检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第4期28卷 246-251页

作者：郭凡吉王艳李晔彭金彪洪炀邱春辉陈实傅志强石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所、农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200241

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（*** BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表... 详细信息

目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（*** BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a（＋）-SjPGAM-SjEnol,并在*** BL21中表达。用蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol（A组）、pET28a-SjPGAM（B组）、pET28a-SjEnol（C组）（各27μg）与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组（D组）和空白对照组（E组）。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数（EPG）,计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量（Mr）为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组（18.5%）、C组（14.7%）比较,差异有统计学意义（均P〈0.05）;肝减卵率与B组（47.5%）、C组（30.5%）比较,差异也有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平（2.372±0.268）,与D组（0.490±0.138）、E组（0.220±0.088）间的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论成功构建了重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol,多表位重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol在小鼠抗血吸虫感染中比单一重组抗原pET28a-SjPGAM和pET28a-SjEnol诱导了更高的免疫保护作用。

关键词：日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶烯醇酶多表位疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒2型两种重组多表位蛋白免疫效果的评价

引用

中国兽医科学 2012年第10期42卷 1031-1036页

作者：田晓婷李宝玉柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

Cap蛋白和Rep蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)的2个主要蛋白,其中含有很多表位。本研究合成了由3个Cap蛋白表位和1个Rep蛋白表位组成的2个表位串联体,利用NcoⅠ、SpeⅠ和SalⅠ位点,将Hsp65基因与表位串联体依次克隆到pE... 详细信息

Cap蛋白和Rep蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2)的2个主要蛋白,其中含有很多表位。本研究合成了由3个Cap蛋白表位和1个Rep蛋白表位组成的2个表位串联体,利用NcoⅠ、SpeⅠ和SalⅠ位点,将Hsp65基因与表位串联体依次克隆到pET30a,把构建的重组表达质粒PHE转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,诱导重组蛋白的表达。将表达的两种重组蛋白HSP-e-1和HSP-e-2纯化复性后分别免疫小鼠,结果被免疫的小鼠产生特异性抗体,其中HSP-e-2产生的抗体水平较高,而HSP-e-1的淋巴细胞增殖结果要优于HSP-e-2。结果表明,牛型分枝杆菌Hsp65能够作为多表位肽的载体,而融合蛋白HSP-e-1和HSP-e-2可作为PCV2新型疫苗的候选物。

关键词：猪圆环病毒2型热休克蛋白65 抗原表位免疫应答

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

山羊支原体山羊肺炎亚种湖北株的鉴定及其外膜蛋白的免疫原性研究

引用

畜牧兽医学报 2011年第4期42卷 593-599页

作者：赵萍郭晗贺英高鹏程张念章逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并... 详细信息

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并用抗Y98血清和抗PG3血清进行比较,筛选GH2株特异性的外膜蛋白,结果表明GH2株为山羊支原体山羊肺炎亚种,存在于GH2外膜蛋白中的相对分子质量大约为60和49.7ku的蛋白可能是其主要的免疫原性蛋白,也是GH2株区别于丝状支原体山羊亚种标准株PG3和绵羊肺炎支原体标准株的主要特异性抗原。这一结果为山羊支原体山羊肺炎亚种的诊断和疫苗研制提供了良好的理论基础。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种鉴定外膜蛋白免疫原性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达

引用

畜牧兽医学报 2009年第3期40卷 376-382页

作者：李炯刘艳红安芳兰刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病... 详细信息

为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳前体基因绿色荧光蛋白基因 BHK-21细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt-4基因的克隆、表达及功能分析

引用

生物工程学报 2007年第3期23卷 392-397页

作者：陶丽红姚利晓傅志强冯新港刘金明石耀军苑纯秀蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。... 详细信息

由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp,编码436个氨基酸,理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征,与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43%、37%,推测为血吸虫的Wnt4基因,命名为Sjwnt4(GenBank登陆号DQ643829)。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达,其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段,44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX-4T-2-Sjwnt4,应用大肠杆菌系统进行了表达,表达蛋白以包涵体形式存在,Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得,为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。

关键词：日本血吸虫信号转导 Wnt4 发育差异表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡球虫疫苗及其佐剂研究进展

引用

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2009年第1期35卷 58-64页

作者：杜爱芳徐慧张德福禹海杰浙江大学动物科学学院农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310029

鸡球虫病是养禽业中最重要的疾病之一,每年造成数十亿美元的重大经济损失.当前,药物防治是控制鸡球虫病的主要手段,但是随着耐药虫株的普遍产生及绿色食品概念的形成,人们期望用更好的手段取代之.鸡球虫疫苗和相关佐剂已经成为当前研究... 详细信息

鸡球虫病是养禽业中最重要的疾病之一,每年造成数十亿美元的重大经济损失.当前,药物防治是控制鸡球虫病的主要手段,但是随着耐药虫株的普遍产生及绿色食品概念的形成,人们期望用更好的手段取代之.鸡球虫疫苗和相关佐剂已经成为当前研究的热点.本文就鸡球虫病免疫防治的最新进展,从转基因疫苗、核酸与亚单位疫苗、常规疫苗、免疫佐剂4方面研究展开论述.

