检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2007年第3期23卷 540-545页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细... 详细信息

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌性表达

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TPL2促进口蹄疫病毒在BHK-21细胞复制

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1204-1211页

作者：魏南南徐守兴史喜娟卢炳州张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

为研究肿瘤进行性位点2(TPL2)在仓鼠肾细胞(BHK-21)中对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,使用FMDV感染BHK-21细胞,通过qRT-PCR技术检测FMDV感染对内源性TPL2转录水平的影响;根据GenBank公布的TPL2基因序列(NM007746.2)设计构建TPL2的真核表... 详细信息

为研究肿瘤进行性位点2(TPL2)在仓鼠肾细胞(BHK-21)中对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,使用FMDV感染BHK-21细胞,通过qRT-PCR技术检测FMDV感染对内源性TPL2转录水平的影响;根据GenBank公布的TPL2基因序列(NM007746.2)设计构建TPL2的真核表达质粒以及设计并合成宿主TPL2的RNAi序列,利用脂质体方法转染BHK-21细胞,通过qRT-PCR和Western blotting技术分析TPL2在BHK-21细胞过表达和干扰对FMDV复制的影响。结果表明,FMDV感染BHK-21细胞后,TPL2转录水平显著上调;过表达TPL2能够促进FMDV在BHK-21细胞中复制,而下调表达内源性TPL2后FMDV的复制受到抑制,表明TPL2促进FMDV在BHK-21细胞中进行复制,本结果进一步拓展了我们对FMDV与天然免疫机制之间关系的认识,同时为TPL2的相关研究积累了科学资料。

关键词： TPL2 口蹄疫病毒 FMDV BHK-21细胞天然免疫复制

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PLGA纳米/微球作为核酸载体的研究进展

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1901-1908页

作者：王刚潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

生物可降解材料[poly(lactide-co-glycolide acid),PLGA]颗粒在持续释放和定位递送各种药剂包括核酸有很大的研究和应用价值。本文综述了PLGA作为核酸载体的制备及其用于基因载体和疫苗佐剂的研究。

关键词： PLGA DNA 基因治疗疫苗佐剂

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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及分子特征

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畜牧兽医学报 2007年第2期38卷 190-195页

作者：独军政常惠芸丛国正邵军军林彤高闪电刘湘涛才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基... 详细信息

研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基基因的编码区含有3147个核苷酸,编码1048个氨基酸,其中信号肽由30个氨基酸组成,胞外域由957个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由32个氨基酸组成;在890和891位氨基酸之间有1个蛋白酶裂解位点(KR-D);胞外域含有13个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca2+结合位点[DX(D/N)XDGXXD]、18个半胱氨酸残基。该基因在GenBank中的登录号为DQ871215。牛αv基因与猕猴、家鼠、犬、人、鸡的αv基因的核苷酸序列同源性分别为91.0%、85.7%、90.1%、91.2%、73.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.7%、91.6%、96.3%、95.0%、81.6%。牛αv亚基存在复杂多变的二级结构,这是其具有多种生物学功能的分子基础,其中1-30位、988-1017位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较差,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究口蹄疫病毒与宿主细胞的相互关系奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体牛αv基因克隆分子特征

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Al(OH)_3、ISA206及Poly(I:C)免疫佐剂对灭活口蹄疫140S抗原免疫效果的影响

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免疫学杂志 2013年第11期29卷 927-932页

作者：周春雪魏巍李冬韩成昊李艳丽刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄... 详细信息

目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄疫完整病毒粒子抗原。在蔗糖密度梯度定量后分别与Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂配合制作口蹄疫灭活疫苗。疫苗经肌肉注射免疫Balb/c小鼠,通过检测抗体效价评价机体产生的体液免疫反应。通过检测体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后产生的细胞因子以及淋巴细胞增殖实验评价机体产生的细胞免疫反应。结果 ISA206口蹄疫灭活苗和Poly(I:C)口蹄疫灭活苗诱导小鼠产生的抗体效价较高;通过体外刺激实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在抗原刺激后,产生的IFN-γ和IL-4含量最高;通过淋巴细胞增殖实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力最强(P<0.05)。结论ISA206佐剂在配合灭活口蹄疫140S完整病毒粒子进行免疫时所表现的免疫效力最高。

关键词： Poly(I C) Al(OH)3 ISA206 口蹄疫

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型内非编码区嵌合口蹄疫病毒的拯救及生物学特性分析

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中国兽医科学 2013年第11期43卷 1101-1108页

