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HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响

中国兽医科学 2024年第6期54卷 711-717页

作者：傅彦贇石磊杨星竹胡娇胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS... 详细信息

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响,本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变,用反向遗传学技术拯救重组NDV,评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示,表达HAS227N的重组NDV的毒力弱(MDT>120 h),在鸡胚中的病毒效价高(HA效价:512;EID_(50):10^(9.3)/m L),复制性能较强,这些生物学特征与载体病毒及表达野生型HA蛋白的重组NDV相似。S227N突变不影响HA蛋白在重组NDV感染细胞中的表达。此外,表达HAS227N与野生型HA蛋白的重组NDV均能诱导产生较高的抗NDV血凝抑制(HI)抗体;HA蛋白S227N突变能够提高重组NDV免疫鸡的血清转化率,却不能显著提升针对H7N9的HI抗体效价。上述结果表明,HA蛋白S227N突变对基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗的免疫原性没有显著的增强作用。本研究对H7N9亚型禽流感疫苗的设计、优化与效力评估有参考意义。

关键词： H7N9亚型禽流感病毒疫苗新城疫病毒载体 HA蛋白 S227N突变免疫原性

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干扰素刺激基因15(ISG15)在天然免疫中的抗病毒作用研究进展

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中国免疫学杂志 2022年第2期38卷 253-256,F0003,F0004页

作者：嵇祝星王晓泉刘晓文刘秀梵(指导) 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225000

干扰素刺激基因15(ISG15)是干扰素刺激下产生的最丰富的产物,也是宿主对病毒感染应答环节中的重要环节。距离ISG15第一次被报道已有42年,越来越多研究揭示了其蛋白复杂和多变的性质,除可对细胞内多种蛋白进行修饰外,也可作为细胞因子分... 详细信息

干扰素刺激基因15(ISG15)是干扰素刺激下产生的最丰富的产物,也是宿主对病毒感染应答环节中的重要环节。距离ISG15第一次被报道已有42年,越来越多研究揭示了其蛋白复杂和多变的性质,除可对细胞内多种蛋白进行修饰外,也可作为细胞因子分泌至细胞外。ISG15存在物种间作用差异。本文介绍ISG15在天然免疫中的抗病毒功能及其发挥这一功能的不同机制,并阐述其研究进展。

关键词： ISG15 抗病毒感染 ISG化修饰天然免疫

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新型重组H10N3亚型禽流感病毒对公共卫生安全的威胁

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病毒学报 2022年第4期38卷 958-964页

作者：刘开拓高如一王晓泉刘秀梵扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自... 详细信息

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在历史上发生过多次跨种间感染人的事件,对公共卫生安全造成严重威胁。2021年6月1日我国通报了全球首例人感染H10N3事件,引发广泛关注。此次引发人感染的H10N3为新型重组病毒,HA和NA基因分别来自于H10N8和H7N3,内部基因全部来源于S基因型H9N2。在我国活禽市场同样分离到多株和人源毒株高度同源的禽源H10N3病毒,表明在发生人感染事件之前H10N3已在我国家禽中流行。新型重组H10N3病毒对鸡为低致病性,通过泄殖腔排毒,仅可通过直接接触方式在鸡群中有限传播;具备双受体结合特性,可通过气溶胶途径在豚鼠中高效传播,引发小鼠致死性感染。新型重组H10N3病毒的生物学特性表明其对公共卫生安全造成较大威胁,需重点关注。

关键词：禽流感病毒 H10N3 H9N2 公共卫生安全

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甲型流感病毒所致宿主细胞因子风暴的研究进展

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 338-343页

作者：嵇祝星刘晓文王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225000 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225000

甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是有囊膜的正粘病毒科成员,其基因组包含8个节段的单股负链RNA。IAV是人呼吸道感染的重要病原,可以导致季节性的流行和大流行。回顾历史,共发生了4次流感大流行,分别是1918年H1N1、1957年H2N2、196... 详细信息

甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)是有囊膜的正粘病毒科成员,其基因组包含8个节段的单股负链RNA。IAV是人呼吸道感染的重要病原,可以导致季节性的流行和大流行。回顾历史,共发生了4次流感大流行,分别是1918年H1N1、1957年H2N2、1968年的H3N2以及2009年的H1N1流感大流行。至今,全球每年有10亿左右人口会感染流感病毒,有294000~518000人死于季节性流感,给人类健康及公共卫生安全带来巨大的威胁。

关键词：甲型流感病毒正粘病毒科呼吸道感染 H1N1 H3N2 公共卫生安全流感大流行

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一株针对H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白茎部的单克隆抗体的表征

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生物工程学报 2022年第1期38卷 160-173页

作者：赵江艳朱颜笑胡娇胡增垒刘秀梵扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室江苏扬州225009

