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牛磺脱氧胆酸钠和CpGDNA对灭活H9N2禽流感病毒鼻腔免疫鸭的呼吸道抗体分泌细胞的影响

畜牧兽医学报 2012年第5期43卷 761-766页

作者：康海泓申育萌王红丽杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

运用牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA配合鸭源禽流感H9N2灭活病毒滴鼻免疫雏鸭,通过检测鸭呼吸道各组织中IgA和IgG抗体分泌细胞面积的变化对免疫效果进行评价。结果发现:应用牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA配合H9N2灭活病毒鼻腔免疫后3、5和7周,鼻腔... 详细信息

运用牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA配合鸭源禽流感H9N2灭活病毒滴鼻免疫雏鸭,通过检测鸭呼吸道各组织中IgA和IgG抗体分泌细胞面积的变化对免疫效果进行评价。结果发现:应用牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA配合H9N2灭活病毒鼻腔免疫后3、5和7周,鼻腔、气管和气管叉组织中的IgA和IgG分泌细胞面积显著或极显著(P<0.05或P<0.01)高于单独H9N2灭活病毒免疫后的水平;应用CpG DNA配合H9N2灭活病毒鼻腔免疫后鼻腔和气管组织中IgA和IgG分泌细胞的面积有部分提高(P<0.05);而单独运用H9N2灭活病毒鼻腔免疫后IgA和IgG分泌细胞面积同对照组相比没有显著差异。结果表明:在牛磺脱氧胆酸钠和CpG DNA的配合下,禽流感H9N2灭活病毒鼻腔免疫能够提高雏鸭呼吸道组织中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞的面积,有效地增强呼吸道局部的免疫应答水平。

关键词：鸭鼻腔免疫呼吸道禽流感灭活病毒抗体分泌细胞

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山羊咽扁桃体和咽鼓管扁桃体的组织结构观察

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畜牧兽医学报 2012年第1期43卷 133-137页

作者：李正平李鹏成杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京210095

选取健康10月龄奶山羊10头,断头宰杀后取咽扁桃体和咽鼓管扁桃体,应用组织学光镜和电镜制片技术研究咽扁桃体和咽鼓管扁桃体的显微和亚显微组织结构。结果表明:山羊咽扁桃体和咽鼓管扁桃体的黏膜上皮主要由2～3层多边形上皮细胞组成,部... 详细信息

选取健康10月龄奶山羊10头,断头宰杀后取咽扁桃体和咽鼓管扁桃体,应用组织学光镜和电镜制片技术研究咽扁桃体和咽鼓管扁桃体的显微和亚显微组织结构。结果表明:山羊咽扁桃体和咽鼓管扁桃体的黏膜上皮主要由2～3层多边形上皮细胞组成,部分区域只有单层扁平细胞,相邻上皮细胞间空隙很大,上皮细胞表面有丰富的微绒毛。上皮细胞之间和黏膜上皮下方固有层内有大量淋巴细胞浸润。扁桃体的实质部分由数个次级淋巴小结和弥散淋巴组织构成,弥散淋巴组织中有大量分布的淋巴管和毛细血管后微静脉。此外,在紧贴黏膜上皮细胞下方的固有层和淋巴滤泡中可观察到少量的树突状细胞。结果提示山羊的咽扁桃体和咽鼓管扁桃体可作为鼻腔免疫的主要诱导位点和效应部位。

关键词：山羊扁桃体淋巴细胞鼻腔免疫

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A/J小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及相关差异基因表达分析

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南京农业大学学报 2012年第3期35卷 94-100页

作者：谢正露沈学怀殷复建刘琳马海田范红结南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST... 详细信息

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST)。利用GenBank的BLAST软件分析比较核酸和蛋白质同源性,发现共有36个基因与这些EST具有高度的同源性,它们分别参与细胞成分、免疫、信号转导、凋亡、转录等重要功能。这些差异表达基因主要有ATP/GTP结合蛋白1(Agtpbp1)、天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸盒多肽5、核蛋白p68、ATP-依赖RNA解旋酶、真核生物转录因子2亚基(Eif2s2)、Na+/K+-ATP酶转运β3多肽、溶菌酶1、溶菌酶2等基因。结论:这些差异表达基因在猪链球菌2型感染过程中可能发挥重要功能。

