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microRNA-654调控巨噬细胞游走抑制因子抗东方泰勒虫感染长角血蜱的作用

中国兽医科学 2022年第8期52卷 1023-1030页

作者：罗金刘文阁任巧云严若峰宋小凯刘光远李祥瑞南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

为了解microRNA(mi RNA)调控巨噬细胞游走抑制因子(MIF)抗东方泰勒虫感染长角血蜱的作用,利用PCR扩增获得MIF基因的完整ORF,并进行体外原核表达,制备抗原免疫家兔,验证MIF重组蛋白对长角血蜱发育的影响。另外,预测可能调控MIF基因的mi ... 详细信息

为了解microRNA(mi RNA)调控巨噬细胞游走抑制因子(MIF)抗东方泰勒虫感染长角血蜱的作用,利用PCR扩增获得MIF基因的完整ORF,并进行体外原核表达,制备抗原免疫家兔,验证MIF重组蛋白对长角血蜱发育的影响。另外,预测可能调控MIF基因的mi RNA分子,用双荧光素酶报告系统分析mi RNA与靶标基因之间的调控关系,并解析此作用下靶标基因引起的抗病原作用。结果显示,MIF基因是一个包含348 bp核酸,编码116个氨基酸的片段。动物免疫试验证实,MIF+GST重组蛋白对蜱发育的各项生理指标影响较小。并且MIF受mi R-654的负调控,其调控效率达到60%。在蜱体中,mi RNA抑制后的MIF表达对东方泰勒虫感染不同发育阶段的长角血蜱有一定的识别和清除作用,可降低蜱体中约55%的虫体。尽管MIF对蜱的发育没有明显影响,但是在蜱抗病原感染过程中扮演着重要的角色。mi RNA作为功能基因的重要调控因子,在MIF识别和清除病原方面发挥着重要作用。为进一步蜱传疾病的防控提供了新的策略。

关键词：巨噬细胞游走抑制因子 microRNA 长角血蜱东方泰勒虫抗感染

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单增李斯特菌溶源性噬菌体的诱导及鉴定

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上海交通大学学报（农业科学版） 2014年第5期32卷 39-43页

作者：安慧婷刘瑾王娟姚火春王恒安上海市兽医生物技术重点实验室上海交通大学农业与生物学院上海200240 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院南京210095

利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体... 详细信息

利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体的核酸类型。结果显示,38株单增李斯特菌分离株中的16株在tRNAArg位点携有原噬菌体,其中1株可诱导出噬菌体颗粒,该噬菌体为长尾噬菌体,核酸为dsDNA。噬菌体的成功诱导为噬菌体及其功能基因的开发利用奠定了基础。

关键词：单增李斯特菌噬菌体核酸类型

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共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究

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动物医学进展 2014年第2期35卷 1-5页

作者：苏春霞段相国郑洁林源郭琳陈溥言宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学检验学院临床免疫学检验系宁夏银川750004 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨... 详细信息

构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。

关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒 VP1-2A基因白细胞介素2

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重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

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动物医学进展 2014年第12期35卷 1-4页

作者：苏春霞段相国陈溥言宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系宁夏银川750004 宁夏医科大学检验学院临床免疫学检验系宁夏银川750004 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位... 详细信息

通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位基因的重组腺病毒(rAd5EGS),第2、3和4组分别注射rAd5EGS、灭活疫苗和PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过ELISA检测血清中特异性IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4和IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS既能增强rAd5EGS诱导小鼠特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫rAd5poIL-2后能增强rAd5EGS诱导小鼠IL-4和IFN-γ的分泌,且其诱导IL-4和IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组IL-2能有效增强FMDV多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为FMDV表位疫苗的候选佐剂。

关键词：口蹄疫病毒多表位疫苗佐剂白细胞介素-2

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猪链球菌2型胞外蛋白因子部分基因片段的克隆与表达

猪链球菌2型胞外蛋白因子部分基因片段的克隆与表达

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第十次学术研讨会

作者：徐淑菲何孔旺倪艳秀俞正玉陆承平南京农业大学动物医学院农业部兽医微生物与免疫重点开放实验室江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学动物医学院农业部兽医微生物与免疫重点开放实验室

本实验根据DNAstar软件分析,选取可能含有抗原决定簇的肽段对应的核苷酸序列,进行克隆、表达,研究其功能.

关键词：猪链球菌2型胞外蛋白基因克隆重组表达

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猪链球菌2型两种毒力因子重组表达蛋白的免疫保护性研究

猪链球菌2型两种毒力因子重组表达蛋白的免疫保护性研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第十次学术研讨会

本实验据此将重组表达的且含抗原决定簇的MRP和EF(分别记作rMRP、rEF)分别或联合免疫实验鼠,以证实其免疫保护力,为进一步研制高效且易制备的疫苗奠定基础.