作者：韩成昊李平花白兴文包慧芳卢曾军孙普曹轶梅刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为探寻口蹄疫病毒(FMDV)非编码区对病毒生命周期乃至生物学特性的影响,以O/HN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,利用融合PCR分别构建了含持续感染毒株O/CHN/Mya98/33-P 3′非编码区、5′非编码区及3′非编码区和5′非编码区嵌合的3株全... 详细信息

为探寻口蹄疫病毒(FMDV)非编码区对病毒生命周期乃至生物学特性的影响,以O/HN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,利用融合PCR分别构建了含持续感染毒株O/CHN/Mya98/33-P 3′非编码区、5′非编码区及3′非编码区和5′非编码区嵌合的3株全长cDNA克隆。3个全长克隆经线性化后分别在脂质体介导下转染表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞,转染后第60小时均出现明显的致细胞病变效应。对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光分析,结果表明成功拯救到3个嵌合的FMDV。拯救的病毒对乳鼠致病力和细胞感染力的比较分析结果显示,发现分别替换两端非编码区会导致病毒细胞感染力和乳鼠致病力下降,而同时替换非编码区的病毒则无明显变化。这些嵌合病毒的成功拯救为进一步阐述非编码区的功能奠定了基础。

关键词：型内嵌合非编码区口蹄疫病毒生物学特性

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猪圆环病毒致病性的分子基础

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中国兽医学报 2006年第4期26卷 457-459,464页

作者：刘光清云涛倪征梁华丽华炯刚李双茂杜青云浙江省农业科学院农业部病毒学与生物技术重点开放实验室浙江杭州310021

猪圆环病毒(porcine circoviruses,PCV)因为被发现与断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪肾病综合征(PNDS)以及仔猪先天性震颤等多种疾病的发生有关联,才逐渐引起人们的关注。越来越多的证... 详细信息

猪圆环病毒(porcine circoviruses,PCV)因为被发现与断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪肾病综合征(PNDS)以及仔猪先天性震颤等多种疾病的发生有关联,才逐渐引起人们的关注。越来越多的证据表明,PCV在猪群中的高感染率已是严重威胁世界养猪业健康发展的重要因素之一。然而,迄今我们对该病毒致病性的分子机制以及免疫机理等仍不是很清楚,可喜的是国内、外学者已对之进行了多方面的研究,并取得了丰硕研究成果。下面作者对近年来有关PCV分子生物学及免疫学方面的研究成果进行了综述,以期能对我国有关PCV的研究提供帮助。[第一段]

关键词：猪圆环病毒致病性分子基础

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偶蹄家畜FMDV受体通用亚基αv基因的分子特征及其进化关系

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畜牧兽医学报 2008年第11期39卷 1530-1536页

作者：独军政高闪电常惠芸赵建勇丛国正邵军军林彤刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

已发现至少有αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8 4种整联蛋白是FMDV的细胞受体,αv是4种受体的通用亚基。本试验中从FMDV实验感染猪和牛、健康羊和双峰驼等的肺组织中克隆到了受体通用亚基αv基因,并对其序列进行了比较和进化关系分析。... 详细信息

已发现至少有αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8 4种整联蛋白是FMDV的细胞受体,αv是4种受体的通用亚基。本试验中从FMDV实验感染猪和牛、健康羊和双峰驼等的肺组织中克隆到了受体通用亚基αv基因,并对其序列进行了比较和进化关系分析。结果显示,羊、牛、猪、双峰驼的αv亚基基因的编码区分别含有3147、3147、3141、3165个核苷酸,分别编码1048、1048、1046、1054个氨基酸,信号肽均由氨基端30个氨基酸组成,跨膜区、胞浆区均分别由29、32个氨基酸组成;胞外区分别由957、957、955、963个氨基酸组成。羊、牛、猪、双峰驼αv亚基基因在Gen-Bank中的登录号分别为EU367989、DQ871215、EF474019、EU367990。同源性分析表明,信号肽变异最大,胞外区次之,跨膜区和胞浆区比较保守;进化树表明,与灵长类、啮齿类、奇蹄类、禽类、食肉类等口蹄疫非易感物种相比,口蹄疫易感动物羊、双峰驼、猪、牛等偶蹄家畜αv亚基的亲缘关系较近,处于同一进化分支。这表明受体αv亚基可能与FMDV的宿主范围和组织嗜性有关。

关键词：偶蹄家畜 FMDV受体 αv基因分子特征进化关系

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非洲猪瘟病毒MGF 360-9L基因序列分析、蛋白结构预测及亚细胞定位

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畜牧兽医学报 2020年第6期51卷 1371-1381页

作者：申超超李国丽张大俊徐国伟侯景李丹党文张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室、农业部畜禽病毒学重点开放实验室、国家口蹄疫参考实验室兰州730046