关键词： A/J小鼠抑制性消减杂交差异表达基因消减cDNA文库

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不同精粗比日粮对泌乳山羊肝脏蛋白表达谱及乳脂肪合成的影响

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南京农业大学学报 2012年第6期35卷 97-103页

作者：姜雪元张树坤张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合MAIDI-TOF/TOF质谱方法分析不同精粗比日粮条件下肝脏蛋白/酶表达谱的差异,探讨不同精粗比日粮条件下肝脏糖脂代谢与乳脂肪合成的关系及可能机制。8只健康的泌乳中期山羊随机分... 详细信息

采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合MAIDI-TOF/TOF质谱方法分析不同精粗比日粮条件下肝脏蛋白/酶表达谱的差异,探讨不同精粗比日粮条件下肝脏糖脂代谢与乳脂肪合成的关系及可能机制。8只健康的泌乳中期山羊随机分为2组,日粮精粗比分别为4∶6(低精料)和6∶4(高精料),采用2×2拉丁方设计,2次重复。取乳样,测定产奶量和乳中甘油三酯(TG)的含量,并进行活体肝脏穿刺取样,应用双向电泳技术对肝脏样品进行蛋白表达谱分析。试验结果表明:与低精料组相比,高精料组山羊日平均产奶量显著增高(P<0.05),而乳中TG含量显著降低(P<0.05)。经PDQuest 7.1软件分析和MAIDI-TOF/TOF质谱分析发现在两种日粮模式下表达量存在3倍以上差异的蛋白点有34个,其中15个得到鉴定。被鉴定的蛋白主要涉及物质代谢和能量转移。其中,当精料比例提高时,脂肪分解代谢的关键酶脂酰CoA合成酶(ACS)和细胞色素b5的表达上调;糖异生作用的关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)表达下调,参与糖分解代谢的烯醇化酶的表达上调。结论:饲喂高精料日粮,产奶量增加而乳中TG含量降低,其机制可能与肝脏中糖脂分解代谢加强,糖异生作用受阻,竞争消耗了乳腺TG合成前体物有关。

关键词：不同精粗比日粮泌乳山羊肝脏蛋白表达谱乳脂肪

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不同精粗饲料对泌乳中期山羊氨基酸的代谢流向及乳蛋白含量的影响

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草业学报 2012年第3期21卷 258-265页

作者：张树坤姜雪元倪迎冬沈向真庄苏张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

通过检测泌乳中期山羊血浆及乳中游离氨基酸含量的变化,探讨不同精粗比饲料对机体中氨基酸(aminoacids,AA)的代谢流向及乳蛋白的影响。选用泌乳中期山羊7只,随机分为2组,分别饲喂精粗比4∶6(低精料组)和6∶4(高精料组)日粮,颈静脉血管... 详细信息

通过检测泌乳中期山羊血浆及乳中游离氨基酸含量的变化,探讨不同精粗比饲料对机体中氨基酸(aminoacids,AA)的代谢流向及乳蛋白的影响。选用泌乳中期山羊7只,随机分为2组,分别饲喂精粗比4∶6(低精料组)和6∶4(高精料组)日粮,颈静脉血管瘘采血,手工挤奶取奶样。Bradford法测定乳中总蛋白质浓度,RP-HPLC检测山羊血浆和乳中游离氨基酸的含量。结果表明,2组山羊血浆中均分离出14种游离氨基酸,乳中分离出8种游离氨基酸,不同精粗比饲料对血液或乳中游离氨基酸谱无明显影响。不同精粗比日粮情况下,除丙氨酸外,血液中游离氨基酸的含量均高于乳中同种氨基酸的含量;且血液中生酮氨基酸(Leu,Lys)、兼性氨基酸(Phe,Ile)和支链氨基酸(Leu,Ile和Val)含量显著或极显著高于乳中。高精料组除Gly和Ala外,其余氨基酸含量均低于低精料组;乳中总蛋白浓度略高于低精料组,但无统计学差异。表明血液中游离氨基酸为乳蛋白的合成提供了原料和能量保证。饲喂高精料日粮,血液中游离氨基酸含量较低,不利于乳蛋白含量和产量的提高。

关键词：不同日粮泌乳中期山羊血浆乳乳蛋白游离氨基酸

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C57BL/6和A/J两品系小鼠脾脏消减cDNA文库的构建及差异基因分析

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中国农业科学 2012年第7期45卷 1406-1417页

