检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2011年第5期31卷 687-691页

作者：刘永杰张克山尚佑军杨顺利卢国栋刘湘涛吴润甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染B... 详细信息

为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒前导蛋白亚细胞定位

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狂犬病毒磷蛋白真核表达载体的构建及其在成神经瘤细胞上的表达

狂犬病毒磷蛋白真核表达载体的构建及其在成神经瘤细胞上的表达

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第3届全国人畜共患病学术研讨会

作者：张金阳耿阳颜焰廖敏周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点开放实验室

目的构建真核表达载体pCI-neo-P,并在成神经瘤细胞中进行表达。方法从感染的非洲绿猴肾细胞中抽提RNA,反转录为cDNA,再用PCR方法扩增P基因,构建表达载体pCI-neo-P,经NheⅠ及SalⅠ双酶切并测序。借助于脂质体2000转染成神经瘤细胞,固定细... 详细信息

目的构建真核表达载体pCI-neo-P,并在成神经瘤细胞中进行表达。方法从感染的非洲绿猴肾细胞中抽提RNA,反转录为cDNA,再用PCR方法扩增P基因,构建表达载体pCI-neo-P,经NheⅠ及SalⅠ双酶切并测序。借助于脂质体2000转染成神经瘤细胞,固定细胞,以抗狂犬病毒多抗血清检测细胞中P蛋白的表达。结果构建了真核表达载体pCI-neo-P,并在成神经瘤细胞中成功表达,为研究P蛋白的生物学功能及其在抗体鉴定中的应用奠定了基础。

关键词：狂犬病毒成神经瘤细胞真核表达载体磷蛋白

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非洲马瘟病毒群特异性RT-PCR检测方法的研究

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生物技术通报 2011年第4期27卷 204-207页

作者：赵文华杨仕标王金萍李富祥云南省畜牧兽医科学院农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室国家外来动物疫病诊断实验室昆明650224

非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)为双股RNA病毒,感染所有马科动物。设计2对位于AHSV基因组S7片段的引物,经RT-PCR扩增,证实2对引物对6种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,且能对同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿出血热病毒(EH... 详细信息

非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)为双股RNA病毒,感染所有马科动物。设计2对位于AHSV基因组S7片段的引物,经RT-PCR扩增,证实2对引物对6种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,且能对同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿出血热病毒(EHDV)进行区别诊断。经序列测定及Blast,证实所扩增的条带确为AHSV S7相应位置核苷酸序列,表明已初步建立AHSV群特异性RT-PCR检测方法。

关键词：非洲马瘟病毒 S7基因片段 RT-PCR 序列测定

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马病毒性动脉炎诊断技术

马病毒性动脉炎诊断技术

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标准类型：国家标准

本标准规定了马病毒性动脉炎诊断技术。本标准适用于马病毒性动脉炎的诊断和检疫。其中病毒分离、琼脂糖凝胶免疫扩散试验、反转录聚合酶链式反应试验适用于马病毒性动脉炎的病原诊断,中和试验和酶联免疫吸附试验适用于马病毒性动脉炎... 详细信息

标准号: GB/T 27980-2011

本标准规定了马病毒性动脉炎诊断技术。本标准适用于马病毒性动脉炎的诊断和检疫。其中病毒分离、琼脂糖凝胶免疫扩散试验、反转录聚合酶链式反应试验适用于马病毒性动脉炎的病原诊断,中和试验和酶联免疫吸附试验适用于马病毒性动脉炎的抗体检测。

关键词：动物饲养畜牧业家畜疾病诊断(医学) 兽医学马

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用乙基环丙沙星重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞

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中国畜牧兽医 2011年第11期38卷 214-217页

作者：高林廖德芳姚俊张念祖李华春李志华云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650224

为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠... 详细信息

为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠杆菌的安全浓度。然后用含该浓度乙基环丙沙星的MEM生长液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理。经过3次循环处理,再传3代后,确认大肠杆菌污染已经被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受细菌污染的细胞提供了参考。

关键词：乙基环丙沙星大肠杆菌 BHK-21细胞清除污染

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用乙基环丙沙星重建受猪鼻支原体污染的BHK-21细胞的研究

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中国畜牧兽医 2011年第12期38卷 45-49页

作者：高林廖德芳姚俊肖雷李华春张念祖李志华云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650224

为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体... 详细信息

为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体污染已被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受支原体污染的细胞提供了参考。

关键词：乙基环丙沙星猪鼻支原体 BHK-21细胞清除污染

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沙门菌载体重组疫苗的研究进展

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中国兽医杂志 2011年第6期47卷 54-56页

作者：马延滨高闪电丛国正常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个... 详细信息

目前,大多数疫苗都采用皮下或肌肉注射,可以诱导有效的血清免疫,但通常无法诱导黏膜抗体（sIgA）的产生。皮下或肌肉注射导致动物产生较大的应激反应,采食量下降,影响动物生长繁殖。实际生产中的不规范免疫操作可能导致病原微生物在个体问的人为传播而引发疾病。

关键词：重组疫苗沙门菌载体肌肉注射免疫操作病原微生物应激反应生长繁殖

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目前我国羊病发生特点及流行趋势

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兽医导刊 2011年第2期 36-39页

作者：逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

我国是养羊大国，根据2009年《中国统计年鉴》资料，2008年底我国羊存栏量为2．8亿只，其中山羊1．5亿只，绵羊1．3亿只；羊肉产量380．3万吨；绵、山羊毛产量41．2万吨，羊绒1．7万吨，养羊业已成为我国畜牧业的重要组成部分，

关键词：流行趋势发生特点羊病羊毛产量组成部分养羊业存栏量畜牧业

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牛叠朊编码基因缺失突变体的构建及在大肠杆菌中的表达

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中国兽医学报 2011年第10期31卷 1442-1448页

作者：杨生海殷宏刘永生马艳平丁耀忠孙彩琴丁小丽张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结... 详细信息

本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结构特征的分析,设计表达9个缺失突变体的引物。以PCR扩增出叠朊基因的缺失突变体,与pET-30a(+)表达载体连接后转入*** DH5α中,经双酶切和测序鉴定后将重组质粒转入***109和*** BL21表达宿主菌中,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达产物的相对分子质量、相对表达量和反应原性。结果表明,成功构建了9个牛叠朊编码基因的缺失突变体,通过IPTG的诱导表达,其中有6个缺失突变体被大肠杆菌高效表达,并且具有较好的反应原性,这为其单克隆抗体表位的进一步鉴定奠定了物质基础。

关键词：牛叠朊缺失突变体免疫印迹酶联免疫吸附分析

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单细胞克隆技术提纯分化的IBRS-2细胞研究

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中国畜牧兽医 2011年第6期38卷 87-90页

作者：高林李乐廖德芳朱明旺李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650224 云南省保山疫苗厂云南保山678000

IBRS-2细胞出现分化变异影响使用,为不影响正常的科学研究,本研究采用单细胞克隆的方法重新提纯,用96孔板经过3周的独立培养后,将具有代表性的4株进行扩增,然后用已知毒价的口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FM-DV)弱毒分别对... 详细信息

IBRS-2细胞出现分化变异影响使用,为不影响正常的科学研究,本研究采用单细胞克隆的方法重新提纯,用96孔板经过3周的独立培养后,将具有代表性的4株进行扩增,然后用已知毒价的口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FM-DV)弱毒分别对其进行接毒试验和TCID50测定。结果表明,B1株克隆细胞的病变最为理想,其TCID50为7.60,比提纯前的4.52更接近实际毒价7.85,且和实际毒价无显著差异。

关键词：单细胞克隆 IBRS-2细胞分化提纯

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