检索结果-内蒙古大学图书馆

植物保护学报 2006年第3期33卷 246-250页

作者：张永军金凯罗志兵蒋小东裴炎农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室

研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产... 详细信息

研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产物,可使野生菌株对桃蚜的致死中浓度降低4倍以上,共毒系数(CTC)达404.6。但发酵产物经121℃处理20min,增效作用完全丧失。用饱和硫酸铵沉淀蛋白质分别将透析后的重溶蛋白质和上清液用于增效作用测定,结果证明增效成分主要是蛋白类物质。将梯度稀释的发酵产物与浓度为1×107孢子/mL的野生菌株孢子悬浮液混合进行生物测定,发现各处理的致死中时与CDEP-1的活性呈负相关,相关系数为-0.8946。由此推断,发酵产物中的增效物质主要是目的基因表达产物CDEP-1。

关键词：类枯草杆菌蛋白酶球孢白僵菌发酵产物

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水稻芽鞘紫线抑制与反抑制现象的遗传及反抑制基因的SSR分析

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Acta Genetica Sinica 2004年第8期31卷 830-835页

作者：张毅沈福成杨光伟何光华张正圣杨正林西南农业大学农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室重庆400716

从芽鞘有紫线和无紫线的杂交组合中发现 6个组合的F2 代紫线有无比例为 13∶3,以无紫线且为不育系的亲本XNA为母本对组合XNA/ 2 1A15 0进行回交 ,BF1代的分离比例符合 1∶1。遗传分析表明 :水稻芽鞘紫线表达受抑制基因I和反抑制基因Ai(... 详细信息

从芽鞘有紫线和无紫线的杂交组合中发现 6个组合的F2 代紫线有无比例为 13∶3,以无紫线且为不育系的亲本XNA为母本对组合XNA/ 2 1A15 0进行回交 ,BF1代的分离比例符合 1∶1。遗传分析表明 :水稻芽鞘紫线表达受抑制基因I和反抑制基因Ai(t) 的影响 ,I抑制芽鞘紫线C_A_P_系统中的P基因 ,Ai(t) 抑制I基因。以BF1构建了Ai(t) 基因的定位群体 ,SSR分析表明 :Ai(t) 基因与RM 335、RM 2 95、RM2 87、RM 2 1连锁 ,其遗传距离分别为2 8cM、10 2cM、13 9cM、2 6 1cM。

关键词：水稻芽鞘紫线抑制和反抑制基因遗传定位 SSR

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两个棉花Rac蛋白基因的克隆与表达分析

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Acta Genetica Sinica 2005年第1期32卷 72-78页

作者：李先碧肖月华罗明侯磊李德谋罗小英裴炎西南农业大学农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室生物技术中心重庆400716

为研究棉花纤维起始和伸长的分子机理 ,在棉花纤维EST序列分析的基础上 ,从棉花纤维中扩增并克隆了 2个棉花Rac蛋白的cDNA基因 ,分别命名为GhRacA和GhRacB。GhRacAcDNA长 95 9bp ,推测的编码蛋白包含2 11个氨基酸。GhRacBcDNA长 92 0bp ... 详细信息

为研究棉花纤维起始和伸长的分子机理 ,在棉花纤维EST序列分析的基础上 ,从棉花纤维中扩增并克隆了 2个棉花Rac蛋白的cDNA基因 ,分别命名为GhRacA和GhRacB。GhRacAcDNA长 95 9bp ,推测的编码蛋白包含2 11个氨基酸。GhRacBcDNA长 92 0bp ,编码 195个氨基酸的蛋白。GhRacA和GhRacB蛋白均含有GTP/GDP结合和激活区域、Effector区和碱性氨基酸区。GhRacB的C末端有保守的异戊烯基化位点CSIL ,而GhRacA没有明显的异戊烯基化位点。序列比较分析表明 ,GhRacA和GhRacB是 2个新的棉花Rac蛋白。RT PCR分析表明 ,GhRacA和GhRacB在根、下胚轴、茎、叶和纤维中都有表达 ,但均在棉花纤维起始和伸长时期有优势表达 ,推测

