检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2004年第4期35卷 454-458页

作者：孙世琪郭慧琛尚佑军魏旭文靳野马军武韩雪清刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

采用RT-PCR法对FMDVOX株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明不含poly(C)序列和poly(A)尾巴的OX株基因组全序列长8104nt,开放读码框(ORF)长6969nt、编码2322aa,5′UTR长1040nt,3′UTR长95nt。应用分子生物学软件将OX株与FMDV其... 详细信息

采用RT-PCR法对FMDVOX株基因组全序列进行了分子克隆与测序。结果表明不含poly(C)序列和poly(A)尾巴的OX株基因组全序列长8104nt,开放读码框(ORF)长6969nt、编码2322aa,5′UTR长1040nt,3′UTR长95nt。应用分子生物学软件将OX株与FMDV其它参考毒株进行序列比较,并对其基因特征进行分析。结果显示,OX株与OTwyl/97的核苷酸同源性最高,在基因组功能未知区和3A编码区具有两处明显的缺失现象,其一是在3A编码区有30nt的连续缺失,这与OTwyl/97株相同,其二是在功能未知区域有44nt的缺失,这与OTwyl/97株相同,与OAkesu58相似(43nt缺失)。

关键词：口蹄疫 OX株基因组分子克隆序列分析 RT-PCR

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口蹄疫病毒持续性感染形成原因的探讨

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中国兽医科技 2003年第4期33卷 35-40页

作者：刘光清刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫病毒(Foot—and—mouth disease virus， FMDV)是一种小RNA病毒，主要引起偶蹄兽发生口蹄疫(FMD)。其发病特点是起病急、传播快、发病率高、病畜生产性能迅速下降等，给畜牧业带来严重的经济损失。因此，该病历来都是国际社会最... 详细信息

口蹄疫病毒(Foot—and—mouth disease virus， FMDV)是一种小RNA病毒，主要引起偶蹄兽发生口蹄疫(FMD)。其发病特点是起病急、传播快、发病率高、病畜生产性能迅速下降等，给畜牧业带来严重的经济损失。因此，该病历来都是国际社会最为关注的传染病之一。FMD十分顽固，一旦发生，就很难消灭。有的国家甚至在宣布消灭FMD后，仍会再度暴发该病。研究表明，这可能与FMDV能建立持续性感染(persmtent infcctions)有关。所谓持续性感染，是指病毒在动物体内持续存活数月乃至多年，甚至终生，而动物并不表现临床症状，只是呈现亚临床感染状态，但是它们却具有向外界排毒的能力，是重要的传染源。早在20世纪初期人们就发现了FMDV的持续性感染特征，但是一自没有足够的证据来证明。1959年，van Bekkum等人首次从痊愈数月后的动物体内分离到FMDV，但是并没有引起人们的重视。直到1965年，Sutmoller等进一步用试验证实了Van Bekkum的发现，人们才开始注意并进行FMDV持续性感染的研究，英国的动物病毒研究所与津巴布韦兽医服务中心合作，进行了一项长达二十余年的试验研究。研究结果表明，水牛个体带毒时间至少为5年，群体带毒时间则至少为 24年。由此，可以认为FMDV可在动物体内存在很长时间甚至终生，在动物群体中更是广泛而长期存在，造成持续性感染。

关键词：口蹄疫病毒持续性感染成因口蹄疫遗传变异病毒准种 RNA重组宿主免疫系统损伤疫苗多宿主性

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猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究

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畜牧兽医学报 2006年第10期37卷 1016-1020页

作者：孙世琪郭慧琛尹双辉冯霞尚佑军代兴国刘在新刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免... 详细信息

利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明,自杀性DNA疫苗pSCA/1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。

关键词：猪水疱病病毒(SVDV) 甲病毒复制子载体自杀性DNA疫苗

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口蹄疫病毒O/China/99株多基因植物组成型表达载体的构建及序列分析

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中国人兽共患病杂志 2005年第10期21卷 841-844,905页

