检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第6期35卷 19-23页

作者：李瑞梅陈秀荔王海滨靳亚平西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 军事医学科学院组织工程中心北京100850

为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分... 详细信息

为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6-7 d融合成片,呈α-平滑肌肌动蛋白阳性,细胞大都长梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达98%以上。说明该方法能够成功分离并得到高产量、高纯度、高增殖能力的子宫内膜细胞及平滑肌细胞。

关键词：动物细胞培养子宫内膜上皮细胞子宫内膜基质细胞子宫平滑肌细胞家兔

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LH抗体间接ELISA检测方法的建立

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西北农业学报 2007年第3期16卷 26-28页

作者：崔贞亮李红飞吴庆侠靳亚平刘璇西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 河南省商丘市梁园区动物检疫站河南商丘476000

以高纯度的促黄体素(LH)作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1 500。该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素(FSH)阳性血... 详细信息

以高纯度的促黄体素(LH)作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1 500。该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素(FSH)阳性血清呈现阴性反应。结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测。

关键词：间接ELISA LH抗体小鼠

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山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养和鉴定

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西北农业学报 2006年第6期15卷 12-14页

作者：丰艳妮吴庆侠吴瑞楚元奎靳亚平农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定，通过2g／L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h，200目的滤网过滤后进行低速离心，收集沉淀物，沉降洗涤3～5次，将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴... 详细信息

为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定，通过2g／L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h，200目的滤网过滤后进行低速离心，收集沉淀物，沉降洗涤3～5次，将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴壁生长，腺团开始向外部扩散，生长2～3d，细胞扩散并出现明显的铺路石状，4～5d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长。经免疫组织化学方法进行细胞染色，细胞表达角蛋白的阳性率达90％以上。

关键词：子宫内膜腺上皮细胞免疫组织化学鉴定山羊

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间接ELISA法检测促卵泡素抗体方法的建立

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安徽农业科学 2006年第17期34卷 4223-4224,4226页

作者：李红飞崔贞亮靳亚平西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测... 详细信息

建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测血清最佳稀释度为1∶500,封闭液为1.0%的脱脂奶粉,同时设置抗原阻断试验对结果进行验证。

关键词：促卵泡素完全抗原酶联免疫吸附试验

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小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离纯化及其定向诱导分化为神经元样细胞

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中国兽医学报 2006年第6期26卷 696-700页

作者：胡亮董雅娟柏学进马保华杨恕玲淡新刚董方圆王雪红李建栋程明西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 莱阳农学院胚胎工程中心山东莱阳265200

比较了全骨髓法和密度梯度离心法分离、纯化小鼠骨髓间充质干细胞,并研究了不同培养基和血清对干细胞生长的影响以及小鼠骨髓间充质干细胞的神经分化潜能。结果表明,密度梯度离心法和贴壁法结合使用可以分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞;... 详细信息

比较了全骨髓法和密度梯度离心法分离、纯化小鼠骨髓间充质干细胞,并研究了不同培养基和血清对干细胞生长的影响以及小鼠骨髓间充质干细胞的神经分化潜能。结果表明,密度梯度离心法和贴壁法结合使用可以分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞;所获得的小鼠骨髓间充质干细胞具有诱导分化为神经元样细胞和脂肪样细胞的潜能,为小鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化的研究提供了技术支撑。

关键词：小鼠骨髓间充质干细胞细胞培养神经分化

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牛骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学特性的研究

牛骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学特性的研究

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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会

作者：封纪武董雅娟赵兴曹雷于进亮岳福杰柏学进赵晶刘顺德莱阳农学院动物胚胎工程中心山东青岛266109 宁夏大学农学院宁夏银川750021 莱阳农学院动物胚胎工程中心山东青岛266109 莱阳农学院动物胚胎工程中心山东青岛266109 华南农业大学兽医学院广东广州510642 西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨凌712100 宁夏大学农学院宁夏银川750021

[目的]建立牛骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)分离培养体系,研究MSCs的生物学特性,并对其进行鉴定.[方法]通过贴壁筛选法分离纯化牛MSCs,倒置相差显微镜下观察其生长特性.将纯化稳定后的第3代(P3)和第12代(P12)M... 详细信息