流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究... 详细信息

流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究测定了5D3-1B5的抗体效价(IgG、血凝抑制与病毒中和滴度),鉴定了抗体识别的抗原表位与编码基因的序列及结构,并评价了抗体与不同亚型流感病毒的交叉反应性。结果显示,5D3-1B5不具有针对H7N9病毒的血凝抑制与病毒中和活性,但是与HA蛋白的反应性较强;基于多肽的酶联免疫吸附试验与噬菌体表面展示随机多肽文库筛选的方法,鉴定了5D3-1B5识别的表位是位于HA茎部C螺旋区的^(431)W-^(433)Y-^(437)L基序,且含有该表位突变的重组H7N9病毒失去了与抗体的反应性;测定了抗体可变区的基因序列并定位了轻链与重链可变区的互补决定区;抗体可变区的结构模拟与分子对接则验证了抗体与HA蛋白茎部C螺旋区的结合;值得注意的是,5D3-1B5与group 1和2不同亚型的流感病毒具有广谱反应性。因此,5D3-1B5具有作为流感病毒广谱检测与抗体治疗制剂的应用潜力,研究结果也为认识H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的抗原表位特征提供了新的信息。

关键词：禽流感病毒血凝素蛋白茎部单克隆抗体抗原表位交叉反应性

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稳定表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的293T细胞株构建及应用

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中国家禽 2023年第10期45卷 59-64页

作者：曹永忠邓婧黄雅薄宗义胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学农业农村部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(AD... 详细信息

为获得用于评价H7N9亚型禽流感疫苗诱导的抗体Fc免疫效应的靶细胞,研究采用慢病毒包装与感染技术构建一株稳定表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)HA蛋白的细胞株,并以该细胞株为靶细胞建立H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清补体介导的细胞毒(ADCML)活性的检测方法。结果显示成功包装了一株重组慢病毒,滴度可达108 FU/mL;构建了稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的293T细胞株,HA蛋白主要在细胞膜上表达。基于新城疫病毒(NDV)载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡后,诱导产生的HA结合性IgG抗体滴度为2180。以稳定细胞株为靶细胞,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著高于空载体与未免疫鸡血清(P<0.001);补体灭活后,载体疫苗血清诱导的细胞死亡水平显著降低(P<0.001)。研究表明,基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫鸡血清具有较强的ADCML活性,稳定表达H7N9 AIV HA蛋白的细胞株可作为评价H7N9亚型禽流感疫苗免疫血清Fc免疫效应的靶细胞。

关键词： H7N9亚型禽流感 HA蛋白稳定细胞株疫苗 Fc免疫效应补体抗体保护

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HA蛋白位点变异影响H7N9亚型流感病毒特性的研究进展

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畜牧兽医学报 2021年第8期52卷 2093-2106页

作者：严雅瑶顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

2013年春,我国首次出现人感染H7N9亚型禽流感疫情,对家禽养殖和公众健康均产生了严重危害,并且在第5波流行期又演变出血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点处存在插入突变的高致病性禽流感病毒株。HA作为A型流感病毒表面表达丰度最高... 详细信息

2013年春,我国首次出现人感染H7N9亚型禽流感疫情,对家禽养殖和公众健康均产生了严重危害,并且在第5波流行期又演变出血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白裂解位点处存在插入突变的高致病性禽流感病毒株。HA作为A型流感病毒表面表达丰度最高的糖蛋白,在介导病毒与宿主细胞表面受体的结合、促进病毒囊膜与细胞膜的融合、刺激机体产生中和抗体等方面具有至关重要的作用。本文围绕H7N9病毒,简要综述了HA蛋白的结构与功能,及其关键功能氨基酸位点变异影响病毒生物学特性的研究进展,以期为深入解析HA蛋白在H7N9病毒感染致病中的作用提供重要参考。

关键词：流感病毒 H7N9 HA蛋白功能氨基酸位点感染与致病

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携带89K样毒力岛的猪链球菌ST665型与ST107型临床菌株的基因组及致病分析

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疾病监测 2024年第5期39卷 622-628页

作者：康娓铭王鸣柳王建平张西燕吴宗福郑翰中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 广西壮族自治区疾病预防控制中心广西南宁530028 南京农业大学动物医学院农业部动物细菌学重点实验室江苏南京210095

目的明确89K样毒力岛(PAI)的基因组特征及其在猪链球菌致病及耐药传播方面的作用。方法通过生物信息学方法分析89K样PAIs的基因组特征;通过接合实验比较两种89K样PAIs的转移能力;采用最小抑菌浓度法测定临床分离株及接合子的耐药谱;通过... 详细信息