关键词：猪链球菌2型毒力因子重组表达免疫保护

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Sf9昆虫细胞系的培养及致瘤性研究

Sf9昆虫细胞系的培养及致瘤性研究

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中国畜牧兽医学会养兔学分会第二届学术交流大会

作者：胡波范志宇宋艳华魏后军薛家宾姜平王芳江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学动物医学院

本论文目的是为了确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,试验将本实验室保存的Sf9细胞培养成生长良好的单层,作为原始细胞种子1代,连续传代培养至60代,进行细胞传代研究。按照2010版《中国兽药典》对Sf9细胞库细胞进行致瘤性检... 详细信息

本论文目的是为了确定Sf9昆虫细胞系作为疫苗生产细胞株的安全性,试验将本实验室保存的Sf9细胞培养成生长良好的单层,作为原始细胞种子1代,连续传代培养至60代,进行细胞传代研究。按照2010版《中国兽药典》对Sf9细胞库细胞进行致瘤性检测。对Sf9细胞系对裸鼠的致瘤性进行了检测,将3周龄SPF级雌性裸鼠随机分为5组,分别设为Sf9基础细胞库细胞组、Sf9最高限制代次细胞组、阳性对照Hep-2细胞组、阴性对照CEF细胞组和不作任何处理的空白对照组,以各自细胞悬液皮下接种裸鼠。分别于3周和12周观察接种部位是否有肿瘤形成,并进行病理组织学检查。试验结果表明:每代细胞生长为致密单层时间为48～54小时,细胞上清pH值为6.2左右,与原始培养基相比,pH值基本无变化;显微镜检查各代细胞形态基本一致。建立了Sf9细胞的原始细胞库(第5代)、基础细胞库(第10代)、工作细胞库(第15代),并规定生产用细胞自行传代不超过30代,最高限制代次细胞为60代。致瘤性分析结果显示,接种后3周,阳性对照Hep-2细胞组裸鼠注射部位有米粒大小的结节形成,病理组织学检查为鳞状细胞癌。而阴性对照CEF细胞组和Sf9细胞组注射部位未见结节,接种后12周,经病理组织学检查,CEF细胞组和Sf9细胞组均无肿瘤形成。结论:基础代次和最高限制代次Sf9细胞均不具有致瘤性,Sf9细胞可用于疫苗生产。

关键词： Sf9细胞致瘤性裸鼠

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猪传染性胸膜肺炎快速PCR诊断

猪传染性胸膜肺炎快速PCR诊断

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：彭小华何孔旺陆承平南京农业大学动物医学院江苏省农科院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室南京农业大学动物医学院

猪传染性胸膜肺炎(porcine infection pleuropneumonia)是由App引起的猪的一种高度传染性呼吸道疾病,以出血性、坏死性肺炎和慢性纤维素性胸膜肺炎为特征。该病于80年代在我国开始流行,近年来随着规模化养猪场的发展,感发率日益增高,而... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎(porcine infection pleuropneumonia)是由App引起的猪的一种高度传染性呼吸道疾病,以出血性、坏死性肺炎和慢性纤维素性胸膜肺炎为特征。该病于80年代在我国开始流行,近年来随着规模化养猪场的发展,感发率日益增高,而该病的病原血清型多,且相互之间缺乏足够的交叉保护性,加之在不同的地区流行的血清型也不尽相同,用传统的血清学检测很难满足需要,所以研究快速、准确的检测方法对于本病的检测和监控具有重要意义。

关键词：猪传染性胸膜肺炎产肠毒素大肠杆菌 PCR 副猪嗜血杆菌马链球菌兽疫亚种人工发病多杀性巴氏杆菌酶切鉴定

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猪圆环病毒Ⅱ型特异抗体检测间接ELISA法的建立

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甘肃农业大学学报 2006年第6期41卷 10-13页

作者：魏凡华曹瑞兵张玉颖吴润吴延功张晓勇陈溥言甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 南京农业大学农业部疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 农业部动物检疫所山东青岛266000

利用巴斯德毕赤酵母表达的猪圆环病毒2型株Cap蛋白为包被抗原,成功地建立了一种检测血清中PCV-2特异抗体的间接ELISA方法.确定了血清样品阴、阳性判定标准.临床检测结果表明,自建ELISA试剂盒具有较高的敏感性和特异性.

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型重组Cap蛋白间接ELISA

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禽流感病毒非结构蛋白NS1的分子生物学特性与功能

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动物医学进展 2007年第4期28卷 89-92页

作者：贺番曹瑞兵郝永清内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

禽流感严重威胁着世界养禽业及人类健康。随着对流感病毒研究的逐渐深入,人们己经从对流感病毒结构蛋白的研究转移到对非结构蛋白即NS1蛋白的研究上来。研究发现流感病毒的NS1蛋白与流感病毒所诱导的细胞凋亡之间存在一定的联系,其对凋... 详细信息

禽流感严重威胁着世界养禽业及人类健康。随着对流感病毒研究的逐渐深入,人们己经从对流感病毒结构蛋白的研究转移到对非结构蛋白即NS1蛋白的研究上来。研究发现流感病毒的NS1蛋白与流感病毒所诱导的细胞凋亡之间存在一定的联系,其对凋亡的调节作用与流感病毒感染的细胞是否产生干扰素及其所感染的细胞系直接相关。NS1蛋白能够抑制病毒感染细胞干扰素的产生,在流感病毒颉颃干扰素的抗病毒效应中发挥了重要的作用。随着疫苗的广泛使用,无法区分野毒感染和疫苗免疫的禽群,干扰了禽流感的诊断,掩盖了禽流感的流行,增加了禽流感的预防难度。NS1蛋白作为流感病毒的非结构蛋白,具有高度的保守性,在临床应用中作为鉴别诊断免疫禽和自然感染禽的检测抗原具有广阔前景。

关键词：禽流感病毒非结构蛋白NS1 分子生物学特性与功能

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