前期研究结果表明,非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答,故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列,进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法,分析该基因的一级结构并预测该基因的表... 详细信息

前期研究结果表明,非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF 360-9L能显著抑制宿主天然免疫应答,故通过比较、分析ASFV中MGF 360基因序列,进一步研究MGF 360-9L基因结构和功能间的关系。本研究采用生物信息学方法,分析该基因的一级结构并预测该基因的表达蛋白二、三级结构;根据GenBank公布的Georgia 2007/1(FR682468.1)序列,合成MGF 360-9L基因并构建其重组真核表达质粒,Western blot验证该基因表达后,将重组质粒转染至PK-15细胞,经染色后观察其蛋白的亚细胞定位。结果表明,以Ⅱ型Georgia 2007/1基因组中MGF 360-9L基因为参照,其在Ⅱ型ASFV毒株中高度保守,在54株不同基因型毒株间的相似性与ASFV系统进化关系一致,保守序列为3′末端378 bp片段,高级结构以α螺旋为主,核定位序列预测其定位于细胞核内;构建真核表达质粒,成功表达目的蛋白且定位于细胞核内。本研究结果为进一步研究MGF 360-9L基因抑制免疫应答和明确MGF 360基因家族在ASFV的致病机制积累了资料。

关键词：非洲猪瘟病毒 MGF 360-9L基因序列分析结构预测亚细胞定位

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PK-15细胞的TPL2基因敲除有利于口蹄疫病毒和塞内卡病毒复制

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畜牧兽医学报 2020年第5期51卷 1060-1073页

作者：闫鸣昊郝军红张大俊申超超徐国伟侯景张克山郑海学刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

旨在构建TPL2(MAP3K8/COT)基因敲除PK-15细胞系PK-15-TPL2^-/-,评估该基因敲除前后对口蹄疫病毒(FMDV)和塞内卡病毒(SVA)复制的影响及产生影响的原因,为研究TPL2在病毒感染过程中的作用机制提供良好的生物材料,也为疫苗生产过程中进一... 详细信息

旨在构建TPL2(MAP3K8/COT)基因敲除PK-15细胞系PK-15-TPL2^-/-,评估该基因敲除前后对口蹄疫病毒(FMDV)和塞内卡病毒(SVA)复制的影响及产生影响的原因,为研究TPL2在病毒感染过程中的作用机制提供良好的生物材料,也为疫苗生产过程中进一步提升FMDV和SVA产量指明方向。筛选2条针对TPL2基因的单向导RNA(sg RNA),合成sg RNA并将其插入到含有GFP标签的慢病毒表达载体,构建sg RNA/Cas9慢病毒表达质粒,包装慢病毒并感染PK-15细胞,通过流式细胞仪分选出已被转入sg RNA的单细胞。通过测序确认细胞系中TPL2的DNA序列,通过蛋白质印迹(Western blot)方法检测细胞系中TPL2表达情况。使用FMDV和SVA感染构建好的细胞系,利用IFA、RT-qPCR、Western blot和TCID50评估FMDV和SVA在PK-15-TPL2^-/-细胞中的复制水平,在此基础上通过测定干扰素(IFN)和IFN刺激基因(ISG)的mRNA表达水平,研究了FMDV或SVA感染的PK-15-TPL2^-/-细胞中干扰素途径的激活状态。TPL2基因敲除PK-15细胞系中TPL2基因发生了碱基插入突变和碱基缺失突变,构建的细胞系中均未检测到TPL2蛋白质表达。测定并比较了FMDV和SVA感染的PK-15和PK-15-TPL2^-/-细胞中病毒含量,表明TPL2基因敲除显著促进了FMDV和SVA的复制。同时,RT-qPCR进一步表明与FMDV和SVA感染期间的PK-15细胞相比,PK-15-TPL2^-/-细胞中IFN-α、IFN-β、IFN-γ、ISG15、ISG54和ISG56的mRNA表达明显降低。综上所述,本研究成功构建了TPL2基因敲除的PK-15细胞系,与对照细胞相比,TPL2基因的敲除更利于FMDV和SVA的复制,这可能与IFN-α、IFN-β、IFN-γ、ISG15、ISG54和ISG56表达的抑制有关。本研究提示CRISPR/Cas9基因编辑技术可以作为在动物和疫苗开发过程中编辑细胞系以提高病毒产量的有效工具,本结果为进一步提升FMDV和SVA产量指明了方向,也为研究TPL2在病毒感染过程中的作用机制提供了良好的生物材料。

关键词： TPL2基因 PK-15细胞基因敲除口蹄疫病毒塞内卡病毒

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