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水产学报 2016年第6期40卷 976-992页

作者：李法君李明爽付春鹏李群峰罗永巨傅洪拓潍坊科技学院中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室广西水产科学研究院全国水产技术推广总站

mi RNAs是一类在真核生物中广泛存在的非编码小分子RNA,通过与靶m RNA互补配对在转录水平上对基因的表达进行负调控,导致m RNA的翻译抑制或降解。大量研究表明,mi RNA在躯体发育、癌症、细胞分化、细胞增殖与凋亡、脂肪代谢等方面发挥... 详细信息

mi RNAs是一类在真核生物中广泛存在的非编码小分子RNA,通过与靶m RNA互补配对在转录水平上对基因的表达进行负调控,导致m RNA的翻译抑制或降解。大量研究表明,mi RNA在躯体发育、癌症、细胞分化、细胞增殖与凋亡、脂肪代谢等方面发挥作用。近来在水产动物中,有关mi RNA的研究取得了众多的科研成果,然而对其进行全面总结的报道较缺乏。本文综述了mi RNA在水产动物中的研究进展,结果显示mi RNA在水产动物中表现为多样化的生物学功能,本文也对其研究前景进行了展望,旨在为以后更好地研究水产动物mi RNA的功能提供参考。

关键词：鱼类甲壳动物水产动物 miRNA 负调控

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投喂频率对池塘循环水养殖大口黑鲈消化酶、组织结构及脂代谢酶基因表达的影响

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中国水产科学 2021年第2期28卷 157-166页

作者：谢苏明徐钢春王裕玉聂志娟孙毅李全杰上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

为研究池塘工程化循环水养殖模式下投喂频率(2次/d、3次/d、4次/d)对大口黑鲈(Micropterus salmoides)体成分、肠道消化和肝脏组织结构及脂蛋白酯酶(LPL)和肝脂酶(HL)基因相对表达丰度的影响,选用平均体重为(5.0±0.4)g的大口黑鲈... 详细信息

为研究池塘工程化循环水养殖模式下投喂频率(2次/d、3次/d、4次/d)对大口黑鲈(Micropterus salmoides)体成分、肠道消化和肝脏组织结构及脂蛋白酯酶(LPL)和肝脂酶(HL)基因相对表达丰度的影响,选用平均体重为(5.0±0.4)g的大口黑鲈为研究对象,在池塘工程循环水养殖系统中进行为期120 d的养殖实验。结果表明,投喂频率对鱼体全鱼的粗脂肪和灰分含量影响显著(P<0.05);投喂频率2次/d组的灰分含量显著高于其他两组,而2次/d组体脂肪含量低于投喂3次/d、4次/d组,体水分和粗蛋白含量均不受投喂频率的影响(P>0.05);投喂频率2次/d组肠道淀粉酶和脂肪酶活性显著高于4次/d投喂组(P<0.05);投喂频率对大口黑鲈肠道绒毛高度和宽度影响不显著(P>0.05),4次/d组肠道绒毛排列整齐度下降且肌层厚度显著低于2次/d和3次/d组(P<0.05)。肝脏组织学显示,投喂频率越高肝脏脂肪堆积加重,相对于2次/d和3次/d组,4次/d组肝细胞偏移、空泡化的现象较明显。在第60天和90天,2次/d组LPL基因相对表达量显著高于4次/d组(P<0.05);而在第120天时,LPL的相对表达量在各组间差异不显著(P>0.05)。2次/d组HL基因相对表达量显著高于4次/d组(P<0.05)。综合分析,在饱饲投喂条件下,池塘循环水养殖大口黑鲈的适宜投喂频率为2次/d。

关键词：大口黑鲈投喂频率池塘工程化循环水养殖系统肠道消化基因表达丰度

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猪苓多糖对四氯化碳诱导的建鲤肝细胞损伤中生化指标及CYP3A表达的影响

