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第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：许海旭段志强刘佳佳程欣朱杰刘晶晶胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

前言新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是一类重要的禽病病原,能够在全世界范围内引起养禽业的损失。M蛋白是六种编码蛋白中分子量最小但含量最丰富的蛋白。其分子量约为40kDa,编码364个氨基酸,是一种高度保守的疏水性蛋白。M... 详细信息

前言新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）是一类重要的禽病病原,能够在全世界范围内引起养禽业的损失。M蛋白是六种编码蛋白中分子量最小但含量最丰富的蛋白。其分子量约为40kDa,编码364个氨基酸,是一种高度保守的疏水性蛋白。M蛋白主要介导病毒粒子的装配与出芽。研究报道,M蛋白在病毒感染后期需要在细胞膜内侧进行病毒粒子的组装和出芽,这个过程依赖于M蛋白C-端形成特异的折叠结构与细胞膜结合,该折叠结构主要由2个α-螺旋包裹2个反向平行的β-折叠形成。而这个区域对应于NDV

关键词：新城疫病毒重组病毒生物学特性 P276A G275A

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区域性的潜在威胁:重组H9N2禽流感病毒可能在哺乳动物间发生气溶胶传播（英文）

区域性的潜在威胁:重组H9N2禽流感病毒可能在哺乳动物间发生气溶...

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第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：江恺骏扬州大学农业部畜禽传染病重点实验室

2009年流感毒株H1N1易与其他亚型流感病毒发生重组,这有利于产生能够发生传播的病毒。目前在华东地区H9N2亚型禽流感正发生区域流行,并发生感染哺乳动物的情况。据报道具有H9N2的外部骨架和pH1N1内部骨架的重组病毒能够在豚鼠间发生气... 详细信息

2009年流感毒株H1N1易与其他亚型流感病毒发生重组,这有利于产生能够发生传播的病毒。目前在华东地区H9N2亚型禽流感正发生区域流行,并发生感染哺乳动物的情况。据报道具有H9N2的外部骨架和pH1N1内部骨架的重组病毒能够在豚鼠间发生气溶胶传播。此研究的目的是进一步定位影响病毒气溶胶传播的内部基因。为此我们重组一系列的病毒在豚鼠上进行气溶胶传播试验,我们初步发现pH1N1 CA04的内部基因NP,M,NS共同作用能够使重组的H9N2禽流感病毒产生气溶胶传播能力。

关键词：禽流感病毒气溶胶传播哺乳动物潜在威胁区域性

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M蛋白R36Q突变致弱鸽副粘病毒1型病毒毒力并减少病毒复制

M蛋白R36Q突变致弱鸽副粘病毒1型病毒毒力并减少病毒复制

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：许海旭宋庆庆刘佳佳程欣刘晶晶朱杰胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州 225009

鸽副粘病毒1 型(PPMV-1)是一种能够特异性的感染宿主鸽子的病原体，通常被认为是禽副粘病毒1 型(APMV-1)在鸽子上的适应性变种。有研究报道PPMV-1 的这种适应性变化与病毒基因及蛋白的变化有关[1]，但是到目前为止，这种变化与病毒的生... 详细信息

鸽副粘病毒1 型(PPMV-1)是一种能够特异性的感染宿主鸽子的病原体，通常被认为是禽副粘病毒1 型(APMV-1)在鸽子上的适应性变种。有研究报道PPMV-1 的这种适应性变化与病毒基因及蛋白的变化有关[1]，但是到目前为止，这种变化与病毒的生物学特性的关系仍未见报道。

关键词：鸽副粘病毒1型禽副粘病毒1型 M蛋白特异性氨基酸位点 R36Q

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华东地区2013-2015年H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传进化分析

华东地区2013-2015年H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传进化分析

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第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：刘东李娟顾敏刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

前言1966年H9N2亚型禽流感病毒最早从火鸡体内被分离到,之后该亚型病毒广泛传播,1994年在我国鸡群中被首次发现并报道。H9N2亚型禽流感病毒具低致病性,易引起宿主的继发感染,降低鸡群产蛋量,严重威胁养禽业的健康发展。同时,H9亚型禽流... 详细信息