[目的]建立牛骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)分离培养体系,研究MSCs的生物学特性,并对其进行鉴定.[方法]通过贴壁筛选法分离纯化牛MSCs,倒置相差显微镜下观察其生长特性.将纯化稳定后的第3代(P3)和第12代(P12)MSCs分别用β-巯基乙醇进行诱导,观察其形态的变化.[结果]原代和传代培养的细胞呈成纤维细胞形态,第2代(P2)至第9代(P9)的MSCs生长旺盛,增殖较快,3-4d即可达到完全融合.12代后的细胞生长速度逐渐减慢.MSCs经β-巯基乙醇诱导后可见神经元样细胞出现.[结论]建立了牛MSCs体外分离、培养体系,获得可稳定传代的牛MSCs.试验表明,体外培养的牛MSCs生长稳定,传代后的细胞适应性强,增殖较快,无分化倾向,为进一步研究牛MSCs的诱导分化和应用打下基础.

关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养神经细胞生物学特性牛

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Aroclor 1254对小鼠精子受精能力与受精卵发育的毒性研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第5期33卷 1-4页

作者：马保华王建华史志诚严兴荣冯若鹏冉林武王志东西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

采用腹腔注射染毒法研究了Aroclor1254对公鼠精子受精能力及受精卵发育的毒性。将体重(18±3)g的性成熟期公鼠随机分为1/10LD50,1/50LD50,1/250LD50和1/1250LD504个染毒组及稀释剂对照组,染毒组公鼠于试验的第0,3,6天,按照0.01mL/g... 详细信息

采用腹腔注射染毒法研究了Aroclor1254对公鼠精子受精能力及受精卵发育的毒性。将体重(18±3)g的性成熟期公鼠随机分为1/10LD50,1/50LD50,1/250LD50和1/1250LD504个染毒组及稀释剂对照组,染毒组公鼠于试验的第0,3,6天,按照0.01mL/g的注射量,分别注射用灭菌花生油稀释的20,4,0.8,0.16mg/mLAroclor1254溶液,稀释剂对照组注射灭菌花生油。试验开始40d后,用各组公鼠对未染毒的超排母鼠配种。结果表明,用高剂量Aroclor1254染毒公鼠对超排的正常母鼠进行配种时,会显著降低受精卵比例(P<0.01)和受精卵的卵裂率(P<0.05),并出现受精卵首次卵裂延迟。在受精卵的进一步发育中,随着公鼠染毒剂量的增加,发育到桑椹胚和囊胚的比例显著降低,发育延迟胚及发育中退化变性胚比率显著升高。据此认为,Aroclor1254能明显影响小鼠精子受精能力,并影响受精卵的进一步发育。

关键词：受精力胚胎发育毒性多氯联苯小鼠

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醋酸铅对小鼠精子发生毒性研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第6期33卷 49-52页

作者：马保华宋小飞艾小云王有柱郝捷西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

　采用腹腔注射染毒法,将体重(16±1)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10LD50)、中剂量(1/50LD50)、低剂量(1/250LD50)染毒组和溶剂对照组,每组10只,高、中、低剂量染毒组于试验的第0,3,6,9和12天以0.01mL/g注射量,分别腹腔注射1.2... 详细信息

　采用腹腔注射染毒法,将体重(16±1)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10LD50)、中剂量(1/50LD50)、低剂量(1/250LD50)染毒组和溶剂对照组,每组10只,高、中、低剂量染毒组于试验的第0,3,6,9和12天以0.01mL/g注射量,分别腹腔注射1.20,0.24,0.048g/L的醋酸铅[Pb(CH3COO)2·3H2O]溶液,对照组注射灭菌蒸馏水。30d后,处死小鼠,采集输精管精子,研究醋酸铅对小鼠精子的发生毒性。结果表明:(1)各试验组公鼠的睾丸、附睾湿重及其与体重的比值均无明显差异(P>0.05);(2)采用输精管精子进行精子发生毒性检验是可行的;(3)各试验组公鼠精子相对密度及精子活力无统计学差异(P>0.05);(4)各染毒组公鼠畸形精子比率显著高于对照组(P<0.01);(5)高剂量和中剂量试验公鼠输精管顶体异常精子比率与对照组之间差异显著(P<0.05)。说明本试验所用醋酸铅剂量未明显影响性成熟期公鼠的性腺发育及精子密度和活力,各剂量醋酸铅染毒显著影响了精子的形态发生和顶体形成。

