检索结果-内蒙古大学图书馆

海洋科学 2003年第11期27卷 24-26页

作者：储卫华陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

免疫预防是通过刺激鱼类免疫系统，使其产生特异的免疫反应来增强鱼体的抗病能力，从而降低由疾病引起的损失。10年前，人们预测建立在基因工程技术基础之上的鱼用重组疫苗将会弥补传统的疫苗的不足，能够有效的预防水生物疾病的发生，... 详细信息

免疫预防是通过刺激鱼类免疫系统，使其产生特异的免疫反应来增强鱼体的抗病能力，从而降低由疾病引起的损失。10年前，人们预测建立在基因工程技术基础之上的鱼用重组疫苗将会弥补传统的疫苗的不足，能够有效的预防水生物疾病的发生，基因工程疫苗能够预防从病毒、细菌到寄生虫所引起的疾病，与传统疫苗相比，基因工程疫苗更为安全可靠。鱼类基因工程疫苗的研究已有10多年，有必要对其作一全面的了解。

关键词：鱼基因工程疫苗免疫预防疾病预防

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奶牛α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定

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中国生物工程杂志 2005年第9期25卷 64-68页

作者：李学仁曹瑞兵李斐魏建超陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98... 详细信息

提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%。然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的Pichiapastoris表达载体pPICZαA上,将重组质粒经SacI酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了BoIFN-α在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为23kDa,比其推导结果(20kDa)略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-α具有较高的干扰素活性,约为4.1×105U/ml,经微量蛋白测量仪测得,其表达量约为80μg/ml,比活为5.1×106U/mg。

关键词：奶牛α干扰素毕赤酵母分泌表达抗病毒活性生物活性测定干扰素奶牛 RT-PCR方法 pastoris SDS-PAGE

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马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 633-636页

作者：苏良科陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

目的　构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。方法　根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因... 详细信息

目的　构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。方法　根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因序列设计和合成引物 ,以该菌中国分离株ATCC35 2 4 6的基因组DNA为模板 ,扩增类M蛋白基因 5’端第 5 83～ 10 6 8bp片段 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET - 32a(+)中 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1株 ,用IPTG诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析。结果　扩增出 4 86bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6的类M蛋白基因片段 ,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导 ,得到分子量为 5 0 0 0 0的表达产物 ,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性。结论　成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒 ,并实现在大肠杆菌中表达 ,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：马链球菌兽疫亚种类M基因克隆表达重组表达质粒免疫反应性

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嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的化学修饰

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第3期17卷 372-375页

作者：储卫华陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

蛋白酶是嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)的重要致病因子 .为研究其结构与功能之间的关系 ,用DEPC、EDC、PMSF、N AI等 9种化学修饰剂处理嗜水气单胞菌J 1株胞外蛋白酶ECPase54,然后检测残余酶活力 ,借以研究酶分子中氨基酸侧链基... 详细信息

蛋白酶是嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)的重要致病因子 .为研究其结构与功能之间的关系 ,用DEPC、EDC、PMSF、N AI等 9种化学修饰剂处理嗜水气单胞菌J 1株胞外蛋白酶ECPase54,然后检测残余酶活力 ,借以研究酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系 .结果表明 ,羧基、丝氨酸、ε 氨基、胍基等残基与酶活性无关 ;半胱氨酸残基与酶活性也无直接关系 ;而色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基侧链以及二硫键的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降 ,说明色氨酸、组氨酸。

关键词：嗜水气单胞菌包外蛋白酶化学修饰酶活性

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乙肝表面抗原与促黄体激素释放激素的融合基因5'端改造及其在大肠杆菌中的表达

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南京农业大学学报 1998年第2期21卷 92-99页

作者：凌雯龚晓明杨震杜念兴南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５′端分别作了改造，切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基，将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ１１ＫＳ＋质粒中。琼脂糖... 详细信息

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５′端分别作了改造，切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基，将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ１１ＫＳ＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中，经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ３中表达，表达量占菌体总蛋白的１０％，以兔抗ＬＨＲＨ抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，出现阳性反应带。用抗ＨＢｓＡｇ抗体作ＥＬＩＳＡ检测，结果稀释１×１０－６时仍为阳性反应。

关键词：融合基因聚合酶链反应基因改造原核表达

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塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用

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畜牧兽医学报 2019年第6期50卷 1312-1318页

作者：范慧李亮姜平王先炜李玉峰白娟南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从... 详细信息

塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从中筛选出最佳扩增引物,通过对引物浓度、退火温度、延长时间、循环次数进行优化,成功建立了SVA的RT-PCR检测方法。用该方法检测SVA、脑心肌炎病毒(EMCV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应,具有良好的特异性。敏感性试验结果显示,病毒检测限可达1TCID50,比国外文献报道的检测方法灵敏性更高。用该方法检测山东省的100份猪组织样品,阳性率为2%。本研究所建立的方法特异性强、敏感性高、可靠性好,为SVA的快速检测及流行病学调查提供了有效的技术手段。