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华中农业大学学报 2014年第3期33卷 78-83页

作者：杜金梁刘英娟曹丽萍贾睿王加豪殷国俊农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室/鱼类免疫药理学国际联合实验室/中国水产科学研究院淡水渔业研究中心无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院无锡214081

采用胰酶消化法分离原代建鲤肝细胞并进行培养,用四氯化碳(CCl4)构建建鲤肝细胞损伤模型,以3种不同浓度的猪苓多糖进行干预,检测肝细胞培养液中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(... 详细信息

采用胰酶消化法分离原代建鲤肝细胞并进行培养,用四氯化碳(CCl4)构建建鲤肝细胞损伤模型,以3种不同浓度的猪苓多糖进行干预,检测肝细胞培养液中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量及肝细胞存活率;收集肝细胞进行RNA提取,并用RT-PCR法测定CYP3A基因表达情况。结果表明:以前处理组中质量浓度为0.8mg/mL的猪苓多糖效果最好,与CCl4组相比,显著降低了GOT、GPT、MDA在肝细胞中的释放;极显著降低了LDH在肝细胞中的释放;显著升高了肝细胞中SOD活性值;显著提高了肝细胞的存活率;显著诱导了CYP3A mRNA的表达。这说明猪苓多糖能有效抑制CCl4所造成的建鲤肝细胞损伤。

关键词：建鲤猪苓多糖四氯化碳肝细胞

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流水槽和池塘两种养殖模式下大口黑鲈存活率、生长和性腺成熟的比较研究

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淡水渔业 2021年第1期51卷 83-89页

作者：孙毅王裕玉聂志娟高建操徐跑徐钢春中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

通过比较大口黑鲈(Micropterus salmoides)在流水槽-池塘接力养殖和池塘养殖两种模式中的存活率、生长、性腺成熟、饵料系数的差异,以探索大口黑鲈流水槽-池塘接力养殖新模式的可行性。在8月初将大口黑鲈鱼苗(初始平均体重为23.933 g)... 详细信息

通过比较大口黑鲈(Micropterus salmoides)在流水槽-池塘接力养殖和池塘养殖两种模式中的存活率、生长、性腺成熟、饵料系数的差异,以探索大口黑鲈流水槽-池塘接力养殖新模式的可行性。在8月初将大口黑鲈鱼苗(初始平均体重为23.933 g)分别放养于池塘和水槽中养殖,并于次年4月份将流水槽养殖的大口黑鲈转入池塘接力养殖至6月份,定期检测大口黑鲈生长、性腺成熟系数、饵料系数等。结果表明:流水槽养殖大口黑鲈存活率高于池塘养殖组,流水槽养殖组水质指标(溶解氧、氨氮、亚硝酸盐)均优于池塘养殖组;在养殖前期,池塘组保持了生长优势,11月份开始生长减缓,每隔2个月体重存在显著差异,而流水槽养殖组鲈鱼体重在各月份之间差异显著;在各个采样时间点,池塘养殖组鲈鱼体重离散系数高于流水槽养殖组,而水槽组中离散系数随鲈鱼生长呈现波动起伏;3-4月份是大口黑鲈性腺发育期,在此阶段流水槽中鲈鱼的性腺成熟系数为3-6月中的最高;在整个养殖周期内3-4月份日增量最低。综上所述,在养殖前期,池塘组鲈鱼的生长略占优势,但在存活率、水质、饵料系数、性腺发育等方面劣于流水槽组;养殖后期,流水槽组存在饵料系数升高、个体差异增大、生长速率减缓等问题,从生长和经济成本的考虑转入池塘养殖更有利,因此流水槽-池塘接力养殖大口黑鲈具有一定的可行性,4月份是将大口黑鲈从流水槽转移至池塘进行接力养殖的适宜时期。

关键词：大口黑鲈(Micropterus salmoides) 接力养殖模式存活率生长性腺成熟系数

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哈尼梯田稻鲤共作模式下的微生物群落结构

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水产学报 2020年第3期44卷 469-479页

作者：聂志娟李非凡赵文武徐钢春刘波王裕玉邵乃麟胡佳雯徐跑中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室中国科学院大学全国水产技术推广总站中国水产学会

