检索结果-内蒙古大学图书馆

1—2月龄荷斯坦奶牛不同组织中FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA转录水平的相对定量研究

中国农业科学 2010年第3期43卷 605-611页

作者：独军政常惠芸薛霜高闪电丛国正邵军军林彤包慧芳才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室

【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内... 详细信息

【目的】建立检测牛口蹄疫病毒(FMDV)受体亚基αv、β3、β6 mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析受体αvβ3和αvβ6在不同器官组织中的转录水平。【方法】在对牛FMDV受体基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以GAPDH为内参基因,采用△△Ct相对定量PCR方法检测分析FMDV受体亚基αv、β3、β6 mRNA在1—2月龄荷斯坦奶牛体内不同器官组织中的转录表达谱。【结果】αvβ3在荷斯坦奶牛24种组织中均有不同程度的转录表达;αvβ6在甲状腺、硬腭、鼻内皮、喉头、肺、食管、肾、后蹄冠状带等组织表达量较高,在唇、舌皮、软腭、气管、心脏、瘤胃、直肠、前蹄冠状带等组织转录表达量适中,在唾液腺、下颌淋巴结、肝、脾、肌肉等组织未检测到表达;αvβ6在牛体内的表达分布与FMDV组织嗜性基本一致,αvβ6受体可能是决定FMDV组织嗜性的主要功能受体,αvβ3的组织分布似乎与FMDV组织嗜性无关,但不能排除αvβ3在病毒感染过程中的作用。【结论】建立了检测FMDV受体亚基mRNA在不同器官组织中表达水平的相对实时定量PCR方法。

关键词： FMDV受体 mRNA转录水平 SYBR Green I 荷斯坦奶牛

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表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选

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畜牧兽医学报 2010年第4期41卷 434-440页

作者：王建科张云德张强吴国华颜新敏朱海霞李健邵长春朱彩珠吴磊中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重... 详细信息

为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3000bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性。这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株。

关键词：口蹄疫病毒启动子P7.5 P1-2A-3C基因羊痘病毒

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奶牛流产鹦鹉热衣原体ompA基因的克隆与原核表达

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中国人兽共患病学报 2010年第2期26卷 140-143页

作者：宋竹青邱昌庆周继章曹小安蔺国珍郑福英宫晓炜王光华魏彦明中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部公共卫生重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学兰州730070

目的表达奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因,探索其作为诊断抗原的可能性。方法采用套式PCR方法扩增出了奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因完整片段,此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SD... 详细信息

目的表达奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因,探索其作为诊断抗原的可能性。方法采用套式PCR方法扩增出了奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因完整片段,此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE和Western-blot检测重组目的蛋白的表达结果。结果重组蛋白经奶牛衣原体阳性血清鉴定正确。结论ompA基因在原核表达系统中得到正确表达。

关键词：鹦鹉热衣原体 ompA基因克隆原核表达奶牛

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传感器在致病菌检测上的应用

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中国农学通报 2010年第17期26卷 13-16页

作者：张杰刘永生中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

生物传感器因其具有灵敏、专一、微量、快速、准确、经济实用的特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等领域的生物传感器相继得到开发。它是利用抗原或抗体检测相应的抗体或抗原的一种传感器技术。此文就生物传感器在细菌的应用进行... 详细信息

生物传感器因其具有灵敏、专一、微量、快速、准确、经济实用的特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等领域的生物传感器相继得到开发。它是利用抗原或抗体检测相应的抗体或抗原的一种传感器技术。此文就生物传感器在细菌的应用进行综述性报道,并就其发展进行展望。

关键词：免疫传感器细菌微生物检测

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环介导等温扩增(LAMP)技术的应用研究

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中国农学通报 2010年第8期26卷 87-89页

作者：刘永生丁耀忠张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

LAMP技术是一种新的核酸扩增技术,具有简单、快速、特异性强的特点,具有替代PCR方法的可能性。通过总结LAMP技术快速检测和诊断病毒性疾病、真菌和细菌性疾病的案例,预测了它的应用前景(可能期待PCR技术),从而为其研究和应用提供一个平台。

关键词：环介导扩增技术聚合酶链反应应用

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猪流感及生物学特性研究进展

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中国农学通报 2010年第15期26卷 11-14页

作者：丁耀忠刘永生陈豪泰张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪流感(I)是由A型流感病毒引起的人畜共患病,被国际兽疫局和各国政府列为A类传染病,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因。其生态学和公共卫生学意义有极其重要的作用,就猪流感的生... 详细信息