前言1966年H9N2亚型禽流感病毒最早从火鸡体内被分离到,之后该亚型病毒广泛传播,1994年在我国鸡群中被首次发现并报道。H9N2亚型禽流感病毒具低致病性,易引起宿主的继发感染,降低鸡群产蛋量,严重威胁养禽业的健康发展。同时,H9亚型禽流感病毒可以感染人、猪等哺乳动物,在公共卫生上具有重要意义。因此加强对该亚型病毒的监测工作显得尤为重要。在2013～2015年,本实验室在华东部分地区采样,对分离到H9N2亚型禽流感病毒进行遗传进化分析,以探究在这一地区H9N2亚型禽流感的流行趋势。

关键词：禽流感病毒基因遗传华东地区

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华东地区H5N1亚型禽流感病毒分子流行病学调查

华东地区H5N1亚型禽流感病毒分子流行病学调查

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第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：刘开拓胡娇李娟高如一孙文琪刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州 225009

在2014-2015年,本实验室对华东部分地区分离到的H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)进行遗传进化分析,以探究在这一地区H5N1亚型禽流感的流行趋势,为国内高致病性禽流感的预防和控制提供重要的信息.自2014年9月，在华东地... 详细信息

在2014-2015年,本实验室对华东部分地区分离到的H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)进行遗传进化分析,以探究在这一地区H5N1亚型禽流感的流行趋势,为国内高致病性禽流感的预防和控制提供重要的信息.自2014年9月，在华东地区采集棉试子2513份，共分离到29株H5NI亚型AIV，分离率为1.15％。其中26份来自于鸡，2份来源于鸭，1份来源于鸽子。HA序列测定与分析表明，29株H5Nl病毒裂解位点均为PQRERRRKR↓GLF，有多个碱性氨基酸的插入，符合HPAIVs的特征。遗传进化树表明其全部属于***分支，而当前防控该分支的Re-6疫苗属于clade2.3.2.1b分支，两者之间存在明显的遗传距离。与2013年分离到的clade2.3.2.1c分支毒株比较发现，这29株H5N1亚型AIV的HA序列中，27株均出现了L75W、T801、A93V、D95G、L133M、N144K、D158N、N159D、A160T、G167D、I178V、E188K、T1921、K193T、I285V氨基酸位点的改变;其中144、158和160位氨基酸的突变，导致144-147位糖基化位点缺失，158-161位新增;蛋白受体结合位点的分析显示，29株病毒HA基因的226位氨基酸均为谷氨酸(Q)、228位均为甘氨酸(G)，倾向于识别嗜禽的α2，3-唾液酸受体。HI试验表明，与2013年毒株相比，Re-6抗血清对clade2.3.2.1c分支毒株的中和能力明显下降;免疫保护试验显示，攻毒后3d在口腔和泄殖腔中即可检测到显著排毒，说明Re-6疫苗对该分支病毒所引发疫病的保护性不强。因此，推测clade2.3.2.1c分支H5NI亚型AIV发生了较为显著的抗原性变异，有潜在大流行的风险，故开发与当前流行株对应的疫苗显得尤为重要。

关键词：家禽禽流感病毒株基因测序流行病学

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猪圆环病毒2型江苏分离株的遗传进化分析

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中国兽医学报 2014年第7期34卷 1047-1052页

作者：束陈宇许秋阳段世鹏李晨曦张小荣焦库华吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用PCR方法扩增了15个猪圆环病毒2型（PCV 2）江苏分离株的基因组DNA,以这些毒株的ORF2核苷酸序列进行遗传进化分析。经序列比较发现,所有分离株均属于2b基因群,其中7株为1A/1B亚群、8株为1C亚群;毒株间核苷酸同源性为93.6%~100%,所编... 详细信息

采用PCR方法扩增了15个猪圆环病毒2型（PCV 2）江苏分离株的基因组DNA,以这些毒株的ORF2核苷酸序列进行遗传进化分析。经序列比较发现,所有分离株均属于2b基因群,其中7株为1A/1B亚群、8株为1C亚群;毒株间核苷酸同源性为93.6%~100%,所编码的Cap蛋白氨基酸同源性为92.3%~100%。PCV 2江苏分离株Cap蛋白的主要变异区域为53~90、121~151和190~210位氨基酸;R59、R89、S90、S121、T134、S169、A190、E210为1A/1B亚群分离株的特征氨基酸,而F8、I53、N68、L89、T90、T121、N134、R169、D210、I215、K234则是1C亚群分离株的特征氨基酸。

关键词：猪圆环病毒2型序列分析 ORF2基因 Cap蛋白

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3株K1203-like H5N8亚型禽流感病毒的遗传进化和生物学特性

3株K1203-like H5N8亚型禽流感病毒的遗传进化和生物学特性

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：李娟顾敏樊三忠刘东刘本琪江恺骏刘开拓胡娇王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州 225009 扬州市广陵区兽医站扬州 225000

近年来，新出现的2.3.4.4 分支H5N8 亚型禽流感病毒在世界多国引起了禽类疫情，严重威胁养禽业的健康发展.分析当前国内外H5N8 亚型禽流感病毒的遗传进化特点及生物学特性，对于更好的了解全球高致病性禽流感的流行现状具有重要意义.