作者：潘丽张永光王永录王宝琴王文秀方玉珍蒋守田张维德董金杰吕建亮谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X... 详细信息

目的构建包含FMDV结构蛋白P1、非结构蛋白2A、3C以及部分2B的基因片段P12X3C的植物组成型表达载体,为FMDV可饲疫苗的研制奠定基础。方法通过PCR扩增法,从pGEM/P12A质粒和pGEM/3C质粒中扩增P12A及部分2B基因(P12X)、3C基因,将获得的P12X与3C片段经BamHI/SpeI和SpeI/SalI双酶切后,与经BamHI/SalI双酶切后的pUC18质粒大片段连接,得到重组质粒pUC18/P12X3C,pUC18/P12X3C质粒经BamHI/SalI双酶切后的大片段与经同样双酶切的植物表达载体pBin438连接,转化子经酶切、PCR及测序鉴定后,获得包含FMDV O/China/99株P12X3C片段的植物组成型表达载体pBin438/P12X3C,最后通过三亲交配法,将表达载体pBin438/P12X3C导入农杆菌。结论成功构建FMDV多基因的植物组成型表达载体。

关键词：口蹄疫病毒 O/China/99株多基因植物组成型表达载体基因序列可饲疫苗

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口蹄疫病毒受体猪源β6亚基基因的克隆和分子特征

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生物工程学报 2007年第5期23卷 924-929页

作者：高闪电独军政常惠芸丛国正邵军军易华山周建华谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β6亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析,该基因已登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2367个核苷酸,编码78... 详细信息

从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β6亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析,该基因已登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,含有9个潜在的糖基化位点,3个氨基葡聚糖结合位点,一个依赖于cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,10个蛋白激酶C磷酸化位点,2个表皮生长因子相似结构域和2个半胱氨酸丰富区。其信号肽由26个氨基酸组成,胞外域由681个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由52个氨基酸组成。从起始密码子开始,共有11个核苷酸发生了变化,其中2079位和2256位核苷酸的突变是同义突变,其余9位核苷酸的变化为错义突变。猪β6基因与猕猴、小鼠、挪威大鼠、犬、豚鼠、人、牛和羊的β6基因的核苷酸序列一致性分别为79.5%、84.9%、85.4%、85.2%、88.7%、90.1%、91.9%和91.9%,推导的氨基酸序列一致性分别为93.5%、88.2%、88.5%、88.3%、91.0%、92.8%、93.3%和93.4%。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪整联蛋白β6基因分子特征

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逆转录病毒载体介导的稳定表达口蹄疫病毒3D基因的BHK21细胞系的建立

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微生物学报 2008年第8期48卷 1115-1120页

作者：毕研丽沈小燕丛国正刘湘涛常惠芸才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1... 详细信息

【目的】研究口蹄疫病毒RNA聚合酶在BHK-21细胞中的稳定表达状况,为研究RNA聚合酶生物学活性及其基因工程疫苗研制提供科学依据。【方法】从重组质粒pMD18-T-3D扩增口蹄疫病毒3D基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pBPSTR1-3D。用pBPSTR1-3D和pVSV-G双质粒瞬时转染GP2-293包装细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染BHK-21细胞,嘌呤霉素持续筛选12d后获得阳性克隆,并用有限稀释法挑选单个阳性细胞克隆。【结果】应用PCR、RT-PCR技术可从体外反复传代的阳性细胞中扩增到3D基因,证实目的外源基因能转录并被稳定整合进宿主细胞基因组中。经SDS-PAGE、Westernblot、间接免疫荧光检测到在不同代次的阳性细胞中有目的蛋白表达。【结论】本试验利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将外源基因插入到靶细胞的基因组中,构建了稳定表达口蹄疫病毒RNA聚合酶的包装细胞系,为研究3D基因表达及其蛋白定位提供了方便,也为下一步研究RNA聚合酶生物学功能和疫苗研制提供了科学依据。

