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中国食品科学技术学会第十七届年会

作者：任鄄宝邹根张赫男吴迪张忠李文杨焱上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

猴头菌（Hericium erinaceu）是我国著名的珍贵食药兼用菌,其主要的生物活性成分是猴头菌多糖,具有免疫调节、抗癌、降血脂和保护胃黏膜等多种功效。基于猴头菌三代全基因组测序和多糖的差异多组学分析结果,对一株高产多糖的猴头菇突变... 详细信息

猴头菌（Hericium erinaceu）是我国著名的珍贵食药兼用菌,其主要的生物活性成分是猴头菌多糖,具有免疫调节、抗癌、降血脂和保护胃黏膜等多种功效。基于猴头菌三代全基因组测序和多糖的差异多组学分析结果,对一株高产多糖的猴头菇突变株的关键基因进行挖掘,发现编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因A6180在突变株中显著上调,可能和猴头菇多糖高产有关。为了验证该基因在多糖合成过程中的关键功能,在对其编码序列进行密码子优化后,分别在大肠杆菌和酿酒酵母中进行异源过表达来验证其酶学性质及生物学功能,为在猴头菌中进行过表达获得高产多糖菌株奠定基础。在大肠杆菌中异源表达的重组蛋白经过纯化后进行对其酶学特性进行测定,可以高效地将UDP-葡萄糖转化成UDP-半乳糖,相关酶活达（1.107±0.07） U/mg,证实了此目的基因发挥着UDP-葡萄糖-4-差向异构酶活性。同时在酿酒酵母中的异源表达的结果也初步验证了该基因对猴头菇活性多糖结构和功能有着关键作用。本研究利用分子生物学技术进行高产多糖优势菌株关键基因进行功能表征,为猴头菇生物活性多糖合成途径的解析奠定基础。

关键词：猴头菌活性多糖异源表达 UDP-葡萄糖-4-差向异构酶

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基于通气量调控的灵芝菌丝体胞内多糖发酵工艺优化

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食用菌学报 2019年第1期26卷 35-40页

作者：吴迪袁峰王国瑞周帅杨焱冯娜唐庆九刘艳芳朱增亮徐国华唐传红刘方张劲松冯杰上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 江苏神华药业有限公司江苏省药用真菌生物工程技术研究中心江苏淮安211600

采用5L搅拌式发酵罐进行灵芝(Ganoderma lucidum)液态深层发酵实验,考察通气量对灵芝菌丝体生长和胞内多糖合成的影响。结果表明:在保持其它因素不变的条件下,通气量9 L/min时菌丝体干重最高,达到15.42 g/L;通气量6 L/min时胞内多糖得... 详细信息

采用5L搅拌式发酵罐进行灵芝(Ganoderma lucidum)液态深层发酵实验,考察通气量对灵芝菌丝体生长和胞内多糖合成的影响。结果表明:在保持其它因素不变的条件下,通气量9 L/min时菌丝体干重最高,达到15.42 g/L;通气量6 L/min时胞内多糖得率最高,为2.10 g/L。根据发酵过程中菌丝体生长的比生长速率、胞内多糖比合成速率,提出四阶段通气量控制策略:0～31.2 h通气量为6 L/min;31.2～43 h通气量为9 L/min;43～55 h通气量为6 L/min;55～96 h通气量为5 L/min。利用上述策略发酵得到的菌丝体干重为17.35 g/L,比9 L/min条件下提高了12.59%,胞内多糖得率为2.83 g/L,比6 L/min条件下提高了35.75%。研究结果可为规模化液态深层发酵生产灵芝胞内多糖提供参考。

关键词：灵芝通气量发酵胞内多糖比生长速率比合成速率

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灵芝酸A对前列腺癌LNCaP细胞的生长抑制作用及机制

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菌物学报 2019年第5期38卷 717-727页

作者：徐宾贾薇王忠张赫男吴迪唐传红杨焱刘振东张劲松汪雯翰上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海交通大学附属第六人民医院南院泌尿外科上海201400 西藏农牧学院西藏林芝860000

本研究利用alamarBlue~?测定细胞活力法、流式细胞术(annxin V-FITC)/PI双染色测定细胞凋亡法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定5α-还原酶活性法评价灵芝酸A对前列腺癌的体外抗肿瘤活性,并进一步利用... 详细信息

