检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧与兽医 2020年第3期52卷 38-44页

作者：纪晓霞李帅许濛杨博张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片... 详细信息

血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到pMD-19T载体并转到大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行蓝白斑筛选、菌液PCR、酶切验证后测序,对所得序列进行了生物信息学分析。结果:本研究明确了ACE2在白羽肉鸡体内有存在,分布表达有组织特异性,在消化系统及肾脏有较高表达。并且首次成功克隆了白羽肉鸡ACE2全基因序列,共包括2,444个核苷酸,编码808个氨基酸残基,同源性及遗传进化结果一致。该基因编码ACE2蛋白属不稳定、亲水性蛋白,蛋白信号肽序列位于第1-17aa之间,蛋白跨膜螺旋预测为I型跨膜蛋白。研究所得序列已上传GenBank(基因序列号为MK560199),为ACE2在肉鸡及禽类方面的研究提供了基础资料。

关键词：白羽肉鸡 ACE2 表达定位基因克隆生物信息学

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血管紧张素转换酶2在维持肠道稳态中的作用

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动物医学进展 2020年第2期41卷 119-123页

作者：李志强肖航张源淑南京农业大学动物医学院/农业部动物生理生化重点开放实验室

血管紧张素转换酶2(ACE2)是首先克隆出的人类血管紧张素转换酶(ACE)的同源基因,是肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键调节因子,其主要通过水解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)生成血管紧张素1-7[Ang(1-7)]从而发挥舒张血管、抗炎、抗增殖等作用。近期... 详细信息

血管紧张素转换酶2(ACE2)是首先克隆出的人类血管紧张素转换酶(ACE)的同源基因,是肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键调节因子,其主要通过水解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)生成血管紧张素1-7[Ang(1-7)]从而发挥舒张血管、抗炎、抗增殖等作用。近期研究发现,ACE2不仅对心血管和肾功能等具有明显的调控作用,对抑制肠道炎症、维持肠道稳态、保护肠道健康等同样具有积极的影响。当前对ACE2在肠道健康领域的研究较少。论文就ACE2通过影响肠道微生态对维持肠道稳态作用的研究进行综述,为发掘ACE2的新功能提供参考。

关键词：血管紧张素转换酶2 肾素-血管紧张素系统调节因子肠道稳态

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脱氢表雄酮对高脂日粮饲喂大鼠脂肪组织炎症及脂代谢的影响

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南京农业大学学报 2020年第6期43卷 1049-1055页

作者：姜志浩李龙龙姚瑶马海田南京农业大学动物医学院/农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在研究脱氢表雄酮(DHEA)对高脂日粮饲喂大鼠脂肪组织炎症以及脂质沉积的影响,为后期探讨DHEA调控机体脂代谢紊乱及其炎症反应相关机制的研究提供理论基础。[方法]采用正常日粮(ND)、高脂日粮(HFD)和高脂日粮+DHEA(HFD+DHEA... 详细信息

[目的]本文旨在研究脱氢表雄酮(DHEA)对高脂日粮饲喂大鼠脂肪组织炎症以及脂质沉积的影响,为后期探讨DHEA调控机体脂代谢紊乱及其炎症反应相关机制的研究提供理论基础。[方法]采用正常日粮(ND)、高脂日粮(HFD)和高脂日粮+DHEA(HFD+DHEA)连续饲喂雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(3组,每组10只)10周,采集大鼠不同组织部位的脂肪组织进行苏木素伊红(HE)染色,分析脂肪细胞大小,荧光定量PCR法检测脂肪代谢及炎症因子相关基因表达水平。[结果]与正常日粮组相比,高脂日粮组大鼠脂肪细胞大小极显著增加(P<0.01),脂肪组织中乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因mRNA表达水平均显著上调(P<0.05);同时肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)、肉毒碱棕榈酰转移酶2(CPT-2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)基因mRNA表达水平均显著下调(P<0.05)。与高脂日粮组相比,DHEA处理可显著抑制高脂日粮饲喂大鼠的不同组织部位脂肪细胞大小的增加(P<0.05)。与高脂日粮组相比,DHEA处理显著减少高脂日粮饲喂大鼠的脂肪合成相关因子和促炎细胞因子的表达水平,同时显著增加脂肪分解相关因子的表达水平(P<0.05)。[结论]DHEA能缓解高脂日粮诱导的脂肪组织中的炎症反应,并减少脂肪细胞中脂质的沉积。

关键词：脱氢表雄酮高脂脂肪组织炎症脂代谢

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血管紧张素转化酶2对Ang Ⅱ诱导的牛乳腺上皮细胞炎症损伤的缓解作用

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畜牧兽医学报 2019年第7期50卷 1458-1465页