关键词：口蹄疫病毒 3D基因逆转录病毒载体pBPSTR1 BHK-21细胞系

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口蹄疫病毒泛亚型O／CHINA／99株全长cDNA分子克隆构建和感染性鉴定

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病毒学报 2009年第1期25卷 58-62页

作者：吕建亮张永光王永录潘丽刘力宽方玉珍蒋守田张维德中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利... 详细信息

设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利用T7 RNA聚合酶系统进行体外转录,转录产物RNA用脂质体转入BHK-21细胞传代培养,可观察到典型的FMDV致细胞病变效应;拯救病毒接种2日龄乳鼠后,可出现典型的临床症状,并于16～48h内死亡。以上结果表明,O/CHINA/99株全长cDNA分子克隆构建成功,并从构建的全长cDNA拯救出了口蹄疫病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA 反向遗传学

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Asia I型口蹄疫病毒中和表位与羊IgG重链恒定区的融合表达及免疫原性测定

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生物工程学报 2010年第4期26卷 454-461页

作者：王景锋邵军军李菁高闪电独军政丛国正林彤常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

VP1蛋白是口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）诱导机体产生抗病毒感染免疫的主要蛋白,含有病毒的若干中和表位。本研究设计和合成了由AsiaI型FMDVVP1蛋白136~160aa和198~211aa两个表位组成的重复串联表位的编码基因,并克... 详细信息

VP1蛋白是口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）诱导机体产生抗病毒感染免疫的主要蛋白,含有病毒的若干中和表位。本研究设计和合成了由AsiaI型FMDVVP1蛋白136~160aa和198~211aa两个表位组成的重复串联表位的编码基因,并克隆了羊IgG重链恒定区编码基因。利用BamHI、EcoRI和XhoI位点将2个基因片段依次克隆到pPROExHTb载体,构建成重组质粒pPRO-FshIgG,将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,以IPTG诱导表达得到融合蛋白FshIgG。100μgFshIgG蛋白免疫豚鼠后刺激豚鼠产生了高效价的FMDV中和抗体,而且使这些免疫豚鼠在用200ID50剂量FMDV攻击时得到了完全保护。由此证明,羊IgG重链恒定区蛋白能够作为FMDV表位肽的载体,而融合蛋白FshIgG可成为一种口蹄疫表位疫苗候选物用于口蹄疫的预防。

关键词：口蹄疫病毒抗原表位羊IgG重链恒定区

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携带FMDV前导蛋白基因逆转录病毒载体的构建及其在牛肾细胞中的表达

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生物工程学报 2008年第5期24卷 740-745页

作者：丛国正周建华高闪电独军政邵军军林彤常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

以口蹄疫病毒株OA/58RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列Lab与逆转录病毒载体pBPSTR1连接,将构建正确的重组载体命名为pBPSTR1-Lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最... 详细信息

以口蹄疫病毒株OA/58RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列Lab与逆转录病毒载体pBPSTR1连接,将构建正确的重组载体命名为pBPSTR1-Lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最佳调控浓度,结果显示嘌呤霉素的最佳筛选浓度为3μg/mL,四环素的最佳调控浓度为1μg/mL。利用pBPSTR1-Lab和包装质粒pVSV-G双质粒瞬时转染Gp2-293包装细胞来获得重组逆转录病毒。利用重组逆转录病毒来感染牛肾细胞,并连续筛选12天来获得阳性克隆。通过除去四环素来诱导目的基因在牛肾细胞中表达,发现牛肾细胞病变死亡。经过PCR和蛋白质免疫印迹证实稳定表达前导蛋白的牛肾细胞系已经建立,为今后研究前导蛋白致病机理提供了平台。

关键词：口蹄疫病毒前导蛋白嘌呤霉素四环素逆转录病毒载体

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共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性

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微生物学报 2008年第11期48卷 1520-1525页

作者：李炯刘艳红刘湘涛尚佑军刘俊林安芳兰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和... 详细信息

【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达,并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株,衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。

关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳蛋白 MDBK细胞

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