关键词：禽流感 H5N8 K1203 重组致病力受体

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检测鸭呼肠孤病毒抗体间接ELISA方法的建立

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中国兽医学报 2014年第1期34卷 26-29,38页

作者：孙陈莉杨瑞王义敏赵娜张小荣彭大新吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

RT-PCR扩增鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的σB基因,克隆到pET-32a(+)表达载体,再转化大肠杆菌Transetta(DE3);含有重组质粒pET-σB的大肠杆菌经IPTG诱导,获得大小为55 000的以包涵体形式表达的σB重组蛋白。Western blotting显示,σ... 详细信息

RT-PCR扩增鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的σB基因,克隆到pET-32a(+)表达载体,再转化大肠杆菌Transetta(DE3);含有重组质粒pET-σB的大肠杆菌经IPTG诱导,获得大小为55 000的以包涵体形式表达的σB重组蛋白。Western blotting显示,σB重组蛋白能够与兔抗DRV多抗血清特异性结合。以高亲和NI-NTA树脂在变性条件下纯化、梯度尿素复性的σB重组蛋白为包被抗原,建立了检测DRV抗体的间接ELSIA方法。分别以间接ELSIA方法和血清中和试验对DRV感染鸭血清和SPF鸭血清进行检测,两者的符合率为100%。该间接ELSIA方法对鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒和禽流感病毒阳性血清均无交叉反应。

关键词：鸭呼肠孤病毒 σB重组蛋白原核表达间接ELISA

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Clade2.3.4 H5亚型禽流感疫苗变异候选株的构建

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中国兽医科学 2014年第10期44卷 1008-1013页

作者：王萱李群辉孙中涛高照刘佳佳王晓泉刘晓文扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为应对Clade2.3.4H5亚型禽流感病毒持续发生的抗原性改变及其引发的潜在的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果制备疫苗候选株。采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV的内部基因为骨架,以Clade2.3.4H5N1亚型... 详细信息

为应对Clade2.3.4H5亚型禽流感病毒持续发生的抗原性改变及其引发的潜在的地方性流行,需要根据流行监测的抗原分析结果制备疫苗候选株。采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)AIV的内部基因为骨架,以Clade2.3.4H5N1亚型AIV A/chicken/Hebei/2/2011(wt-HB株)的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因为供体,并删除wt-HB株HA基因中编码多碱性氨基酸的序列,成功拯救出1株重组病毒rHB/PR8。该病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖性能,对SPF鸡和鸡胚无致病性。这一研究结果为防控变异的Clade2.3.4H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株。

关键词： H5亚型禽流感病毒 Clade2.3.4 反向遗传 HA基因 NA基因

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禽流感疫苗生产中病毒培养工艺研究进展

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中国家禽 2014年第18期36卷 41-43页

作者：王萱李群辉高照孙中涛程欣刘佳佳王晓泉刘晓文扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感疫苗大规模生产一直备受关注,建立以生物反应器技术为基础的动物细胞大规模培养技术是禽流感疫苗生产的主流模式。目前国内外报道禽流感疫苗的病毒培养方式主要有传统的SPF鸡胚生产法、哺乳动物细胞贴壁培养法、微载体悬浮培养法... 详细信息

禽流感疫苗大规模生产一直备受关注,建立以生物反应器技术为基础的动物细胞大规模培养技术是禽流感疫苗生产的主流模式。目前国内外报道禽流感疫苗的病毒培养方式主要有传统的SPF鸡胚生产法、哺乳动物细胞贴壁培养法、微载体悬浮培养法、全悬浮无血清培养法。文章介绍了不同病毒培养工艺的优缺点,尤其是全悬浮无血清细胞培养法,该技术是进行大规模禽流感疫苗生产的必然趋势。

关键词：禽流感疫苗病毒培养鸡胚生产法微载体培养全悬浮细胞培养

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