关键词：棉花 Rac蛋白 GhRacA基因 GhRacB基因纤维发育

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棉花PTS2受体基因(GhPex7)的克隆及表达分析

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Acta Genetica Sinica 2003年第9期30卷 823-829页

作者：李德谋肖月华罗明侯磊罗小英罗克明裴炎农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室西南农业大学生物技术中心重庆400716

利用cDNA AFLP差异片段F0 10 ,通过RACE延伸、EST检索等方法获得了一个棉花过氧化物酶体定位信号2受体蛋白基因 (peroxisomaltargetingsignaltype 2receptor,GhPex7p)的编码序列。该cDNA包含一个 95 4bp的开放阅读框 ,编码 317个氨基酸 ... 详细信息

利用cDNA AFLP差异片段F0 10 ,通过RACE延伸、EST检索等方法获得了一个棉花过氧化物酶体定位信号2受体蛋白基因 (peroxisomaltargetingsignaltype 2receptor,GhPex7p)的编码序列。该cDNA包含一个 95 4bp的开放阅读框 ,编码 317个氨基酸 ,推测其等电点为 5 6 0 3。同源性分析表明 :推测GhPex7与拟南芥、酵母、果蝇、小鼠和人的Pex7p基因存在序列相似性 ,其中与拟南芥的同源性最高 ,为 83% ,并具有 3段WD 4 0蛋白家族的保守域 ,与拟南芥AtPex7的编码蛋白同类。Southern杂交结果表明该基因在陆地棉基因组中存在两个拷贝。Northernblotting和RT PCR分析表明该基因在棉花根、茎、叶、花、胚珠和纤维中均表达 ,但茎、叶组织中的表达水平明显高于胚珠和纤维。

关键词：棉花过氧化物酶体定位信号2 受体蛋白基因 RACE

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棉花纤维优势表达基因Gh SLD1启动子的克隆和功能分析

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中国农业科学 2023年第19期56卷 3712-3722页

作者：刘芳徐梦贝王巧玲孟倩李桂名张宏菊田惠丹徐凡罗明西南大学生物技术中心/农业农村部生物技术与作物品质改良重点开放实验室

【目的】棉花纤维是棉花的主要经济产品，是由胚珠外珠被表皮细胞经极性伸长和次生壁加厚而成的单细胞。棉花纤维细胞是最长的植物细胞之一，是研究植物细胞生长发育的理想材料。鉴定纤维细胞特异或优势表达启动子可为纤维发育的基础研... 详细信息

【目的】棉花纤维是棉花的主要经济产品，是由胚珠外珠被表皮细胞经极性伸长和次生壁加厚而成的单细胞。棉花纤维细胞是最长的植物细胞之一，是研究植物细胞生长发育的理想材料。鉴定纤维细胞特异或优势表达启动子可为纤维发育的基础研究提供控制目标基因表达的调控序列，为改良纤维性状的分子育种提供依据。【方法】克隆纤维细胞优势表达基因GhSLD1的启动子，通过启动子序列分析网站PlantCARE分析克隆序列中包含的重要顺式调控元件。根据部分重要顺式调控元件的分布，对克隆启动子片段进行5′-端删除，共获得4个启动子片段，并构建了相应的植物表达载体。利用构建的植物表达载体进行烟草和棉花的遗传转化，通过转基因烟草和棉花的分子鉴定明确转基因植株。并检测转基因植株不同组织器官、纤维细胞不同发育时期的GUS活性。【结果】克隆获得最长启动子片段为2 900 bp，除了包含多个启动子必备转录调控元件外，还包含多个脱落酸响应元件、厌氧诱导元件、茉莉酸甲酯响应元件、油菜素内酯响应元件、种子特异调控元件、胁迫响应元件和MYB转录因子结合位点。通过5′-端删除获得长度分别为2 900(GhSLD-P1)、2 178(GhSLD1-P2)、1 657(GhSLD1-P3)和1 232 bp(GhSLD-P4)4个启动子片段，经分子鉴定，获得4个片段的转基因烟草，在转基因烟草中，GhSLD-P1、GhSLD1-P2和GhSLD1-P3不表达，而GhSLD-P4广泛表达，表达强度与CaMV 35S启动子相似。GhSLD1-P3和GhSLD-P4差异序列中包含4个脱落酸响应元件、2个油菜素内酯响应元件和3个MYB结合位点，这些顺式调控元件可能与GhSLD1-P1、GhSLD1-P2和GhSLD1-P3在转基因烟草中不表达有一定关系。经分子鉴定，获得GhSLD1-P2转基因棉花。GhSLD1-P2在转基因棉花纤维中优势表达，在转基因花粉中有较低的表达，在其他组织器官中几乎不表达。在纤维细胞的生长发育过程中，GhSLD1-P2在纤维细胞早期生长阶段（5 DPA）表达较低，在纤维细胞伸长期（10—15 DPA）表达水平相对较高，在纤维细胞次生壁合成期（20—30 DPA）表达水平有所降低。【结论】GhSLD1-P4启动子是一个广泛表达启动子，GhSLD1-P2启动子是一个纤维细胞优势表达启动子，在纤维细胞伸长期表达量相对较高。可应用于棉花纤维发育相关基因的功能研究和改良纤维性状的分子育种。