为了探究哈尼梯田稻鲤共作模式(复合生态系统)微生物菌落结构特征,本实验拟采用高通量测序技术对稻鲤共作(RC)与稻田单作(CK)2种模式下水体、表层以及根系土壤及鲤肠道细菌(16S rDNA)多样性特征进行分析。高通量测序结果显示,复合生态... 详细信息

为了探究哈尼梯田稻鲤共作模式(复合生态系统)微生物菌落结构特征,本实验拟采用高通量测序技术对稻鲤共作(RC)与稻田单作(CK)2种模式下水体、表层以及根系土壤及鲤肠道细菌(16S rDNA)多样性特征进行分析。高通量测序结果显示,复合生态系统中主要细菌门类为变形菌门、放线菌门、厚壁菌门、绿弯菌门、酸杆菌门、拟杆菌门及硝化螺旋菌门等。与CK相比,RC表层土壤中绿弯菌门和厚壁菌门相对丰度显著增加,主要显著增加的优势菌属为厌氧绳菌(Anaerolineaceaenorank)、Aminicenantespnorank、未定义的绿弯菌(ChloroflexiPunclassified)、梭菌(Clostridiumsensustricto1)、梭菌(***12)、互营菌(Syntrophaceaefnorank)、芽单胞菌(Gemmatimonadaceaefnorank);RC根系土壤中绿弯菌门含量显著高于CK组,主要是Anaerolineaceaenorank、Sideroxydans、Aminicenantespnorank、Chloroflexipunclassified、Gemmatimonadaceaefnorank优势菌属显著增加。RC模式中鲤肠道优势菌主要为厚壁菌门和变形菌门,其中厚壁菌门相对丰度为58.59%,超过一半的丰度。RC模式组相比CK组,土壤的有机质、总氮、总磷等理化指标都有所降低,其中pH、总磷和速效磷显著降低;稻田表层和根系土壤的细菌Sobs指数及PD指数也均增加,其中稻田表层土壤组显著增加。研究表明,增加鲤养殖后,稻田表层土壤的理化性质和细菌群落结构产生明显变化,同时也在一定程度上对水稻根系和养殖生物肠道的群落结构产生了影响。本研究初步揭示了RC复合生态系统优于CK系统的微生物生态基础。

关键词：哈尼梯田稻鲤共作模式菌群结构高通量测序

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建鲤催乳素受体基因全长cDNA的克隆、序列分析与组织表达

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中国水产科学 2013年第4期20卷 722-732页

作者：李冰王杰张成锋朱健中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

为了解催乳素受体(Prolactin Receptor,PRLR)的基因序列及其在建鲤(Cyprinus carpio ***)渗透调节组织中的表达情况,采用同源克隆和末端快速扩增(rapid amplication of cDNA ends,RACE)的方法分离克隆了建鲤PRLR基因全长cDNA,得到2 440... 详细信息

为了解催乳素受体(Prolactin Receptor,PRLR)的基因序列及其在建鲤(Cyprinus carpio ***)渗透调节组织中的表达情况,采用同源克隆和末端快速扩增(rapid amplication of cDNA ends,RACE)的方法分离克隆了建鲤PRLR基因全长cDNA,得到2 440 bp的全长cDNA,包括1 821 bp的开放阅读框(ORF),213 bp的5′末端非编码区(UTR)以及406 bp的3′末端非编码区(UTR)。对该基因序列和推测的氨基酸序列进行同源性比对和系统分析显示:建鲤与其他硬骨鱼类该基因的氨基酸序列相似度在37.46%～87.25%,与鲤(Cyprinus carpio)的氨基酸相似度最高(87.25%),鲫(Carassius auratus)次之(86.86%),和金头鲷(Sparus aurata)的相似度较低(41.87%),和人(Homo sapiens)最低(37.46%),表明不同物种间的PRLR的氨基酸序列具有较高的保守性。用实时定量PCR(RT-PCR)检测该基因在建鲤脑、肠、鳃、性腺、肝、脾、肾、皮肤中催乳素受体的相对表达量,其中鳃、肾、肠3个主要渗透调节组织的表达量较高,这表明建鲤的渗透调节组织是PRLR的主要表达场所,从定量角度提示了催乳素(prolactin,PRL)通过PRLR的表达,作用于渗透调节组织从而行使其渗透压调节功能。本研究旨在为进一步探索建鲤的渗透调控机制提供基础依据。

