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翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因定位、克隆及表达分析

海洋与湖沼 2019年第5期50卷 1138-1145页

作者：王志刚刘士力李贤露吕卓云毛丽盈唐超然郑荣泉浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004 浙江省野生动物生物技术与保护利用重点实验室金华321004 浙江师范大学行知学院金华321004 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室湖州313001

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)是大型淡水鱼类鳊鲌亚科(Abramidinae)中最大的一种鱼,具有较高的经济价值。但其饲料转化率及抗病性研究相对较少,相关基因信息缺乏。本研究以翘嘴红鲌为对象,利用RACE技术克隆翘嘴红鲌果糖-1,6-... 详细信息

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)是大型淡水鱼类鳊鲌亚科(Abramidinae)中最大的一种鱼,具有较高的经济价值。但其饲料转化率及抗病性研究相对较少,相关基因信息缺乏。本研究以翘嘴红鲌为对象,利用RACE技术克隆翘嘴红鲌果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因,该基因cDNA全长1945bp,其中ORF区975bp,编码325个氨基酸,5′非编码区933bp,3′非编码区37bp。通过实时荧光定量PCR检测了ALDO-C在不同组织中相对表达水平。发现ALDO-C基因在翘嘴红鲌的肾、肝、肌肉、性腺中均有表达,且在肾中表达量最高,显著高于其他组织。同时采用石蜡切片、H.E染色和原位杂交染色,观察分析翘嘴红鲌的肾组织显微结构和ALDO-C基因的表达定位,结果表明,ALDO-C在鱼类肾单位和集合管结构、调节肾组织水平衡及抗病性方面有重要作用。可以考虑将翘嘴红鲌醛缩酶C基因作为生长发育及抗病性相关的候选基因,用于翘嘴红鲌鱼的分子辅助育种,以期为今后的研究提供理论基础。

关键词：翘嘴红鲌 ALDO-C 肾原位杂交

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景宁县陆封型香鱼生物学特性研究

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现代农业科技 2021年第22期 155-156,162页

作者：姚子亮练青平原居林张任驰郭爱环倪蒙刘梅陈淑芬汤长远王静文李丽伟任文平陆君黄富友吴燕琴叶承义丽水市水产技术推广总站浙江丽水323000 农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 景宁畲族自治县农业农村局渔业技术推广中心浙江景宁323500 景宁安境农业开发有限公司浙江景宁323599 浙江浙能北海水力发电有限公司滩坑水电站水生生物增殖放流站浙江青田323907

为探究浙江省景宁县陆封香鱼生物学特性,于2016年3月至2017年10月每月在丽水市景宁县瓯江支流小溪上游河段捕捞陆封型香鱼,对陆封型香鱼体长和体质量、体长和体质量的关系、平均体长和平均体质量月变化、平均肥满度月变化和性腺发育等... 详细信息

为探究浙江省景宁县陆封香鱼生物学特性,于2016年3月至2017年10月每月在丽水市景宁县瓯江支流小溪上游河段捕捞陆封型香鱼,对陆封型香鱼体长和体质量、体长和体质量的关系、平均体长和平均体质量月变化、平均肥满度月变化和性腺发育等指标进行了研究。结果表明,陆封型香鱼平均体长为(13.8±3.7)cm,平均体质量为(44.3±31.9)g,体长和体质量关系式为W=0.0038L3.467(R2=0.98,n=347),呈异速生长,体长和体质量在3—10月总体呈增加趋势,9月平均肥满度最高,为1.45%,10月陆封型香鱼雄鱼精巢和雌鱼卵巢均已发育成熟。

关键词：陆封型香鱼生物学特性浙江景宁

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千岛湖国家级水产种质资源保护区(梓桐核心区)鱼类群落结构

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上海海洋大学学报 2019年第4期28卷 587-596页

作者：郝雅宾刘金殿郭爱环张爱菊原居林练青平顾志敏浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江湖州313001 中国水产科学研究院东海水产研究所浙江研究中心浙江湖州313001 浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001

2016年3月—2017年11月对梓桐核心区水域的鱼类资源按季度进行采样调查,对该水域鱼类群落种类组成、生态类型、优势种、多样性指数和ABC曲线进行分析。共采集鱼类43种,隶属4目8科30属,其中,鲤科鱼类种类最多(65.12%);以中上层、杂食性... 详细信息