作者：朱斌刘小倩刘颖纪晓霞张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症损伤,探讨血管紧张素转化酶2(ACE 2)的变化及与AngⅡ的相互作用。研究包括:ELISA检测细胞上清中细胞炎性因子的分泌或释放;Western blot检测细胞ACE 2和ACE的蛋白表达变化,... 详细信息

以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导牛乳腺上皮细胞(MAC-T)炎症损伤,探讨血管紧张素转化酶2(ACE 2)的变化及与AngⅡ的相互作用。研究包括:ELISA检测细胞上清中细胞炎性因子的分泌或释放;Western blot检测细胞ACE 2和ACE的蛋白表达变化,并进行相关性分析;添加ACE 2活性蛋白对AngⅡ诱导损伤的保护作用。结果显示:1)AngⅡ处理MAC-T,细胞上清中促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)增加,抗炎因子IL-10含量显著降低(P<0.05);2)不同浓度AngⅡ处理细胞后,ACE 2蛋白表达均有降低,10-6 mol·L^-1 AngⅡ处理后显著降低(P<0.05);ACE蛋白表达结果相反;ACE 2与AngⅡ浓度之间存在显著负相关;3)添加外源性ACE 2活性蛋白,细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-8浓度均有一定程度的下降,IL-10浓度升高。本研究表明ACE 2/ACE轴的失衡是AngⅡ诱导细胞炎性损伤的主要原因。高水平AngⅡ可激活炎症因子促进炎症反应,是促进炎症反应的主要介质,ACE 2可以通过降解AngⅡ,抑制其对炎症反应的上调效应。

关键词：血管紧张素转化酶2(ACE 2) 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 牛乳腺上皮细胞(MAC-T) 炎性反应

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利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除猪肠上皮细胞(IPEC-J2)ace2基因及其功能分析

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农业生物技术学报 2019年第4期27卷 656-665页

作者：王凯王换换刘颖纪晓霞张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

关于血管紧张素转移酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)的研究目前主要集中于啮齿类动物和人类(Homo sapiens),猪(Sus scrofa domesticus)方面的资料较少。ACE2在不同组织器官中良好的抗炎、抗损伤作用已被广泛认可,但在肠道... 详细信息

关于血管紧张素转移酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)的研究目前主要集中于啮齿类动物和人类(Homo sapiens),猪(Sus scrofa domesticus)方面的资料较少。ACE2在不同组织器官中良好的抗炎、抗损伤作用已被广泛认可,但在肠道中的作用尚不明确。本研究拟利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立猪肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cell, IPEC-J2) ace2基因敲除方法,探究ace2缺失对细胞炎性损伤的影响。首先通过Western blot和免疫荧光染色方法证实所选取的IPEC-J2细胞有ACE2蛋白表达;然后以猪ace2基因为敲除靶点,设计合成3对单导向RNA (single guide RNA, sgRNA),并插入含有Cas9骨架的pX330质粒,构建ace2基因打靶载体pX330-ace2-1、pX330-ace2-2和pX330-ace2-3。将测序正确的重组质粒pX330-ace2-2转染至IPEC-J2细胞,Western blot和免疫荧光染色结果显示ACE2蛋白表达缺失;以酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测ace2敲除细胞的炎性因子水平,结果显示,脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)处理组的促炎因子白介素(interleukin, IL)-1β和IL-8显著升高(P<0.01)、抗炎因子IL-10显著降低(P<0.05),细胞炎性损伤加剧,提示肠道ACE2具有一定的抗炎作用。本研究利用CRISPR/Cas9系统建立了靶向敲除猪肠上皮细胞ace2基因的方法,并初步探讨了ACE2在猪肠道的抗炎作用,为深入开展ACE2相关功能和作用机制研究提供了基础资料。

关键词：血管紧张素转移酶2基因(ace2) CRISPR/Cas 9 猪肠上皮细胞(IPEC-J2)

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大鼠非酒精性单纯性脂肪肝中肾素血管紧张素系统两条通路的相互作用研究

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畜牧兽医学报 2019年第11期50卷 2309-2317页

作者：刘颖王换换闫书平朱斌张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

本试验探讨了肾素血管紧张素系统(RAS)中ACE/AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang1-7/MasR两条通路在大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL)中肝损伤的相互拮抗作用。将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和用药组。除正常对照组外,其余2组饲喂高脂饲... 详细信息