作者：谢正露沈学怀刘琳殷复建马海田范红结南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室南京农业大学动物医学院/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

【目的】检测健康C57BL/6和A/J小鼠常规免疫指标,构建脾脏消减cDNA文库并筛选差异表达基因,以探讨两品系小鼠对猪链球菌抗病性差异的分子机制。【方法】利用ELISA法检测血清常规免疫指标,抑制性消减杂交(suppression subtraction hybrid... 详细信息

【目的】检测健康C57BL/6和A/J小鼠常规免疫指标,构建脾脏消减cDNA文库并筛选差异表达基因,以探讨两品系小鼠对猪链球菌抗病性差异的分子机制。【方法】利用ELISA法检测血清常规免疫指标,抑制性消减杂交(suppression subtraction hybridization,SSH)技术构建8周龄小鼠脾脏差异表达基因的cDNA文库。【结果】试验结果表明,A/J品系小鼠血清中IgA水平明显高于C57BL/6品系小鼠(P<0.05),而血清IgG和IFN水平在两品系小鼠间均无显著差异。对筛选的149个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后获得56条差异表达序列标签(ESTs)。利用Genebank的BLAST分析核酸和蛋白质同源性比较,26个不同的基因或ESTs具有高度的同源性,2条ESTs未找到同源序列。【结论】筛选到很多EST与信号转导、细胞凋亡及免疫等重要功能基因高度同源,为研究猪链球菌的致病机理和防治提供了实验依据。

关键词： C57BL/6小鼠 A/J小鼠抑制性消减杂交差异表达基因消减cDNA文库

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Kisspeptin-10对鹌鹑开产及胆固醇代谢的影响

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南京农业大学学报 2012年第3期35卷 89-93页

作者：吴晶詹年谢怀东倪迎冬赵茹茜南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

为了探索kisspeptin-10(Kp-10)对禽类产蛋启动和脂代谢的影响,将75羽22日龄雌鹌鹑随机分为3组:腹腔注射300μL生理盐水组(对照组,C),注射0.1 nmol Kp-10(低剂量组,L)和1 nmol Kp-10组(高剂量组,H),每日注射1次,连续注射3周。记录鹌鹑开... 详细信息

为了探索kisspeptin-10(Kp-10)对禽类产蛋启动和脂代谢的影响,将75羽22日龄雌鹌鹑随机分为3组:腹腔注射300μL生理盐水组(对照组,C),注射0.1 nmol Kp-10(低剂量组,L)和1 nmol Kp-10组(高剂量组,H),每日注射1次,连续注射3周。记录鹌鹑开产情况并于60日龄时采集血液和肝脏组织,检测血清中雌二醇(E2),血清和肝脏中总胆固醇(Tch)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,以及肝脏胆固醇代谢相关因子mRNA和蛋白水平。结果表明:与对照组相比,L组和H组鹌鹑开产率分别显著和极显著提高(P<0.05和P<0.01);注射Kp-10增加血液E2浓度且于高剂量时达显著水平;H组鹌鹑血清Tch和HDL-C浓度显著降低,肝脏Tch显著升高;L组血液和肝脏HDL-C浓度显著降低;H组鹌鹑肝脏中胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)mRNA转录极显著增加,而3-羟-3-甲基戊二酸单酰CoA还原酶(HMGCR)mRNA、固醇调节元件结合蛋白(SREBP-2)mRNA转录和蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。结论:产蛋前注射Kp-10可显著提高鹌鹑开产率,增加雌激素分泌水平,增强肝脏合成胆固醇的能力。

关键词： kispeptin-10 开产率胆固醇肝脏鹌鹑

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胆酸钠对山羊鼻腔相关扁桃体黏膜上皮吸收灭活病毒的影响

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南京农业大学学报 2012年第4期35卷 94-98页

作者：李正平杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

为研究胆酸钠促进山羊鼻腔相关扁桃体黏膜上皮吸收禽流感灭活病毒的形态学机制,经鼻腔接种胆酸钠和禽流感灭活病毒后,用组织学光镜和电镜制片技术研究山羊咽扁桃体和咽鼓管扁桃体上皮结构的变化以及灭活病毒的吸收情况。结果表明:单独... 详细信息