关键词：醋酸铅精子发生毒性小鼠

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PHA-P及孕酮对孕早期山羊子宫内膜γδ~+T细胞体外分泌TGF-βs的影响

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农业生物技术学报 2005年第4期13卷 503-506页

作者：沈文正靳亚平王爱华李引乾薛海斌西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌职业技术学院杨凌712100 杨凌职业技术学院杨凌712100 杨凌712100 杨凌712100 杨凌712100 杨凌712100

测定山羊孕早期子宫内膜γδ+T细胞体外分泌转化生长因子(TGF-β1及TGF-β2)水平,研究PHA-P及孕酮对该细胞体外分泌此二种细胞因子的影响。手术分离妊娠32d莎能山羊子宫内膜,经胶原酶消化及淋巴细胞分离液离心制得子宫内膜淋巴细胞,采... 详细信息

测定山羊孕早期子宫内膜γδ+T细胞体外分泌转化生长因子(TGF-β1及TGF-β2)水平,研究PHA-P及孕酮对该细胞体外分泌此二种细胞因子的影响。手术分离妊娠32d莎能山羊子宫内膜,经胶原酶消化及淋巴细胞分离液离心制得子宫内膜淋巴细胞,采用免疫磁珠分离法(MACS)从中获得γδ+T细胞(1×106/mL),以RPMI1640+FCS完全培养液培养于96孔细胞培养板上,并向部分孔加入20mg/mLPHA-P和10ng/mL孕酮溶液作实验处理。体外分泌测定显示,(1)PHA-P极显著地(P<0.01)促进妊娠32d山羊子宫内膜γδ+T细胞分泌TGF-β1(42.550±4.789ng/mL)及TGF-β2(4.2998±0.012ng/mL)。(2)生理水平孕酮能极显著抑制该γδ+T细胞分泌TGF-β1(3.533±1.914ng/mL,P<0.01),且能使TGF-β1的分泌保持在一定水平,但对TGF-β2分泌的抑制作用不显著(0.7931±0.009ng/mL,P>0.05),证明生理水平孕酮参与体内TGF-β1水平的下调和分泌维持,但可能不参与TGF-β2分泌活动的下调。(3)PHA-P处理、孕酮处理及γδ+T细胞对照的TGF-β1分泌水平均明显高于TGF-β2,证明γδ+T细胞是妊娠早期山羊母-胎界面TGF-β1的主要来源。

关键词：妊娠早期山羊子宫内膜γδ+T细胞 TGF-β 孕酮 PHA-P

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骨髓间充质干细胞的研究进展

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莱阳农学院学报 2005年第1期22卷 56-62页

作者：胡亮董雅娟柏学进马保华西北农林科技大学家畜生殖内分泌与胚胎工程农业部重点开放实验室陕西杨陵712100 莱阳农学院胚胎工程中心

在骨髓基质中存在一种非造血系的干细胞称为间充质干细胞。骨髓间充质干细胞不但能够在体外扩增,同时在体内和体外有可以诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌管细胞、骨骼肌、星型胶质细胞、神经元样细胞以及造血支持... 详细信息

在骨髓基质中存在一种非造血系的干细胞称为间充质干细胞。骨髓间充质干细胞不但能够在体外扩增,同时在体内和体外有可以诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌管细胞、骨骼肌、星型胶质细胞、神经元样细胞以及造血支持基质等,但是在MSCs能够安全和有效的作为细胞和基因治疗应用于临床之前,仍需解决大量的基础性问题。本文介绍了MSCs的生物学特性,MSCs的分离、扩增和鉴定,MSCs的表面标记物的表达,讨论了MSCs分化为神经元样细胞的机制,并简要论述了MSCs在生理和医学临床应用上的重要意义。

关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化细胞培养鉴定神经元样细胞

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