猪流感(I)是由A型流感病毒引起的人畜共患病,被国际兽疫局和各国政府列为A类传染病,严重威胁到畜禽生产和人类自身生存安全,同时由于亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因。其生态学和公共卫生学意义有极其重要的作用,就猪流感的生物学特性和其可能致病机理进行概述,从而阐述目前猪流感的研究现状。

关键词：猪流感生物学特性 A型流感病毒

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RDD基序对口蹄疫Asia1型毒株感染力的影响

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科学通报 2010年第14期55卷 1370-1375页

作者：郑海学郭建宏靳野尚佑军田宏杨亚民刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

不同型口蹄疫病毒1D蛋白的βG和βH链之间都含有一个高度保守的RGD基序,其结合细胞受体,起始病毒感染.但本文通过对Asia1型FMDV的1D序列分析证实,田间毒株含有RGD和RDD基序(RGD中的G突变为D)的两种类型毒株.通过反向遗传技术制备了分别... 详细信息

不同型口蹄疫病毒1D蛋白的βG和βH链之间都含有一个高度保守的RGD基序,其结合细胞受体,起始病毒感染.但本文通过对Asia1型FMDV的1D序列分析证实,田间毒株含有RGD和RDD基序(RGD中的G突变为D)的两种类型毒株.通过反向遗传技术制备了分别含有RGD和RDD基序的两种病毒,测定其生物学特性,并通过细胞感染力和乳鼠致病力比较这两种病毒感染力的差别.结果表明,含有RGD和RDD的毒株都具有感染性,含有RDD毒株的细胞感染力和乳鼠致病力比含RGD的高10倍左右,为进一步阐明RDD基序Asia1毒株的感染机制的分子基础奠定必要的基础.

关键词：口蹄疫病毒 RGD 整联蛋白细胞结合位点反向遗传学

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猪膜联蛋白A2多克隆抗体的制备、亲和纯化与鉴定

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畜牧兽医学报 2010年第11期41卷 1502-1509页

作者：陈江涛王光祥吉艳红尚佑军刘艳红刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。通过PCR从质粒pA2-EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因(Annex A2-EGFP)亚克隆到pET-30a(+),构建了原核表达质粒p30a/AE,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导... 详细信息

本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。通过PCR从质粒pA2-EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因(Annex A2-EGFP)亚克隆到pET-30a(+),构建了原核表达质粒p30a/AE,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导以包涵体形式表达了猪ANNXA2-EGFP融合蛋白,用Ni-Resin HP树脂对表达的目的蛋白进行亲和纯化。用纯化的ANNXA2-EGFP融合蛋白免疫兔,制备兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。将以前纯化的猪可溶性GST-ANNXA2融合蛋白偶联NHS活化琼脂糖凝胶FF,亲和纯化多克隆抗体。用GST-ANNXA2亲和纯化的多抗效价达到1∶12800,Western blot和免疫组化结果证实具有高特异性。制备的高效价和高特异性兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体,为进一步研究膜联蛋白A2在病毒感染中的作用奠定了基础。

关键词：猪膜联蛋白A2 多克隆抗体亲和纯化

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福建省部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查

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贵州农业科学 2010年第2期38卷 130-131页

作者：贺英赵萍储岳峰高鹏程逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

为了解副猪嗜血杆菌病在福建省的流行情况,通过间接血凝检测方法对福建省部分猪场猪副猪嗜血杆菌病的流行情况进行了调查,结果表明,福建部分地区猪副猪嗜血杆菌病的阳性率为6.5%,其中母猪阳性率偏高,为8.75%。

关键词：副猪嗜血杆菌病流行病学福建

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壳聚糖微球作为鼻黏膜免疫载体的研究进展

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中国人兽共患病学报 2010年第12期26卷 1163-1166页

作者：王吉玮潘丽张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

黏膜免疫是动物机体防御传染病的第一道屏障,而鼻黏膜是许多病原微生物进入机体的必经之路。鼻黏膜免疫与局部或全身性免疫相比,有许多优点,例如鼻黏膜免疫无刺激、无痛感、为非侵入性,且不需要严格的无菌处理。[第一段]

关键词：鼻黏膜免疫壳聚糖微球免疫载体机体防御病原微生物全身性免疫非侵入性无菌处理

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