2016年3月—2017年11月对梓桐核心区水域的鱼类资源按季度进行采样调查,对该水域鱼类群落种类组成、生态类型、优势种、多样性指数和ABC曲线进行分析。共采集鱼类43种,隶属4目8科30属,其中,鲤科鱼类种类最多(65.12%);以中上层、杂食性、湖泊定居性鱼类为主;优势种为黄尾鲴(Xenocypris davidi)、银飘鱼(Pseudolaubuca sinensis)和鳙(Aristichthys nobilis);Margalef、 Simpson、 Shannon-Wiener和Pielou指数两年的变化范围分别为3.17~5.01、0.68~0.89、1.79~2.55和0.61~0.84;鱼类群落结构季节变化呈显著差异,且在多数情况下受到中度干扰。研究结果不仅有助于了解千岛湖保护区内的鱼类群落和资源的状况,而且可为兴建水利工程对鱼类群落结构影响提供参考的资料。

关键词：千岛湖鱼类资源群落结构优势种生物多样性

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一种三角帆蚌肌浆网Ca^(2+)-ATP酶基因cDNA的全长克隆与表达分析

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浙江农业学报 2019年第4期31卷 545-555页

作者：张爱菊刘士力刘金殿张根芳周志明浙江省淡水水产研究所中国水产科学研究院东海水产研究所浙江研究中心农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001 金华职业技术学院浙江金华321000

采用RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)鳃组织中成功克隆得到一种肌浆网Ca^(2+)-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)基因的全长cDNA序列,共3 326 bp,包含201-bp 5’-UTR区域、3 060-bp编码框(ORF)和65-bp 3’-UTR。ORF共编码1 019个氨基酸,预测无信号肽。该基因氨基酸序列呈现出典型的Ca^(2+)-ATP酶特征,由Cation_ATPase_N、E1-E2_ATPase、Hydrolase、Cation_ATPase_C四种类型结构域组成,其内含SERCAs的常见结构组成包括磷酸化区域、异硫氰酸荧光素位点、FSBA结合位点、受磷蛋白结合区以及毒胡萝卜素位点。分析显示,该基因序列高度保守且与海洋软体动物具有最高同源性。荧光定量PCR检测,该基因在三角帆蚌外套膜、斧足、鳃、肝胰腺、性腺等5个组织中均有表达,且在鳃、外套膜、肝胰腺组织中表达较高。不同Ca^(2+)浓度处理试验的结果表明,随水体中Ca^(2+)浓度逐渐升高,该基因在外套膜中的表达水平呈先下降后上升趋势,并在Ca^(2+)浓度为60 mg·L^(-1)时达到最低值,80 mg·L^(-1)时达到最高值。同时在60 mg·L^(-1) Ca^(2+)浓度条件下,外套膜中SERCA基因的表达量随时间推移先上升,并于48 h时达到最高,而后逐渐下降。上述结果为进一步深入研究SERCA基因的功能及其调控机理奠定了基础。

关键词：三角帆蚌 SERCA 克隆基因表达钙刺激

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红螯螯虾小棚标粗池塘养殖模式试验示范

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科学养鱼 2019年第9期41卷 24-25页

作者：程顺贾永义迟美丽郑建波刘士力顾志敏浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室

近两年红螯螯虾池塘养殖模式的探索受到研究者广泛关注,并已在江浙地区普遍展开,在江浙地区池塘养殖红螯螯虾亩产可达150千克以上,亩效益达万元。由于红螯螯虾为热带性种类,且具有抱卵少、不同步的特点,特别在非热带地区普遍出现养殖周... 详细信息

近两年红螯螯虾池塘养殖模式的探索受到研究者广泛关注,并已在江浙地区普遍展开,在江浙地区池塘养殖红螯螯虾亩产可达150千克以上,亩效益达万元。由于红螯螯虾为热带性种类,且具有抱卵少、不同步的特点,特别在非热带地区普遍出现养殖周期短、养成规格小及苗种成活率低等问题,导致其行业发展受阻。本次研究针对红螯螯虾生物学特性及浙北地区的气候与消费需求差异,探索建立适宜红螯螯虾特点的池塘养殖模式——小棚标粗池塘养殖模式,并通过示范带动,实现红螯螯虾的产业化开发与推广。现将该技术进行归纳总结,并将技术经验及该模式试验示范的基本情况汇报如下。

关键词：红螯螯虾需求差异热带性池塘养殖试验示范江浙地区浙北地区示范带动

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三角帆蚌育珠蚌群体生长性状和转录组差异分析

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水产科学 2019年第5期38卷 688-694页

作者：张爱菊张根芳顾志敏周志明浙江省淡水水产研究所中国水产科学研究院东海水产研究所浙江研究中心农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001 金华职业技术学院浙江金华321000