关键词：棉花启动子功能分析 GhSLD1 鞘脂delta8-去饱和酶

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棉花GhHMGR基因在胚珠生长发育过程中的功能

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作物学报 2016年第2期42卷 222-229页

作者：马富磊李德谋李志杨卫娟周雪游宇罗小英西南大学生物技术中心/农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室/重庆市农业生物技术重点实验室重庆400716

采用植物基因工程技术,选用CaMV35S组成型启动子驱动棉花3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶基因GhHMGR在棉花中表达,检测10 DPA(days post anthesis)棉花胚珠内HMGR(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase)酶及可溶性糖、脂质及蛋白质含量,同时进行了胚珠离体培养。结果显示,Gh HMGR在棉花光照部位(叶柄和铃壳)表达量相对较高,非光照部位(根及胚珠)表达量低;超量表达GhHMGR可部分恢复拟南芥hmgr突变体性状;相较野生型,超量表达株系10 DPA胚珠的HMGR含量升高,反义株系则降低;且超量表达株系总脂质及蛋白含量升高,可溶性总糖含量降低,反义株系则出现相反结果;HMGR竞争性抑制剂洛伐他汀处理会导致胚珠发育畸形。以上结果表明,GhHMGR基因在棉花胚珠生长发育过程中扮演重要角色。

关键词：棉花 GhHMGR 胚珠 HMGR

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水稻PCR扩增模板的快速制备

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遗传 2003年第6期25卷 705-707页

作者：桑贤春何光华张毅杨正林裴炎西南农业大学农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室重庆400716

用碱处理水稻嫩叶,取碱处理水稻叶片浸出液直接用作PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确,与常规提取的DNA扩增效果相比没有显著差异。用此方法制备的模板室温下2周之内、4℃下3周之内、-20℃下4个月以上扩增结果不变。此方法所需试剂均为... 详细信息

用碱处理水稻嫩叶,取碱处理水稻叶片浸出液直接用作PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确,与常规提取的DNA扩增效果相比没有显著差异。用此方法制备的模板室温下2周之内、4℃下3周之内、-20℃下4个月以上扩增结果不变。此方法所需试剂均为常规试剂,具有需要材料少、成本低、简便、快捷等优点,尤其适合材料比较宝贵的转基因水稻的预筛选和大样本量的PCR检测,为分子标记技术的实际应用创造了条件。

关键词：水稻基因组DNA PCR模板方法

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ET-ISJ标记的开发及陆地棉遗传图谱构建

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作物学报 2011年第1期37卷 87-94页

作者：林刚张轲张建滕中华张正圣西南大学农学与生物科技学院/农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室重庆400716

根据植物结构基因外显子拼接位点的保守序列,设计扩增外显子的ET-ISJ(exon targeted intron-exon splice junction)标记引物。利用1 280对ET-ISJ引物组合,对陆地棉品种渝棉1号和T586进行多态性筛选,获得69对多态性引物组合,占引物组合的... 详细信息