本试验探讨了肾素血管紧张素系统(RAS)中ACE/AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang1-7/MasR两条通路在大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL)中肝损伤的相互拮抗作用。将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和用药组。除正常对照组外,其余2组饲喂高脂饲料,用药组另外给洛伐他汀50 mg·(kg·d)^-1,6周后采集大鼠血液并安乐死,取肝组织。测定各组大鼠血清中TG、ALT、AST的含量;测定肝组织中·OH、TNOS、SOD、T-AOC酶活性;ELISA法测定组织匀浆中AngⅡ、Ang1-7及炎症因子的含量;蛋白印迹分析肝组织ACE、ACE2、AT1R、MasR蛋白水平;HE染色观察肝组织病理学变化。结果显示:模型组肝指数显著升高(P<0.05),血清TG、AST和ALT含量极显著升高(P<0.01),肝细胞表现脂肪变性,肝组织中氧化应激、炎症因子释放显著增强;ACE、AT1R蛋白表达及AngⅡ、Ang1-7含量显著升高(P<0.05或P<0.01),ACE2与MasR的蛋白表达明显降低(P<0.05),ACE/ACE2比值极显著升高(P<0.01),用药组改善氧化应激及炎症损伤,并通过下调ACE/AngⅡ/AT1R通路改善肝组织损伤。高脂饲喂6周可诱导大鼠发生单纯性脂肪肝,肝局部RAS系统两条通路均处于激活状态,ACE/AngⅡ/AT1通路异常激活,导致肝组织氧化应激、炎症反应,而ACE2/Ang1-7/MasR通路具有与前者相反的作用。试验结果提示:肝产生的内源性ACE2在外源性刺激物诱导肝损伤时,可能通过介导Ang1-7/MasR通路的激活在非酒精性单纯性脂肪肝的预防中发挥重要作用。

关键词：肾素血管紧张素系统(RAS) 血管紧张素转化酶2(ACE2) 非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL) 肝损伤

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血管紧张素转换酶2在仔猪空肠中的分布表达及其与物质转运的关系

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畜牧兽医学报 2019年第8期50卷 1676-1684页

作者：李志强闫书平纪晓霞王凯张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

通过研究血管紧张素转换酶2(ACE2)与中性氨基酸转运载体B^0AT1和葡萄糖转运载体SGLT-1、GLUT-2在不同日龄仔猪肠道中的分布表达,探讨其相互关系。以断奶仔猪为研究对象,分别取21、35日龄仔猪空肠中段组织,采用免疫组化、Western blot和R... 详细信息

通过研究血管紧张素转换酶2(ACE2)与中性氨基酸转运载体B^0AT1和葡萄糖转运载体SGLT-1、GLUT-2在不同日龄仔猪肠道中的分布表达,探讨其相互关系。以断奶仔猪为研究对象,分别取21、35日龄仔猪空肠中段组织,采用免疫组化、Western blot和RT-qPCR、HPLC等方法,明确ACE2在仔猪空肠中的分布表达,以及B^0AT1及SGLT-1和GLUT-2的mRNA在不同日龄仔猪空肠组织中表达,并通过检测血浆中游离氨基酸的种类和含量,分析各指标之间的关系。结果表明,ACE2主要分布在小肠皱襞和绒毛处,空肠上皮细胞的刷状缘、浆膜层和肌层均有ACE2的显著表达;随着仔猪日龄的增加,ACE2与B^0AT1、SGLT-1的mRNA表达量及血液中性氨基酸的含量均随之上升,GLUT-2的mRNA表达量无明显变化。结果提示,仔猪空肠中有ACE2存在,且ACE2与肠道氨基酸等物质的转运有关,这为挖掘ACE2的新功能提供了理论依据。

关键词：血管紧张素转换酶2 中性氨基酸转运载体葡萄糖转运载体断奶仔猪物质转运

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单子叶作物叶片气孔自动识别与计数技术

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农业工程学报 2019年第23期35卷 170-176页

作者：孙壮壮姜东蔡剑王笑周琴黄梅戴廷波曹卫星南京农业大学农业部小麦区域技术创新中心农业部南方作物生理生态重点开放实验室

为实现作物叶片气孔的自动识别与快速计数,该研究采用卷积神经网络中高计算效率的YOLOv3算法,开发了一种全自动气孔识别和计数解决方案。该算法优化了物体检测性能,可准确识别显微图像中的气孔。其中,对指甲油印迹法获得照片的气孔检测... 详细信息

为实现作物叶片气孔的自动识别与快速计数,该研究采用卷积神经网络中高计算效率的YOLOv3算法,开发了一种全自动气孔识别和计数解决方案。该算法优化了物体检测性能,可准确识别显微图像中的气孔。其中,对指甲油印迹法获得照片的气孔检测精确率、召回率和F1值分别为0.96,0.98和0.97,便携式显微镜拍摄法照片气孔检测精确率、召回率和F1值分别为0.95,0.98和0.96,具有很好的鲁棒性。该算法检测速度快,可实现对30帧/s的视频文件进行快速气孔识别,实现了实时检测。此外,采用拍摄的小麦叶片照片进行训练得到的气孔识别模型,还可同时实现对大麦、水稻和玉米等单子叶作物叶片气孔的识别,其中,大麦的检测精确率、召回率和F1值分别为0.94,0.83和0.88;水稻的检测精确率、召回率和F1值分别为0.89,0.42和0.57;玉米的检测精确率、召回率和F1值分别为0.91、0.76和0.83;显示出模型良好的泛化能力。