目的明确89K样毒力岛(PAI)的基因组特征及其在猪链球菌致病及耐药传播方面的作用。方法通过生物信息学方法分析89K样PAIs的基因组特征;通过接合实验比较两种89K样PAIs的转移能力;采用最小抑菌浓度法测定临床分离株及接合子的耐药谱;通过C57BL/6小鼠和斑马鱼感染模型分别评估两个临床菌株及其89K样PAIs的接合子的致病性。结果携带89K样PAIs的猪链球菌临床菌株GX54和GX82的序列型(ST)分别为ST665和ST107。菌株GX54携带的PAI大小为75Kb,在核苷酸水平上与ST7流行型菌株携带的89K PAI具有99.21%的相似性和79.00%的覆盖率,而菌株GX82携带的PAI大小为87Kb,与89K PAI具有98.80%的相似性和86.00%的覆盖率。这两个PAIs的插入位点与89K PAI相同,均位于rplL位点,且PAIs的两端均含有一段15 bp的att序列(5’-TTATTTAAGAGTAAC-3’)。此外,这两个PAIs均具有完整的模块化结构,包含完整的NisK-NisR样双组分信号转导系统和IV型分泌系统(T4SS)。而在SalR-SalK样双组分信号转导系统中,仅SalR基因保持完整,SalK基因发生错义突变。与89K PAI相比,本研究中的两个PAIs在基因组成上呈现出一定的差异。75K PAI插入了4个基因,包括两个假定蛋白基因和两个耐药基因tet(O)和erm(B)。而87K PAI则插入了12个基因,主要涉及编码与质粒相关的重组酶和假基因,以及与耐药相关的cat、tet(L)、erm(B)基因。此外,还包括编码转座酶、拓扑异构酶等基因。菌株GX54携带的75K PAI的转移频率为4.61×10−5,显著高于菌株GX82携带的87K PAI的转移频率8.46×10^(−6)。与受体菌P1/7RIF相比,两个89K样PAIs的接合子P1/7RIF-GX54与P1/7RIF-GX82的四环素类和大环内酯类抗生素的抗性水平,以及对斑马鱼的致病力均显著增加,且两接合子组间的致病力差异无统计学意义(P>0.05)。菌株GX54和菌株GX82感染C57BL/6小鼠后,菌株GX54感染组小鼠死亡率显著高于菌株GX82感染组(P<0.05)。攻毒8 h后,两感染组小鼠的外周血细菌载量无统计学意义(P>0.05),但菌株GX54感染组小鼠血清中的TNF-α水平显著高于菌株GX82感染组小鼠(P<0.05),而IL-6水平在两感染组间无统计学意义(P>0.05)。sly、mrp、epf,ofs,revS,nadR,SSU05_0473,neuB及neuC等在高致病型猪链球菌中常见的毒力基因在GX54与GX82也存在。结论本研究首次发现了猪链球菌ST665和ST107型临床菌株携带可移动的89K样PAIs。携带不同89K样PAIs的菌株毒力水平具有显著差异,该差异与菌株在感染早期诱导宿主产生TNF-α的水平密切相关,且并非由外周血中的细菌载量差异所引起。仅以包括89K样PAIs在内的已知毒力基因存在与否做为判断猪链球菌毒力水平的方法存在不足。

关键词：猪链球菌 89K样毒力岛接合耐药性致病

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A型流感病毒M基因的研究进展

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中国兽医学报 2021年第8期41卷 1639-1644页

作者：乔树苗顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

M基因是A型流感病毒基因组的第7个节段,全长1027个碱基,进化上可被划分为7个特有宿主谱系:人谱系Hu1、Hu2,禽谱系Av1、Av2,猪谱系Sw1、Sw2和犬/马谱系CE。M基因主要编码基质蛋白M1和离子通道蛋白M2,这2种结构蛋白在A型流感病毒的生命周... 详细信息

M基因是A型流感病毒基因组的第7个节段,全长1027个碱基,进化上可被划分为7个特有宿主谱系:人谱系Hu1、Hu2,禽谱系Av1、Av2,猪谱系Sw1、Sw2和犬/马谱系CE。M基因主要编码基质蛋白M1和离子通道蛋白M2,这2种结构蛋白在A型流感病毒的生命周期中具备多种功能。现简要综述A型流感病毒M基因的遗传进化特点以及M1和M2蛋白的结构与功能,以期为A型流感病毒的相关机制研究提供参考。

关键词： A型流感病毒 M基因遗传进化基质蛋白离子通道

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禽流感病毒感染鸽的流行病学与致病机理研究进展

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病毒学报 2021年第2期37卷 483-493页

作者：刘开拓高如一王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 江苏省人畜共患病重点实验室扬州225009

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)不仅严重危害禽类,而且对人类生命健康造成严重威胁。鸽作为留鸟,具有作为AIV从野生鸟类传播至人类中间宿主的潜能。鸽对AIV的易感性以及在病毒传播中的作用却存在争议。通过分析AIV自然感染、人... 详细信息

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)不仅严重危害禽类,而且对人类生命健康造成严重威胁。鸽作为留鸟,具有作为AIV从野生鸟类传播至人类中间宿主的潜能。鸽对AIV的易感性以及在病毒传播中的作用却存在争议。通过分析AIV自然感染、人工感染鸽的流行病学以及实验研究数据,同时回顾了禽流感病毒感染鸽的机制,发现随着病毒的进化和时间的推移,鸽群AIV的感染率也在递增;尤其随着近年具有双受体结合特性的高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)clade2.3.4.4分支H5Nx毒株的出现,其感染鸽后排毒量上升以及鸽体间直接接触传播能力增强。为了有效防控AIV的跨种间传播,有必要加强对鸽感染AIV的流行病学监测和传播特性的研究,特别需要密切关注具双受体结合特性的H5Nx和H7N9 HPAIV对鸽易感性的发展趋势。

关键词：禽流感病毒鸽流行病学致病性

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