本研究利用alamarBlue~?测定细胞活力法、流式细胞术(annxin V-FITC)/PI双染色测定细胞凋亡法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定5α-还原酶活性法评价灵芝酸A对前列腺癌的体外抗肿瘤活性,并进一步利用流式细胞术2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA)染色测定ROS释放量法、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blot,WB)检测雄激素受体(androgen receptor,AR)基因和凋亡相关基因表达的方法,探讨其作用机理。研究结果表明灵芝酸A可通过抑制5α-还原酶活性,抑制睾酮诱导的前列腺癌LNCaP细胞增殖,诱发细胞早期凋亡来发挥抗肿瘤活性;进一步研究表明,灵芝酸A降低前列腺癌细胞中AR的表达,并通过引发细胞线粒体功能障碍释放过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)诱发细胞凋亡,而qPCR和WB的数据进一步表明细胞线粒体功能障碍与抑癌基因caspase-3、bad和aifm1的高表达密切相关。

关键词：灵芝酸A LNCaP细胞细胞凋亡活性氧雄激素受体作用机理

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香菇失香突变菌株的营养成分和呈味物质分析

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上海农业学报 2019年第6期35卷 17-23页

作者：余昌霞赵妍陈明杰杨焕玲奚莉萍汪虹查磊上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

在栽培条件一致的情况下,测定了’L808’和ww808(子实体无香菇香味)2个香菇菌株子实体的粗蛋白、水解氨基酸、游离氨基酸、可溶性糖(醇)、有机酸和5’-核苷酸的组成及含量,并分析其营养成分和呈味物质的差异。结果表明:’L808’和ww808... 详细信息

在栽培条件一致的情况下,测定了’L808’和ww808(子实体无香菇香味)2个香菇菌株子实体的粗蛋白、水解氨基酸、游离氨基酸、可溶性糖(醇)、有机酸和5’-核苷酸的组成及含量,并分析其营养成分和呈味物质的差异。结果表明:’L808’和ww808菌株的氨基酸比值系数分分别为88.98和87.69,’L808’菌株的蛋白质营养价值高于ww808菌株;’L808’菌株可溶性糖(醇)及鲜味氨基酸含量高于ww808菌株,有机酸、甜味氨基酸以及鲜味核苷酸含量较ww808菌株低。综合各种呈鲜成分,’L808’和ww808菌株的等鲜浓度值(EUC)分别为38.70 g MSG/(100 g)和53.38 g MSG/(100 g),ww808菌株鲜味呈鲜效果较’L808’菌株更突出。

关键词：香菇子实体呈味物质等鲜浓度值(EUC)

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香菇β-葡聚糖的提取及其对淀粉消化性的影响

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食品科学 2018年第10期39卷 71-77页

作者：陈忠秋冯涛庄海宁杨焱张劲松上海应用技术大学香料香精技术与工程学院上海201418 上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

从香菇子实体中提取的香菇β-葡聚糖(Lentinus edodesβ-glucan,LEBG),重均分子质量为1.8 6 8×1 06 D a;其单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖物质的量之比为0.72∶1.61∶2.61∶92.75∶2.34;通过红外图谱判断其为β... 详细信息

从香菇子实体中提取的香菇β-葡聚糖(Lentinus edodesβ-glucan,LEBG),重均分子质量为1.8 6 8×1 06 D a;其单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖物质的量之比为0.72∶1.61∶2.61∶92.75∶2.34;通过红外图谱判断其为β-吡喃多糖。分别向小麦淀粉、玉米淀粉添加LEBG,两种淀粉的损耗模量和储能模量均增加,动态流变学揭示了LEBG与淀粉之间有相互作用的存在。体外消化结果显示,与未添加LEBG相比,添加LEBG的淀粉酶解速率显著降低。这可能是因为LEBG和淀粉之间相互缠绕,凝胶网络结构增强;同时,添加了LEBG的两种淀粉均为较低水平的快速消化淀粉和血糖指数预测值以及较高含量的缓慢消化淀粉和抗性淀粉,说明LEBG对淀粉体外消化具有一定的抑制作用。在可视化实验结果进一步说明LEBG与淀粉相互作用的具体方式为包裹作用。将含有LEBG的香菇超微粉加入淀粉,结果表明超微粉也对淀粉体外消化具有一定抑制效果。该研究表明LEBG可用于研发低血糖指数的淀粉类食品。

关键词：香菇β-葡聚糖流变淀粉体外消化血糖指数预测

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液态深层发酵法高产灵芝三萜的研究

液态深层发酵法高产灵芝三萜的研究

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：冯杰冯娜刘艳芳唐庆九周帅颜梦秋唐传红张劲松农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

本研究利用液态深层发酵法以提高灵芝三萜的含量为目的,对发酵过程进行了系统的优化。（1）对灵芝菌丝体液态深层发酵中油酸的添加策略进行研究。结果表明添加油酸对灵芝三萜的合成有重要的促进作用。在发酵的0 h添加30 m L/L的油酸效... 详细信息