关键词：建鲤催乳素受体克隆序列分析组织表达

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青虾血蓝蛋白基因的克隆、表达分析及多克隆抗体的制备

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中国水产科学 2014年第2期21卷 235-243页

作者：孙盛明戈贤平傅洪拓朱健张世勇乔慧中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列,并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2 235 bp,包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR),2 074 bp的开放阅读框(ORF),151 bp的3′UTR,开放阅读框编码688... 详细信息

应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列,并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2 235 bp,包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR),2 074 bp的开放阅读框(ORF),151 bp的3′UTR,开放阅读框编码688个氨基酸。蛋白相似度比对显示,青虾血蓝蛋白含有典型的6个保守的铜离子结合位点。系统进化树分析表明,青虾Hc与脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)Hc聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,Hc基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量在肝胰腺中最高;使用荧光定量PCR检测青虾Hc基因在低氧胁迫和复氧条件下在肝胰腺中的mRNA时空表达情况,结果显示,经低氧和复氧刺激后,与对照组相比,Hc在肝胰腺中的表达量分别在低氧胁迫12 h、24 h和复氧6 h出现了3次明显上调,由此推测Hc基因参与低氧应激分子过程。此外,本研究通过血蓝蛋白的分离纯化技术制备了多克隆抗体,本研究结果可为更进一步的了解青虾血蓝蛋白的生理功能提供理论支撑。

关键词：青虾血蓝蛋白基因克隆低氧胁迫复氧刺激多克隆抗体

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青虾高血糖激素基因全长cDNA序列的克隆及表达分析

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中国水产科学 2013年第1期20卷 82-92页

作者：金舒博王宁乔慧傅洪拓吴滟龚永生蒋速飞熊贻伟中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室江苏无锡214081 南京农业大学无锡渔业学院江苏无锡214081

本研究首次克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)高血糖激素(crustacean hyperglycemic homone,CHH)基因全长cDNA序列,并使用荧光定量PCR技术首次检测了CHH基因在青虾不同组织中的表达。青虾CHH基因cDNA全长1 017 bp,包括241 bp的5′UTR,408 bp的开放阅读框(ORF),355 bp的3′UTR,开放阅读框编码135个氨基酸。成熟肽包含6个CHH家族中位置保守的Cys残基。青虾CHH成熟肽C端为GK,确定为ES型CHH基因。蛋白相似度比对显示,所分离的青虾CHH被归为CHH家族I型肽。系统进化树分析表明,青虾CHH多肽与罗氏沼虾聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,CHH基因在青虾不同组织中均有表达,其表达量由高到依次为眼柄、精巢、腹神经节、脑、肠、肝、心脏、卵巢。以卵巢为参照其表达量设为1时,眼柄与精巢CHH基因表达量分别为卵巢的500倍和250倍,由此推测CHH基因可能与雄性生殖过程相关。

关键词：青虾 ES型高血糖激素 cDNA 定量PCR

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QseB在嗜水气单胞菌响应去甲肾上腺素中的作用

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水产学报 2022年第2期46卷 270-279页

作者：秦婷习丙文谢骏潘良坤中国水产科学研究院淡水渔业研究中心中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业农村部淡水渔业和种质资源利用重点实验室南京农业大学无锡渔业学院