为研究胆酸钠促进山羊鼻腔相关扁桃体黏膜上皮吸收禽流感灭活病毒的形态学机制,经鼻腔接种胆酸钠和禽流感灭活病毒后,用组织学光镜和电镜制片技术研究山羊咽扁桃体和咽鼓管扁桃体上皮结构的变化以及灭活病毒的吸收情况。结果表明:单独应用灭活病毒后扁桃体黏膜上皮结构完整;而应用胆酸钠或胆酸钠配合灭活病毒后扁桃体中可观察到较多脱离黏膜上皮的细胞,脱落的细胞大部分是上皮细胞和淋巴细胞,上皮细胞间间隙增大,紧密连接被打开。应用胆酸钠配合灭活病毒后可观察到部分细胞内含有病毒的囊泡。鼻腔接种后第3天,应用胆酸钠的扁桃体黏膜上皮结构基本恢复,几乎没有观察到脱离上皮的细胞。结论:胆酸钠通过打开山羊鼻腔相关扁桃体黏膜上皮细胞之间的紧密连接来促进灭活病毒的吸收;虽然胆酸钠可引起部分上皮脱落,但这种副作用是短暂的并是可修复的。

关键词：胆酸钠山羊扁桃体灭活病毒

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β-酪啡肽-7对大鼠血糖及脂质过氧化的影响

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食品科学 2012年第5期33卷 243-247页

作者：韩东宁王艳霞徐晨阳张源淑薛红霞南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

目的:观察β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对糖尿病大鼠的降血糖作用并初步阐明其作用机制。方法:2月龄SD雄性大鼠40只,用链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病,造模成功后将大鼠分为4个组:空白对照组、糖尿病对照组、胰岛素治疗组(优泌... 详细信息

目的:观察β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对糖尿病大鼠的降血糖作用并初步阐明其作用机制。方法:2月龄SD雄性大鼠40只,用链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病,造模成功后将大鼠分为4个组:空白对照组、糖尿病对照组、胰岛素治疗组(优泌林3.7×10-8mol/(只.d))、实验组(β-CM-7 7.5×10-8mol/(只.d))。实验周期30d。测定血清中血糖含量、脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、胰岛素和胰高血糖素的含量以及腿肌糖原、肝脏糖原的含量。结果:β-CM-7组与胰岛素治疗组大鼠血糖明显下降;同时血清中MDA水平降低,SOD活性升高,与糖尿病对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);β-CM-7组胰岛素含量较糖尿病组有所增加,肌糖原含量较空白组显著升高(P<0.05)。结论:β-CM-7具有减轻链脲佐菌素性糖尿病大鼠氧自由基损伤、促进胰岛素分泌、加速肌糖原的合成、降低血糖的作用。

关键词： β-酪啡肽-7 大鼠血糖脂质过氧化

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禽流感灭活抗原与佐剂配合鼻腔免疫对鸽呼吸道抗体分泌细胞的影响

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中国兽医学报 2012年第4期32卷 552-555,569页

作者：许玮杨倩南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

通过禽流感灭活抗原配合黏膜免疫佐剂鼻腔免疫乳鸽,研究鸽呼吸道各段抗体分泌细胞的分布和数量。结果显示,首免后第3、5周,应用CpG免疫后肺IgG分泌细胞面积显著高于对照组(P<0.05),首免后第5,7周,应用CpG免疫后肺IgA分泌细胞面积显... 详细信息

通过禽流感灭活抗原配合黏膜免疫佐剂鼻腔免疫乳鸽,研究鸽呼吸道各段抗体分泌细胞的分布和数量。结果显示,首免后第3、5周,应用CpG免疫后肺IgG分泌细胞面积显著高于对照组(P<0.05),首免后第5,7周,应用CpG免疫后肺IgA分泌细胞面积显著高于对照组(P<0.05);首免后第3、5、7周,应用灭活禽流感抗原免疫后,鸽呼吸道各部位IgG分泌细胞和IgA分泌细胞面积与对照组无显著差异;应用禽流感抗原配合CpG和胆酸钠免疫后鸽呼吸道各部位单位面积中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞面积均显著或极显著高于对照组(P<0.01,P<0.05)。结果表明,灭活禽流感抗原配合黏膜免疫佐剂通过鼻腔免疫能够提高呼吸道中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞的面积,增强局部呼吸道体液免疫应答水平。

关键词：鸽呼吸道鼻腔免疫 IgA分泌细胞 IgG分泌细胞

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