关键词：卷积神经网络机器视觉模型单子叶作物气孔识别计数深度学习实时检测

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灵芝孢子粉对小鼠抗疲劳作用及生化机制初探

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营养学报 2019年第2期41卷 173-177页

作者：王换换申正杰肖航刘小倩张源淑南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

目的观察灵芝孢子粉对小鼠的抗疲劳作用并探讨其生化机制。方法 80只SPF级ICR小白鼠,按体质量随机分为对照组和灵芝孢子粉高剂量(500mg/kg)、中剂量(300mg/kg)、低剂量(100mg/kg)实验组,每组20只,雌雄各半。根据小鼠体质量和实验设计的... 详细信息

目的观察灵芝孢子粉对小鼠的抗疲劳作用并探讨其生化机制。方法 80只SPF级ICR小白鼠,按体质量随机分为对照组和灵芝孢子粉高剂量(500mg/kg)、中剂量(300mg/kg)、低剂量(100mg/kg)实验组,每组20只,雌雄各半。根据小鼠体质量和实验设计的剂量,每只小鼠按0.2 ml/10g的灌胃量于每天上午灌胃灵芝孢子粉溶液一次。实验周期为30d。末次灌胃30 min后,小鼠在30℃的温水浴中进行负重游泳实验;剖杀后采集小鼠肝脏和后腿肌肉组织,检测肝糖原和肌糖原含量,同时采集小鼠血清,检测血清中葡萄糖、尿素氮含量和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)等酶活性。结果灌胃不同剂量灵芝孢子粉30d后,各组小鼠的游泳时间明显长于对照组,高剂量组雌、雄鼠差异显著(5.53±1.44、16.90±5.98和10.65±1.26、20.61±3.31),分别提高了205.6%和93.5%;与对照组相比,三个剂量组小鼠肝糖原含量均显著升高(P<0.01);雌性小鼠肌糖原含量较对照组略有降低,雄性小鼠肌糖原含量较对照组略有升高,但各组间差异均不显著(P>0.05)。各剂量组小鼠血糖含量都高于对照组,且对照组与高剂量组差异显著(1.43±0.03、2.94±0.11,1.78±0.04、2.75±0.07,P<0.05);各剂量组小鼠血清尿素氮含量低于对照组。灌胃灵芝孢子粉各剂量组雌鼠血清中AKP活性均低于对照组,且在高剂量组显著或极显著降低(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,各剂量组小鼠血清LDH活性显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。结论灌胃灵芝孢子粉可以延长小鼠游泳时间,提高小鼠抗疲劳能力。其生化特点表现在:一方面通过增加小鼠肝脏和肌肉中糖原的积累,提高了小鼠的能量储备;另一方面通过减缓尿素氮的累积和血糖水平的下降,使机体对负荷的适应性增强。

关键词：灵芝孢子粉小鼠游泳抗疲劳作用

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猪血管紧张素转化酶2重组蛋白诱导表达和纯化条件的优化

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南京农业大学学报 2019年第2期42卷 316-321页

作者：肖航王换换王凯张源淑南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法。[方法]将已构建好的猪重组表达载体p ET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,... 详细信息

[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法。[方法]将已构建好的猪重组表达载体p ET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,实现目的蛋白高效表达后选用Ni^(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法,对获得的重组猪p ET-32aACE2融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE和免疫印迹等分析鉴定表达产物。[结果]当IPTG浓度为1 mmol·m L-1、诱导时间为10 h时,ACE2蛋白在BL21(DE3)中表达量最高,以包涵体形式存在。表达产物的相对分子质量约为100×103,与预期目的蛋白大小相符。选用的Ni^(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法纯化重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体,均能得到可溶性的重组蛋白,但KCl染色切胶法纯化获得的可溶性重组蛋白浓度及纯度都更佳,纯化蛋白经Western blot鉴定具有良好的抗原性。[结论]本试验建立猪p ET-32a-ACE2重组蛋白诱导表达的最佳条件:IPTG浓度1 mmol·m L-1,诱导时间为10 h。并且以KCl染色切胶法纯化该重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体效果更好。

关键词： ACE2重组蛋白包涵体 KCl染色切胶 Ni^2+-NTA亲和层析

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