为探明嗜水气单胞菌QseB在病原菌对鱼体应激激素去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的识别和响应过程中的作用，实验采用同源重组方法构建了嗜水气单胞菌NJ-35的qseB缺失突变株(ΔqseB)，比较分析了NE诱导后，野生株和突变株之间其生物膜... 详细信息

为探明嗜水气单胞菌QseB在病原菌对鱼体应激激素去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)的识别和响应过程中的作用，实验采用同源重组方法构建了嗜水气单胞菌NJ-35的qseB缺失突变株(ΔqseB)，比较分析了NE诱导后，野生株和突变株之间其生物膜形成能力、溶血活性和运动能力等与细菌毒力有关的生物学功能的变化，以及对鱼体致病力的变化。结果显示，qseB的缺失显著降低了NE对嗜水气单胞菌的生长、生物膜形成、溶血活性的促进作用，减弱了嗜水气单胞菌对奥利亚罗非鱼的致死率，而对细菌运动能力和脂肪酶活性无显著影响。研究表明，NE对嗜水气单胞菌NJ-35生物膜形成和溶血活性的增强作用可能依赖于QseB，表明QseB在病原菌与宿主相互作用中发挥着重要作用。本研究进一步揭示了嗜水气单胞菌的致病机理，并为细菌与宿主相互作用的研究提供了新的理论基础。

关键词：嗜水气单胞菌 QseB 去甲肾上腺素毒力

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青虾精(卵)母细胞特有因子Gtsf1基因的克隆及其时空表达分析

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水生生物学报 2016年第2期40卷 261-267页

作者：梁国霞傅洪拓乔慧白鸿坤张文宜李法君蒋速飞熊贻伟龚永生金舒博吴滟南京农业大学无锡渔业学院无锡214081 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室无锡214081 潍坊科技学院寿光262700

为了研究青虾性早熟现象,在实验室构建的青虾精卵巢表达谱中发现一个Gtsf1同源EST序列,采用RACE技术克隆获得青虾Gtsf1基因cDNA序列长349 bp(GenBank登录号:KR349325),开放阅读框(Open reading frame,ORF)为240 bp,编码79个氨基酸。生... 详细信息

为了研究青虾性早熟现象,在实验室构建的青虾精卵巢表达谱中发现一个Gtsf1同源EST序列,采用RACE技术克隆获得青虾Gtsf1基因cDNA序列长349 bp(GenBank登录号:KR349325),开放阅读框(Open reading frame,ORF)为240 bp,编码79个氨基酸。生物信息学分析预测青虾Gtsf1蛋白包含1个zf-U11-48K结构域,并发现该蛋白无信号肽,属于非分泌蛋白。系统进化树分析表明青虾Gtsf1蛋白与昆虫纲的蝽类(Lygus hesperus)亲缘关系最近。组织表达分析结果显示,Gtsf1基因在性腺中表达很高,特别是在卵巢中表达最高(为精巢的6倍),其他组织中表达极低。卵巢不同发育时期表达结果发现,发育初期Gtsf1基因表达水平较低,随着卵巢的发育,该基因的表达水平呈现显著上升趋势(P<0.05),在成熟期达到最高峰,在消退期显著下降并恢复到较低水平(P<0.05)。胚胎和胚后不同发育时期结果显示,Gtsf1基因在胚胎发育早期表达水平较高,囊胚期时显著升高并达到峰值(P<0.05),从原肠期显著下降直至变态后第10天该基因表达水平维持较低水平(P<0.05)。以上研究结果表明Gtsf1基因与生殖密切相关,特别是在卵巢发育过程中有关,且呈正相关趋势。同时,Gstf1基因可能主要参与青虾胚胎早期发育的调控。研究首次在甲壳动物中克隆获得Gtsf1基因,并分析Gtsf1基因在青虾中的时空表达模式,研究结果将为进一步研究青虾Gtsf1基因功能和青虾性腺发育调控规律奠定基础,也为其他甲壳动物的生殖相关研究提供参考。

关键词：青虾 Gtsf1 卵巢发育性腺时空表达

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