为比较3个三角帆蚌(鹰蚌、超长蚌、纵纹蚌)育珠蚌选育群体(经过2代选育的鹰蚌、超长蚌、纵纹蚌)幼蚌之间的差异,于2014年和2015年分两次随机抽取同批繁殖且在同一池塘养殖的不同群体幼蚌各40只,测量其贝壳形态学、质量等生长性状指标。... 详细信息

为比较3个三角帆蚌(鹰蚌、超长蚌、纵纹蚌)育珠蚌选育群体(经过2代选育的鹰蚌、超长蚌、纵纹蚌)幼蚌之间的差异,于2014年和2015年分两次随机抽取同批繁殖且在同一池塘养殖的不同群体幼蚌各40只,测量其贝壳形态学、质量等生长性状指标。统计学分析结果表明,鹰蚌群体偏宽型,纵纹蚌群体偏高型,超长蚌偏长型;鹰蚌和纵纹蚌两个群体幼蚌在形态上更为相近;鹰蚌群体具明显壳宽和壳高生长优势,而超长蚌群体具明显壳长生长优势。推测鹰蚌作为育珠蚌更适合内脏囊插核,将有利于大颗粒优质有核珠的培育;超长蚌作为育珠蚌更适合外套膜插片,有利于无核珠的培育。利用Illumina高通量测序技术研究鹰蚌和超长蚌幼蚌肝胰腺组织转录组的表达差异情况。筛选出差异表达unigenes共63 098条,其中显著性差异表达基因388个,显著富集的上的GO条目主要参与各类物质代谢过程的调节、生物合成过程的调节以及基因表达的调节等生物学过程,显著富集上的KEGG通路为代谢通路中半胱氨酸和蛋氨酸代谢通路和柠檬酸循环通路。研究结果可为三角帆蚌的优良品种选育和育珠实践提供科学指导。

关键词：三角帆蚌育珠蚌贝壳形态生长性状转录组选择育种

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翘嘴鲌精子生理特性及超低温冷冻的研究

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江苏农业科学 2019年第7期47卷 175-179页

作者：程顺顾志敏刘士力蒋文枰迟美丽贾永义浙江省淡水水产研究所/农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001

采用试验生态——显微观察方法对翘嘴鲌精子的生理特性进行了研究,并用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,筛选出适宜的稀释液与抗冻剂配方。结果表明,翘嘴鲌适宜的盐度范围为0～0.4%,pH值为5.5～8.0时,精子激活率较高,其中pH值为5.5... 详细信息

采用试验生态——显微观察方法对翘嘴鲌精子的生理特性进行了研究,并用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,筛选出适宜的稀释液与抗冻剂配方。结果表明,翘嘴鲌适宜的盐度范围为0～0.4%,pH值为5.5～8.0时,精子激活率较高,其中pH值为5.5时,精子运动时间与寿命最长;翘嘴鲌精子在4℃条件下保存84 h仍有48.33%的激活率,在25℃条件下保存84 h时精子死亡。以D-15为稀释液、10%乙二醇(EG)为抗冻剂,采用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,解冻后精子活力最高。

关键词：翘嘴鲌精子生理特性超低温冷冻激活率

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不同规格的河川沙塘鳢夏花生长及生理生化研究

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江苏农业科学 2019年第7期47卷 179-182页

作者：迟美丽贾永义王雨辰程顺刘士力蒋文枰顾志敏浙江省淡水水产研究所/农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001

为深入了解不同规格河川沙塘鳢幼鱼的生长状态、减少沙塘鳢夏花在鱼虾混养池塘内种间和种内残食,通过在车间内建立模拟池塘的生态系统,测定了不同规格沙塘鳢夏花在养殖37 d后生长及生理生化指标的变化情况。结果表明,试验中沙塘鳢鱼苗... 详细信息

为深入了解不同规格河川沙塘鳢幼鱼的生长状态、减少沙塘鳢夏花在鱼虾混养池塘内种间和种内残食,通过在车间内建立模拟池塘的生态系统,测定了不同规格沙塘鳢夏花在养殖37 d后生长及生理生化指标的变化情况。结果表明,试验中沙塘鳢鱼苗总存活率为83%,中鱼组的体质量变异系数与其他2组相比增加明显。小鱼组的特定生长率最快,且小鱼组的超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、雌二醇(E2)含量、睾酮(T)含量、生长激素(GH)含量和甲状腺激素(T4)含量都显著高于中鱼组和大鱼组。另外,小鱼组存在50%的小规格鱼不能很好地捕食青虾的现象。综合幼鱼存活率、生长状态和产量,建议初始放养时沙塘鳢体长在32 mm以上且沙塘鳢体质量/青虾体质量的平均值在2.6以上。