本研究利用液态深层发酵法以提高灵芝三萜的含量为目的,对发酵过程进行了系统的优化。（1）对灵芝菌丝体液态深层发酵中油酸的添加策略进行研究。结果表明添加油酸对灵芝三萜的合成有重要的促进作用。在发酵的0 h添加30 m L/L的油酸效果最佳。在6 L发酵罐上验证灵芝三萜的最大值为1.076 g/L,与模型的预测值1.080 g/L相差不多。（2）通过不同搅拌转速条件下灵芝三萜液态深层发酵的跟踪分析,对发酵过程的数据进行进一步分析,通过分析比生长速率,比消耗速率和比合成速率三个动力学参数,提出两阶段搅拌转速控制策略,即在发酵40 h前,控制搅拌转速为150 rpm,40 h后调整转速至100 rpm。运用此发酵策略,使得灵芝三萜的最大浓度为0.720 mg/100 mg,灵芝三萜对葡萄糖得率为0.051 g/g,灵芝三萜生产强度为0.0055 g/（L·h）,相比于最好的单因素搅拌转速分别提高了5.56%,0.66%和20.59%。（3）在对不同温度下灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的过程进行详尽分析的基础上,建立液态深层发酵动力学模型,并分析了温度与动力学参数之间的函数关系,提出灵芝菌丝体高产量、高得率和高生产强度液态发酵合成灵芝三萜的温度控制轨迹:在发酵初始阶段（0-61 h）控制发酵温度为32℃以维持较高的菌丝体生长速率和灵芝三萜合成速率;发酵中期（62-127 h）,逐步将发酵温度降到31-30℃以获取代谢流强化和菌丝体衰亡之间的最佳平衡;然后维持29℃至发酵结束以提高菌丝体后续合成灵芝三萜的能力。采用这一最佳温度控制轨迹,灵芝三萜产量（0.269 g/L）、对葡萄糖产率（0.0101 g/g）和生产强度[0.00207 g/（L h）]比29℃恒温发酵分别提高了27.32%、13.94%和37.11%。（4）在50 L发酵罐中采用四种补料培养方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜进行了比较。实验发现通过补料可以明显地促进灵芝菌丝体的生长和灵芝三萜的合成,同时还发现不同的补料方式对菌丝体生长和灵芝三萜合成有不同的影响:采用指数补料方式可获得较高的菌丝体浓度,并提高了灵芝三萜的含量,与传统的发酵方式相比,采用此补料策略取得了较好的效果。发酵终点灵芝菌丝体干重达到17.68 g/L,灵芝三萜含量达到4.58 g/100 g干菌丝体,分别比分批发酵提高了65.70%和100.88%。

关键词：灵芝液态深层发酵灵芝三萜控制策略搅拌转速温度补料培养

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新型抗癌蛋白FIP-bbo的鉴定及分子动力学模拟研究

新型抗癌蛋白FIP-bbo的鉴定及分子动力学模拟研究

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：王莹鲍大鹏国家食用菌工程技术研究中心农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

真菌免疫调节蛋白（FIP）是一种具有广谱免疫调节和抗癌活性的小分子蛋白质,在临床药物和保健食品添加剂方面具有发展潜力。本研究在Botryobasidium botryosum基因组数据中挖掘得到新型FIP（FIP-bbo）的基因序列,生信分析发现FIP-bbo具... 详细信息

真菌免疫调节蛋白（FIP）是一种具有广谱免疫调节和抗癌活性的小分子蛋白质,在临床药物和保健食品添加剂方面具有发展潜力。本研究在Botryobasidium botryosum基因组数据中挖掘得到新型FIP（FIP-bbo）的基因序列,生信分析发现FIP-bbo具有FIP的典型特征,但遗传上远离其它FIP。利用优化的大肠杆菌表达系统获得重组FIP-bbo,并通过Ni-NTA柱分离纯化纯蛋白。抗肿瘤实验表明,FIP-bbo在抑制肿瘤细胞（Hela,Spac-1和A549）增殖和迁移以及促其凋亡等方面与LZ-8相似,所需浓度较低,但不如LZ-8强效。分子动力学模拟实验揭示了FIP-bbo,FIP-fve和LZ-8对癌细胞产生不同细胞毒性的分子机制,并找到可以改善FIP-bbo和FIP-fve热稳定性的关键氨基酸残基。这些结果不仅为开发新的抗癌佐剂提供候选蛋白,也提供了一种设计高效抗癌FIP的方法。

关键词：真菌免疫调节蛋白抗癌分子动力学模拟

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灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物抑制脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7产生NO的活性

灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物抑制脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7产生N...