关键词：鸡球虫病疫苗佐剂

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

秀丽隐杆线虫全身性与组织特异性表达重组载体的构建

引用

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2009年第1期35卷 16-26页

作者：周前进姜小磊张红丽杜爱芳浙江大学动物科学学院农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310029

利用PCR技术从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)基因组DNA中扩增获得Act-1基因的核心启动子序列、T07F10基因的核心启动子序列与3UTR的Poly(A)信号序列以及从表达载体pEGFP-N1上扩增获得SV40早期mRNA的Poly(A)信号序列与EGFP基因.... 详细信息

利用PCR技术从秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)基因组DNA中扩增获得Act-1基因的核心启动子序列、T07F10基因的核心启动子序列与3UTR的Poly(A)信号序列以及从表达载体pEGFP-N1上扩增获得SV40早期mRNA的Poly(A)信号序列与EGFP基因.以克隆载体pBluescript SK+为基本骨架,分别构建由Act-1基因的核心启动子序列、T07F10基因的核心启动子序列调控的、EGFP作为报告基因的秀丽隐杆线虫全身性表达重组载体和组织特异性表达重组载体,为研究不同类型载体在秀丽隐杆线虫体内的表达模式提供基础.

关键词：秀丽隐杆线虫核心启动子 EGFP基因 Poly(A)信号全身性表达组织特异性表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

捻转血矛线虫H11部分功能域基因的原核表达与分析

引用

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2008年第6期34卷 591-596页

作者：张红丽姜小磊周前进杜爱芳浙江大学动物科学学院农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310029

生物信息学软件分析表明，捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）ZJ株的H11抗原基因含有4个糖基化位点与1个锌结合区，为分析这些功能域在H11天然抗原诱导的免疫保护中的作用，对H11部分基因进行克隆和表达．参照本实验室在GenBank上登... 详细信息

生物信息学软件分析表明，捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）ZJ株的H11抗原基因含有4个糖基化位点与1个锌结合区，为分析这些功能域在H11天然抗原诱导的免疫保护中的作用，对H11部分基因进行克隆和表达．参照本实验室在GenBank上登录的捻转血矛线虫ZJ株的H11基因序列设计引物，扩增H11开放阅读框670～1710bp的部分基因序列，命名为HPS（H1jpartial sequence）．基因片段与表达载体pET-28b分别以NdeI、XhoI酶切后构建重组表达载体pET28bHPS，并将其转入大肠杆菌BL21中，提取质粒经PCR和酶切鉴定获得阳性质粒并对其进行测序．结果表明，扩增得到的目的基因片段为1041bp，与已发表的ZJ株和国外株参考序列比较，核苷酸同源性分别为100％和98．8％将重组表达载体用IPTG诱导表达，表达产物利用SDS-PAGE和Western-blotting检测表明，HPS基因在大肠杆菌中成功表达，融合蛋白的分子量约为37．34kDa，诱导6h的蛋白表达量可达到58．9％．

关键词：捻转血矛线虫 H11 表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

诺氟沙星单克隆抗体的制备及其特性鉴定

引用

中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 716-720页

作者：刘庆堂职爱民李青梅柴书军赵东张磊邓瑞广张改平河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室河南郑州450002

为制备诺氟沙星单克隆抗体(MAb),用碳二亚胺法将诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)分别偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),合成免疫原BSA-NFLX和包被原OVA-NFLX,并用紫外(UV)扫描、SDS-PAGE电泳和免疫小鼠进行鉴定;用BSA-NFLX免... 详细信息

为制备诺氟沙星单克隆抗体(MAb),用碳二亚胺法将诺氟沙星(Norfloxacin,NFLX)分别偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA),合成免疫原BSA-NFLX和包被原OVA-NFLX,并用紫外(UV)扫描、SDS-PAGE电泳和免疫小鼠进行鉴定;用BSA-NFLX免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NFLX MAb的细胞株,用体内诱生腹水法制备NFLX MAb;对NFLX MAb的效价、敏感性和特异性等特性进行测定。结果表明:NFLX人工抗原制备成功,融合筛选后获得3C6、3G11两株特异敏感的杂交瘤细胞,两株细胞培养上清液效价为1∶512,腹水效价为1∶6.4×105,3C6株对NFLX的IC50为2.52μg/L,与二氟沙星、沙拉沙星有小于0.03%的交叉反应性,与其他抑制物无交叉反应性。本实验获得了高效价、敏感、特异的抗NFLXMAb,为NFLX残留快速检测方法的建立奠定了基础。

关键词：诺氟沙星单克隆抗体免疫学特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

捻转血矛线虫病的疫苗防治研究

引用

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2009年第2期35卷 187-194页

作者：杜爱芳周前进张红丽姜小磊浙江大学动物科学学院农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310029

疫苗是捻转血矛线虫病防治研究中的热点之一,已有多种疫苗候选抗原得到鉴定,多数抗原在线虫的肠道表达,其天然提取物能够提供有效的免疫保护,减卵率可达70%～95%.由于糖基化作用、空间构象的错误折叠等因素的影响,疫苗候选抗原的重组形... 详细信息

疫苗是捻转血矛线虫病防治研究中的热点之一,已有多种疫苗候选抗原得到鉴定,多数抗原在线虫的肠道表达,其天然提取物能够提供有效的免疫保护,减卵率可达70%～95%.由于糖基化作用、空间构象的错误折叠等因素的影响,疫苗候选抗原的重组形式不能为动物提供有效的免疫保护;免疫策略难以制定、佐剂难以选择也成为疫苗研制中的桎梏.因此,开发与天然提取物具有相似功能的转基因蛋白成为目前疫苗研究中的焦点,秀丽隐杆线虫表达系统和寄生性线虫细胞系的培育是研究中比较有潜力的两个方向;同时,RNAi技术等新方法的运用也加快了新的疫苗候选抗原的鉴定进程.

关键词：捻转血矛线虫肠道抗原重组抗原秀丽隐杆线虫细胞系

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：