关键词：塞内卡病毒A RT-PCR 检测

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用斑马鱼检测猪链球菌2型的致病力

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中国农业科学 2007年第11期40卷 2655-2658页

作者：濮俊毅黄新新陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+... 详细信息

【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12h后呈败血症病变,96h内对斑马鱼的半数致死量(LD50)在5.36×103至5.01×104cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96h内不表现任何病变,亦不出现死亡,对斑马鱼的LD50>106cfu。SS2有毒力株和无毒力株对斑马鱼的LD50差异极显著(P<0.01)。【结论】斑马鱼可作为研究猪链球菌2型菌株感染的动物模型。

关键词：斑马鱼猪链球菌2型半数致死量

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嗜水气单胞菌J-1株培养特性和免疫原性的研究

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南京农业大学学报 1998年第3期21卷 80-83页

作者：范红结陈怀青姚火春陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点开放实验室

将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代［Ｊ－１（５）］在产毒素培养基上连续传代至第３５代［Ｊ－１（３５）］，并分别检测Ｊ－１（６）和Ｊ－１（３５）的生化特性。另取Ｊ－１（６）、... 详细信息

将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代［Ｊ－１（５）］在产毒素培养基上连续传代至第３５代［Ｊ－１（３５）］，并分别检测Ｊ－１（６）和Ｊ－１（３５）的生化特性。另取Ｊ－１（６）、Ｊ－１（１５）、Ｊ－１（２５）和Ｊ－１（３５）分别制备嗜水气单胞菌灭活疫苗，用其分别免疫鲫鱼，之后用Ａｈ强毒攻击；同时用Ｊ－１（６）经腹腔注射或浸泡各免疫组鲫鱼，测其最低免疫剂量。结果显示，从第５代传至３５代，Ａｈ菌株的培养特性和免疫原性没有显著差异；腹腔免疫和浸泡免疫的最低有效剂量分别为１×１０７ｃｆｕ／尾和５×１０７ｃｆｕ／ｍＬ。表明ＡｈＪ－１株可作为理想的疫苗生产株。

关键词：嗜水气单胞菌免疫原性生化特性稳定性

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伪狂犬病毒上海株糖蛋白G (gG)基因的克隆及序列分析

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南京农业大学学报 2003年第1期26卷 107-110页

作者：黄伟坚姜焱陈德胜芦银华张雪莲陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点开放实验室

应用PCR方法从PRVSH (上海株 )病毒培养物扩增了gG基因 ,克隆入 pcDNA3质粒 ,并进行了序列测定。结果表明 ,扩增的 gG基因片段长 1719bp ,包含一个 14 91bp的开放阅读框 (ORF) ,在起始密码子上游有TATAAAA盒 ,在终止密码子下游有AATAAA... 详细信息

应用PCR方法从PRVSH (上海株 )病毒培养物扩增了gG基因 ,克隆入 pcDNA3质粒 ,并进行了序列测定。结果表明 ,扩增的 gG基因片段长 1719bp ,包含一个 14 91bp的开放阅读框 (ORF) ,在起始密码子上游有TATAAAA盒 ,在终止密码子下游有AATAAA的 poly (A)尾 ,编码由 4 96个氨基酸组成的蛋白质。与Rice株相应的gG片段相比 ,核苷酸序列同源性达 97 1%。但推导的氨基酸序列同源性仅有 87 6 % ,主要是在编码区内插入和缺失核苷酸 ,出现了突变和移码 ,导致氨基酸序列同源性降低。gG具有膜蛋白的结构特点。

关键词：伪狂犬病毒上海株糖蛋白G 序列分析 gG基因 PCR扩增核苷酸序列氨基酸序列基因克隆

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伪狂犬病病毒蛋白激酶基因部分序列的克隆和序列测定及转移质粒载体的构建

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中国预防兽医学报 2003年第4期25卷 241-244页

作者：黄伟坚陈德胜姜焱芦银华张雪莲陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断和免疫重点开放实验室

以伪狂犬病病毒SH株细胞培养物为模板 ,用PCR方法扩增蛋白激酶 (PK)基因部分片段 ,克隆到pCDNA3中 ,序列测定显示所扩增的PK基因片段长 90 7bp ,与PRVNIA_3株的核苷酸同源性为 99.6%。把PK基因克隆到pUC1 9上 ,利用PK基因中间的SalI酶... 详细信息

以伪狂犬病病毒SH株细胞培养物为模板 ,用PCR方法扩增蛋白激酶 (PK)基因部分片段 ,克隆到pCDNA3中 ,序列测定显示所扩增的PK基因片段长 90 7bp ,与PRVNIA_3株的核苷酸同源性为 99.6%。把PK基因克隆到pUC1 9上 ,利用PK基因中间的SalI酶切位点 ,插入带有绿色荧光蛋白 (EGFP)的基因表达盒 ,构成了含EGFP的转移载体 ,为今后研究PK基因的功能和构建PK缺失株奠定了基础。

关键词：伪狂犬病病毒蛋白激酶 PCR扩增绿色荧光蛋白转移载体

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