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：张忠刘艳芳唐庆九周帅杨焱颜梦秋唐传红吴迪冯娜张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用氯磺酸法对灵芝(Ganoderma lucidum)β-葡聚糖进行硫酸化修饰,在不同反应温度下(40、50、60、70、80、90℃)得到灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物(SGLP1～SGLP6),随着反应温度的上升,硫酸化衍生物取代度逐渐增加,反应温度为60℃时取代度... 详细信息

采用氯磺酸法对灵芝(Ganoderma lucidum)β-葡聚糖进行硫酸化修饰,在不同反应温度下(40、50、60、70、80、90℃)得到灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物(SGLP1～SGLP6),随着反应温度的上升,硫酸化衍生物取代度逐渐增加,反应温度为60℃时取代度最大为1.72,之后随着反应温度上升,取代度逐渐下降;随着反应温度的增加衍生物的重均分子量逐渐下降。灵芝β-葡聚糖衍生物的溶解度为0.901～1.102g/100 mL,与硫酸化前相比溶解度提高约50倍。灵芝β-葡聚糖硫酸化衍生物具有抗炎作用,对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞释放NO有一定程度的抑制作用,并呈浓度依赖性,且随着取代度增加,抑制率增高;对LPS刺激RAW264.7细胞的吞噬活性也具有显著的抑制作用,且随着取代度增加对细胞吞噬活性的抑制作用增加;取代度相近时,重均分子量较大的硫酸化衍生物对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞释放NO的抑制率较高以及对细胞吞噬活性的抑制作用也较强,说明硫酸化多糖的体外抗炎活性与其硫酸化衍生物的取代度和重均分子量相关。

关键词：灵芝β-葡聚糖硫酸化巨噬细胞抗炎

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草菇子实体发育过程的荧光染色观察

草菇子实体发育过程的荧光染色观察

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：万佳宁杨瑞恒陈洪雨周陈力郭婷陈明杰汪虹鲍大鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s ... 详细信息

草菇(Volvariella volvacea)又名中国蘑菇(Chinese mushroom)。进入1970年代,草菇栽培产业得到较快发展,但草菇育种研究进展一直比较缓慢,其中一个主要原因是对草菇有性生殖方式这一重要遗传背景还存在较大争议。本研究运用Steedman’s wax包埋切片法制备了草菇子实体不同发育时期(小纽扣期、大纽扣期、蛋形期、伸长期、破膜期和开伞期)的菌褶切片并运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察了担子细胞核相变化情况。结果表明该方法可清晰观察到草菇担子细胞中核相以及在减数分裂中的变化、担子上孢子幼体、孢子梗、囊状体和孢子内细胞核等结构。草菇子实体小纽扣期细胞核成对进入担子细胞中;在大纽扣和蛋形期担子细胞基部发生核融合;伸长期、破膜期和开伞期的担子细胞内可观察到符合减数分裂特征的细胞核分裂前期Ⅰ、末期Ⅰ、前期Ⅱ和间期Ⅱ。通过对草菇担子细胞内细胞核减数分裂过程的观察,丰富了对草菇生活史的微观细胞学认识,为草菇有性生活史的深入研究提供了更多的科学依据。

关键词：子实体发育减数分裂

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利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

利用不同培养料栽培的草菇子实体挥发性风味成分分析

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多彩菌物美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会

作者：余昌霞赵妍陈明杰汪虹李正鹏上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

采用顶空固相微萃取（head space solid phase micro-extraction,HS-SPME）和气相色谱质谱（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）技术分析5种不同培养料（稻草、废棉、棉籽壳、金针菇菌渣、刺芹侧耳菌渣）栽培的草菇（Volvariella volvacea）子实体挥发性风味成分,利用相对气味活度值（relative odor activity value,ROAV）评价挥发性风味成分对草菇子实体总体风味的贡献,并采用主成分分析法明确了对不同培养料栽培的草菇香气影响较大的挥发性香味成分,通过综合评价指数（general evaluation indexes,GEI）对不同培养料栽培的草菇子实体香气进行评价,采用感官评定法验证分析草菇挥发性风味成分评价模型的准确性。结果表明:不同培养料栽培的草菇子实体中共检测到38种挥发性化合物,其中共有的化合物为26种,主要是芳香族和烯烃类、醛类化合物,其次是醇类化合物、酮类化合物。通过对主要挥发性风味物质的主成分分析发现,异戊醛、己醛、1-辛烯-3-醇、甲硫醇、2-戊基呋喃、二甲基硫醚对草菇子实体香气影响较大。GEI评价结果表明不同培养料栽培的草菇子实体香气差别显著,以刺芹侧耳菌渣栽培的草菇香气品质最优,金针菇菌渣栽培的草菇香气最差,感官评定结果与构建的挥发性风味成分评价模型结果一致。

关键词：草菇培养料挥发性风味成分相对气味活度值主成分分析

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