本血吸虫小鼠的肝脏呈现差异变化,进一步研究表明感染日本血吸虫小鼠血浆中miR-17-92簇的丰度也呈现差异变化。研究提示miR-17-92簇在血吸虫感染的终末宿主的肝脏病理损害中可能发挥重要的调控作用,也有可能成为血吸虫病引起宿主肝脏病变损伤诊断的新型标识分子。

关键词：日本血吸虫 microRNAs miR-17-92簇肝脏病理损害

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