检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2016年第12期38卷 51-55页

作者：罗宇宏陈强阮涌主性段志强胡顺林刘秀梵贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州贵阳550025 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

对从贵州省某三穗鸭养殖场病死鸭体内分离的1株新城疫病毒(NDV)Sheldrakeduck/China/Guizhou/SS1/2014(简称SS1株)进行部分生物学特性测定及全基因测序与分析。结果表明:SS1株的MDT、ICPI和IVPI分别为52 h、1.89和2.80,F基因编码蛋白的... 详细信息

对从贵州省某三穗鸭养殖场病死鸭体内分离的1株新城疫病毒(NDV)Sheldrakeduck/China/Guizhou/SS1/2014(简称SS1株)进行部分生物学特性测定及全基因测序与分析。结果表明:SS1株的MDT、ICPI和IVPI分别为52 h、1.89和2.80,F基因编码蛋白的裂解位点序列为^(112)R-R-Q-K-R-F^(117),HN基因编码571个氨基酸,均符合NDV强毒株特征;SS1株基因组全长为15 192 bp,各基因片段核苷酸序列与代表性基因Ⅶ型毒株ZJ1、NA-1、SF02和FP1/02相似性最高,达96.3%~98.7%,而与疫苗株V4、La Sota和Mukteswar同源性最低,为82.8%~85.4%;根据F基因序列绘制的系统进化树显示SS1株属于ClassⅡ基因Ⅶd亚型。F和HN蛋白氨基酸序列分析发现,SS1株F蛋白中和抗原位点第170位氨基酸、HN蛋白抗原区及其邻近氨基酸位点与国内当前流行的基因Ⅶd亚型NDV毒株一致,而与疫苗株有较大的差异。此外,交叉血凝抑制试验结果表明,SS1株与传统疫苗株La Sota的抗原同源性为84.5%,而与新型基因Ⅶ型疫苗株A-Ⅶ的抗原同源性为100%,表明分离株与疫苗株存在一定的抗原差异。

关键词：三穗鸭新城疫病毒全基因测序遗传进化

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Ⅰ类新城疫病毒新的基因分型系统的建立

Ⅰ类新城疫病毒新的基因分型系统的建立

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中国畜牧兽医学会2016年学术年会暨中国畜牧兽医学会禽病学分会第十八次学术研讨会

作者：刘晶晶朱杰许海旭程昊王晓泉胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

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KPNB1和Ran蛋白共同介导新城疫病毒基质蛋白的入核转运

KPNB1和Ran蛋白共同介导新城疫病毒基质蛋白的入核转运

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中国畜牧兽医学会2016年学术年会、中国畜牧兽医学会禽病学分会第十八次学术研讨会

作者：段志强周迪嵇辛勤许厚强赵佳福许海旭胡顺林刘秀梵贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix protein,M)具有明显的细胞核定位特征,但是与NDVM蛋白入核相关的细胞蛋白尚未见报道。本研究旨在鉴定参与NDVM蛋白入核的细胞蛋白,以阐明M蛋白细胞核定位的分子机制。从鸡胚成... 详细信息

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix protein,M)具有明显的细胞核定位特征,但是与NDVM蛋白入核相关的细胞蛋白尚未见报道。本研究旨在鉴定参与NDVM蛋白入核的细胞蛋白,以阐明M蛋白细胞核定位的分子机制。从鸡胚成纤维细胞中分别克隆核转运受体蛋白KPNA1～KPNA6和KPNB1基因,将其构建到真核表达载体,并与表达NDV M蛋白的重组真核表达载体分别共转染HEK-293T细胞,通过免疫共沉淀方法鉴定与NDV M蛋白相互作用的核转运受体蛋白。

关键词：入核转运细胞核定位 KPNB1 Ran 新城疫病毒基质蛋白

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贵州省鸭源新城疫病毒强毒株的遗传变异分析及致病性研究

贵州省鸭源新城疫病毒强毒株的遗传变异分析及致病性研究

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中国畜牧兽医学会2016年学术年会、中国畜牧兽医学会禽病学分会第十八次学术研讨会

作者：段志强许厚强嵇辛勤陈强胡焱胡顺林刘秀梵贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

为了科学理解家鸭在新城疫病毒(NDV)流行和传播中的作用,对贵州不同地区分离的5株鸭源NDV强毒株进行遗传变异分析以及对鸭和SPF鸡的致病性研究。结果显示:5株NDV分离株均属于基因Ⅶd亚型,其F蛋白裂解位点基序均为112RRQKRF117,符合强毒... 详细信息

为了科学理解家鸭在新城疫病毒(NDV)流行和传播中的作用,对贵州不同地区分离的5株鸭源NDV强毒株进行遗传变异分析以及对鸭和SPF鸡的致病性研究。结果显示:5株NDV分离株均属于基因Ⅶd亚型,其F蛋白裂解位点基序均为112RRQKRF117,符合强毒株序列特征,与病毒致病性指数测定结果相符;F和HN蛋白中功能性氨基酸位点均高度保守,但在HN蛋白线性表位区有3株发生E347K突变。交叉血凝抑制试验发现分离株与传统疫苗株LaSota的抗原同源性较低为83.3%～87.0%,而与新型基因Ⅶ型疫苗株A-Ⅶ的抗原同源性较高为93.5%～100%。将5株NDV分离株以0.5mL病毒尿囊液原液通过肌肉注射感染鸭后未见明显发病死亡和病理变化,