关键词：河川沙塘鳢鱼虾混养生长差异氧化还原酶激素

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翘嘴鲌生长激素基因侧翼2个微卫星位点与生长性状的关联分析

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浙江农业学报 2019年第1期31卷 62-68页

作者：刘士力蒋文枰程顺迟美丽郑建波贾永义赵金良顾志敏浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001 上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心上海201306 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306

通过120尾同塘养殖翘嘴鲌体长和体质量的测定,以及生长激素基因(GH)侧翼的2个微卫星位点Cal-GH01和Cal-GH02基因型检测,分析了翘嘴鲌GH基因侧翼的2个微卫星多态性与生长性能的相关性。结果表明:Cal-GH01共检测到3个等位基因(404、407和4... 详细信息

通过120尾同塘养殖翘嘴鲌体长和体质量的测定,以及生长激素基因(GH)侧翼的2个微卫星位点Cal-GH01和Cal-GH02基因型检测,分析了翘嘴鲌GH基因侧翼的2个微卫星多态性与生长性能的相关性。结果表明:Cal-GH01共检测到3个等位基因(404、407和410 bp)和6种基因型,等位基因407 bp是优势等位基因,407/407 bp是优势基因型;该微卫星位点多态信息含量为0. 420,观测杂合度为0. 207 2,属中度多态性位点。Cal-GH02共检测到6个等位基因(366、375、378、381、384和387 bp)和11种基因型,等位基因381 bp是优势等位基因,381/381 bp是优势基因型;该微卫星座位多态信息含量为0. 450,观测杂合度为0. 466 1,属中度多态座位。微卫星位点Cal-GH01的分析结果表明,404/407型个体占样本数的13. 3%,其体长最长。407/410型个体占样本数的5%,其体质量最大。Cal-GH01不同基因型个体体长和体质量均有差异,但差异均不显著(P> 0. 05)。在微卫星位点Cal-GH02中,366/381型个体占样本数的3. 3%,其体长和体质量均最大,其体质量显著大于其他基因型个体(P <0. 05)。384/387型个体占样本数的2. 5%,其体长和体质量均最小,其体长显著小于其他基因型个体(P <0. 05)。翘嘴鲌GH基因多态性与生长性状存在关联,推测相关变异位点可作为翘嘴鲌生长的候选辅助标记。

关键词：翘嘴鲌生长激素基因微卫星生长性状性状关联

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河川沙塘鳢GH基因及侧翼的克隆与生物信息学分析

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浙江农业学报 2019年第9期31卷 1461-1470页

作者：刘加林刘士力蒋文枰程顺迟美丽郑建波贾永义赵金良尹绍武顾志敏南京师范大学生命科学学院江苏南京210000 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江湖州313001 上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学上海水产养殖工程技术研究中心上海201306

利用长片段PCR、基因组步移法及T-A克隆技术,成功克隆出河川沙塘鳢( Odontobutis potamophila ) GH 基因全长序列,提交至GenBank获得登录号MH717101。河川沙塘鳢 GH 基因全序列长5120 bp,5′端和3′端侧翼序列长度分别为920、682 bp,经... 详细信息

利用长片段PCR、基因组步移法及T-A克隆技术,成功克隆出河川沙塘鳢( Odontobutis potamophila ) GH 基因全长序列,提交至GenBank获得登录号MH717101。河川沙塘鳢 GH 基因全序列长5120 bp,5′端和3′端侧翼序列长度分别为920、682 bp,经预测,上游区域含有MF3、GAGA factor、HNF-3alpha、C/EBP、R2、GATA-1等多种转录调控元件;转录单元长3 518 bp,包含4个内含子和5个外显子,4个内含子大小分别为75、333、2 070和121 bp,5个外显子长度分别为150、131、117、138和373 bp,第3内含子长达2 070 bp,其长度是翘嘴鲌( Culter alburnus )第3内含子的4倍以上;开放阅读框区(open reading frame,ORF)为594 bp,编码由197个氨基酸残基组成的蛋白质多肽。河川沙塘鳢与鲈形目、鲉形目、鲤形目、鲇形目等13种鱼类的氨基酸序列同源性比较表明,其与彼氏冰鰕虎鱼( Leucopsarion petersii )同源性最高,为83.8%,与草鱼( Ctenopharyngodon idella )同源性最低,为49.1%,在180~197氨基酸序列处,河川沙塘鳢表现出高度不保守性,与所列鱼类氨基酸排列均完全不一致。该研究结果为进一步研究河川沙塘鳢 GH 基因的表达、功能及其转录调控特征奠定了分子基础。

关键词：河川沙塘鳢生长激素克隆序列分析生物信息学

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