根据植物结构基因外显子拼接位点的保守序列,设计扩增外显子的ET-ISJ(exon targeted intron-exon splice junction)标记引物。利用1 280对ET-ISJ引物组合,对陆地棉品种渝棉1号和T586进行多态性筛选,获得69对多态性引物组合,占引物组合的5.4%。用多态性ET-ISJ引物组合检测(渝棉1号×T586)F2:7重组近交系群体,得到70个位点。以70个ET-ISJ标记位点与523个SSR、59个IT-ISJ、29个SRAP和8个形态标记进行连锁分析,构建的遗传连锁图谱包括59个连锁群和673个位点(68个ET-ISJ、510个SSR、58个IT-ISJ、29个SRAP和8个形态标记)。连锁图覆盖3 216.7 cM,约占棉花基因组的72.3%,标记间平均距离为4.8 cM。68个ET-ISJ标记分布于20条染色体。研究表明ET-ISJ标记多态性较高、稳定性好,可有效用于棉花与其他植物遗传连锁图谱构建。

关键词：陆地棉外显子定靶内含子-外显子剪接位点标记遗传图谱

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一个具有棉花纤维细胞特异性的启动子SCFP

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科学通报 2008年第14期53卷 1650-1656页

作者：侯磊刘灏李家宝杨霞肖月华罗明宋水清杨光伟裴炎西南大学生物技术中心农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室重庆400716

为了获得棉花纤维特异启动子,克隆了棉花纤维细胞中表达基因GhSCFP的5′端上游序列,将其分别与GUS和GFP报告基因融合.在转基因烟草中,仅在种皮的最外层细胞中检测到GUS和GFP活性;在转基因陆地棉中,根、叶片、幼茎、花冠、花药和柱头中... 详细信息

为了获得棉花纤维特异启动子,克隆了棉花纤维细胞中表达基因GhSCFP的5′端上游序列,将其分别与GUS和GFP报告基因融合.在转基因烟草中,仅在种皮的最外层细胞中检测到GUS和GFP活性;在转基因陆地棉中,根、叶片、幼茎、花冠、花药和柱头中均未观察到GUS信号,而在开花当天胚珠表面突起的纤维细胞中有明显的GUS活性,直到开花后36d,纤维上仍可观察到GUS信号.本研究结果显示,SCFP启动子具有明显的棉花纤维表达特异性和植物种皮特异性,而且表达强度高.该启动子在棉花纤维发育相关基因的功能研究和棉花基因工程改良中将有重要的应用价值.

关键词：启动子纤维特异种皮特异棉花烟草

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一个水稻抽穗期主基因Hd(t)的遗传分析及分子定位

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作物学报 2007年第11期33卷 1906-1909页

作者：龚晓平杨正林赵芳明钟秉强凌英华何光华西南大学水稻研究所/农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室重庆400716

从缙恢10／1t21的杂种后代中发现了一个抽穗期稳定遗传的迟熟恢复系N91（110～114d），以早熟不育系金23A（89～94d）作为杂交和回交亲本，获得的F2和BC。F。群体抽穗期均表现双峰分布，X^2检测表明其抽穗期受一对主基因控制，暂命名为H... 详细信息

从缙恢10／1t21的杂种后代中发现了一个抽穗期稳定遗传的迟熟恢复系N91（110～114d），以早熟不育系金23A（89～94d）作为杂交和回交亲本，获得的F2和BC。F。群体抽穗期均表现双峰分布，X^2检测表明其抽穗期受一对主基因控制，暂命名为Hd（t）。在400多对SSR引物中筛选出5对在早熟基因池和迟熟基因池中表现差异的引物，进行单株验证，用回交群体进行基因定位，发现位于第7染色体长臂末端的SSR标记RM1364和RM3555与Hd（t）连锁，遗传距离分别为32．7cM和22．5cM。在目标区域进一步合成8对SSR引物，将Hd（t）基因定位在RM22143与第7染色体末端之间，与RM22143相距12．9cM。该结果为Hd（t）基因的精细定位、分子标记辅助育种和基因克隆奠定了基础。

关键词：水稻抽穗期遗传分析基因定位 SSR标记

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