关键词：鸭源新城疫病毒强毒株变异分析

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一株鸭源H4N8亚型禽流感病毒的全基因测序及遗传进化分析

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中国农业科学 2015年第15期48卷 3040-3049页

作者：赵晴晴李群辉朱杰钟蕾刘晶晶顾敏王晓泉刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【目的】禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)根据其表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸(neuraminidase,NA)的不同,可分为16种HA和9种NA亚型。根据其致病力的差异可分为高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)和低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza virus,LPAIV)。虽然H4亚型禽流感病毒为低致病性AIV,感染家禽表现为无症状感染,但其对禽类甚至是哺乳动物是一个潜在的威胁,因此必须要加强对H4亚型禽流感病毒的调查监控。【方法】为了探讨H4亚型禽流感病毒的分子特征及遗传演化规律,对2010年在中国华东地区某活禽市场进行流行病学监测时分离到的一株H4N8亚型禽流感病毒A/duck/Nanjing/1102/2010(简称DK/NJ/1102)进行了全基因组序列测定及遗传进化分析。通过常规的血清学试验确定其HA亚型,提取病毒总RNA,并通过RT-PCR方法分别扩增出其各基因片段,连接p GEM-Teasy载体上后进行序列测定。利用Gen Bank中的BLAST工具进行核苷酸序列的同源性分析,并与Gene Bank中的H4亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。【结果】DK/NJ/1102的HA基因与Mongolia分离株A/duck/Mongolia/274/2007(H4N3)的核苷酸同源性最高,为98.9%。推导的氨基酸剪切位点序列为"P-E-K-A-S-R-G",符合典型的低致病性禽流感病毒特征;NA基因与华东地区分离的鸭源毒株A/Duck/Eastern China/n91/2009(H3N8)核苷酸同源性最高,达99.4%;PB1、PA和NP基因均与H1亚型禽流感病毒亲缘关系最近;M基因与A/wild duck/Korea/CSM4-12/2009(H5N1)核苷酸同源性最高,高达99.9%;NS基因与韩国2009年分离的H7N7亚型流感病毒遗传距离最近。NS1蛋白的80-84处氨基酸没有发生氨基酸缺失。【结论】该H4N8亚型禽流感病毒基因组构成比较复杂,可能是一株多基因重组病毒。

关键词：禽流感病毒 H4N8亚型遗传进化分析重组

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TUFM在中强毒力NDV感染的CEF细胞中表达水平分析

TUFM在中强毒力NDV感染的CEF细胞中表达水平分析

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会

作者：吴双朱善元刘秀梵江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室泰州225300 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为研究线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu (TUFM)在中强毒力新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达水平的变化,本研究运用比较蛋白质组研究方法分析感染了NDV的CEF的差异表达的蛋白点.将基因Ⅲ型鸡源NDV JS-7-05-Ch、基因Ⅶd亚型鹅... 详细信息

为研究线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu (TUFM)在中强毒力新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达水平的变化,本研究运用比较蛋白质组研究方法分析感染了NDV的CEF的差异表达的蛋白点.将基因Ⅲ型鸡源NDV JS-7-05-Ch、基因Ⅶd亚型鹅源NDV JS-5-05-Go和基因Ⅵb亚型鸽源NDV WX-10-07-Pi三株NDV分别按照10感染复数(MOI)的量接种于密度为85％～90％ CEF中,同时设立接种PBS的阴性对照组.接种病毒后24h和48h时收获细胞团块,采用细胞裂解液结合超声波裂解方法对CEF进行总蛋白提取,运用96孔Bradford微量酶标板法测定总蛋白浓度基本保持在4.0～5.5 mg/mL范围内.采用17cm pH4-7线性IPG胶条,分别取1.0 mg的不同样品的细胞总蛋白加入水化液中至终体积350μl,进行胶条主动水化和等电聚焦,平衡液Ⅰ和Ⅱ分别平衡14min后,胶条转移至12％浓度的SDS-PAGE凝胶上进行第二向电泳后采用胶体考染方法染色,透射扫描脱色后的凝胶,获得的凝胶图谱运用PDQuest8.0.1软件进行图像分析.CEF总蛋白双向电泳图谱中检测到约850个蛋白点,批内蛋白点在重复样品的匹配率能达到90％以上.量的差异显著性分析采用Student's-Test检验法进行统计学分析,在排除一些细胞周期蛋白的基础上,只有三个样本中均重复出现的差异点才可被鉴定是差异表达蛋白质.将表达水平差异显著的蛋白质点胶内酶解后采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS)分析蛋白点.质谱鉴定数据来源于Matrix science公司的Mascot软件搜索的NCBInr数据库.双向凝胶图中标注的差异表达的一种蛋白点经质谱鉴定为TUFM.与24h的阴性对照组相比,在三株NDV感染CEF后24h时,TUFM表达水平均上调,TUFM表达量在毒力最弱的WX-10-07-Pi感染组中显著升高;与48h的阴性对照组相比,感染后48h时TUFM表达量在毒力最强的JS-5-05-Go感染组表达量不降反升且极显著增加,其余两株病毒感染组中TUFM表达量无明显差异且与阴性对照组具有一致的变化趋势.毒力最强的JS-5-05-Go引起宿主表达TUFM量随感染时间增加逐渐增强.该结果表明TUFM的表达水平与NDV毒力强弱具有一定相关性.

关键词：线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu 新城疫病毒表达水平不同毒力

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流感病毒气源性传播研究进展

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中国家禽 2015年第13期37卷 43-49页

作者：江恺骏钟蕾王晓泉刘晓文刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式。流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用。外界环境的改变会... 详细信息

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式。流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用。外界环境的改变会直接影响病毒气溶胶颗粒形成的数量和大小,进而影响传播效率。目前,经过长期的筛选和比较,将豚鼠和雪貂作为研究流感气源性传播的模式动物,根据不同目的或者单独使用或者协同实验。文章通过对病毒本身的生物学特性以及外界环境对气源性传播产生的影响进行了初步总结,对进行气源性传播的实验动物给出了综合评价,一方面为研究者提供较为全面的总结,另一方面为防治流感提供依据。

关键词：流感病毒气源性传播生物学特性动物模型环境因素

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采用反向遗传学技术构建clade7..2 H5N2亚型禽流感病毒高产疫苗株

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中国家禽 2015年第3期37卷 13-17页

作者：孙中涛王萱李群辉高照王晓泉刘秀梵刘晓文扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为构建H5N2亚型禽流感病毒(AIV)高产疫苗株,研究采用反向遗传操作技术删除Clade 7.2 H5N2亚型AIV A/chicken/Shanxi/Q6/2013(wt-Q6株)血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,以wt-Q6株HA和神经氨酸酶基因为供体,结合A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV的6个内部片段骨架,构建针对此种变异的H5亚型AIV疫苗株,成功拯救出一株重组病毒r Q6/PR8。该病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖滴度,对SPF鸡胚和鸡无致病性,具有低毒高产的特性,符合疫苗候选株的标准。

关键词： H5 clade 7.2 禽流感病毒反向遗传学

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我国H9N2亚型禽流感病毒的流行和进化特点

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生命科学 2015年第5期27卷 531-538页

作者：顾敏彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)于1966年从北美的火鸡群中首次被分离以来。自20世纪90年代以来,H9N2病毒已经在世界多个国家和地区发展成地方流行并形成了稳定的种系,是当前禽流感流行的主要亚型之一,严重危害养禽业的发展。此外,H9N2亚型AIV... 详细信息

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)于1966年从北美的火鸡群中首次被分离以来。自20世纪90年代以来,H9N2病毒已经在世界多个国家和地区发展成地方流行并形成了稳定的种系,是当前禽流感流行的主要亚型之一,严重危害养禽业的发展。此外,H9N2亚型AIV也可以感染猪,甚至能够直接感染人,具有重要的公共卫生意义。H9N2亚型AIV还可以为H5N1、H7N9以及H10N8等能够直接感染人并致死的AIV提供部分甚至整套内部基因,潜在危害备受关注。对H9N2亚型AIV在我国的流行和进化特点进行了简要综述。

关键词： H9N2 地方流行遗传进化内部基因基因型

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2011～2014年安徽省发病鸡群H9亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析

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中国动物传染病学报 2015年第5期23卷 21-26页

作者：胡晓苗胡顺林陈鸿志刘东戴银沈学怀刘秀梵张丹俊扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 安徽农业科学院畜牧兽医研究所合肥230031

为了解安徽省发病鸡群H9N2亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus,AIV）的变异情况,本研究对2011～2014年安徽省发病鸡群的368份组织样品进行AIV的鸡胚分离和RT-PCR检测,分离鉴定到17株H9N2 AIV。对这17株进行HA基因测序及系统进化分... 详细信息

为了解安徽省发病鸡群H9N2亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus,AIV）的变异情况,本研究对2011～2014年安徽省发病鸡群的368份组织样品进行AIV的鸡胚分离和RT-PCR检测,分离鉴定到17株H9N2 AIV。对这17株进行HA基因测序及系统进化分析,结果表明：17株HA基因核苷酸序列的相似性为88.5%～99.6%,属于A/Duck/Hong Kong/Y280/1997病毒亚系。氨基酸比对分析显示,裂解位点326～329位氨基酸为典型的低致病性AIV特征性序列。与A/Chicken/Shanghai/F/98疫苗株相比,17株HA蛋白受体结合位点的226位均为亮氨酸（L）,呈现了人流感受体结合特性;5株200位的点突变（T→I）,导致了200位潜在糖基化位点的缺失。可见安徽省分离的H9N2 AIV大部分毒株基因序列已发生变异,目前使用的疫苗能否为禽群提供足够的保护力还需要作进一步的研究。

关键词：禽流感 H9N2亚型 HA基因遗传进化鸡

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