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中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室中农威特生物科技股份有限公司

目的:建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒（FMDV）的胶体金免疫层析法（GICA）。方法:采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸... 详细信息

目的:建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒（FMDV）的胶体金免疫层析法（GICA）。方法:采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。经试验条件优化,组装成胶体金快速诊断试纸条。结果:本试验研制的口蹄疫O型试剂盒具有良好的灵敏度,O型可检测到的3.9×10～4LD的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同,说明其具有较好的重复性;特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原,如猪水疱病抗原（SVD）、水泡性口炎（VS）、水泡性疹（VES）等病毒时无交叉反应;试剂盒对53份阳性参考样本及78份阴性参考样本做了符合率试验,阳性样品和阴性样本的符合率分别为92.45%和100%,样品检出率为96.95%。试剂盒在4℃下可保存6个月。结论:建立的检测O型口蹄疫病毒（FMDV）胶体金免疫层析法是一种快速、灵敏、特异的FMD O型抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。

关键词： O型口蹄疫病毒胶体金免疫层析法

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蛋白质芯片技术在动物源性食品检测中的应用研究进展

蛋白质芯片技术在动物源性食品检测中的应用研究进展

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：祁光宇黄银军牟克斌刘学荣王宇任维维蒋韬中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046

来，蛋白质芯片因其具有平行性，高通量、灵敏度高、样品用量少及检测速度快等优点而引起人们的高度关注。本文对蛋白质芯片技术及在动物源性食品检测中应用研究进展进行了简要综述，并分析了蛋白质芯片检测技术中存在的问题及应用前景。

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两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究

两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046

：寻找一种适合口蹄疫Asia Ⅰ抗体标记的胶体金。方法：采用柠檬酸三钠和柠檬酸三钠-鞣酸法分别还原成氯金酸溶液，制备纳米胶体金，并分别对制得的胶体金粒子大小、粒径分布情况、稳定性及微观形貌进行了分析，同时进行口蹄疫抗体标记...

：寻找一种适合口蹄疫Asia Ⅰ抗体标记的胶体金。方法：采用柠檬酸三钠和柠檬酸三钠-鞣酸法分别还原成氯金酸溶液，制备纳米胶体金，并分别对制得的胶体金粒子大小、粒径分布情况、稳定性及微观形貌进行了分析，同时进行口蹄疫抗体标记。结果：柠檬酸三钠-鞣酸法制备胶体金较稳定，标记的试纸条灵敏度要高于柠檬酸三钠法。结论：采用柠檬酸三钠-鞣酸法制备纳米胶体金适合口蹄疫AsiaⅠ抗体的标记。

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检测O型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立

检测O型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：祁光宇智晓莹任维维黄银军牟克斌刘学荣王宇蒋韬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州 730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046

：建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法：采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒，标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素...

：建立一种快速、简便的检测O型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法：采用柠檬酸三钠-鞣酸还原法制备胶体金颗粒，标记纯化的标准株O型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上，作为检测带与质控带。经试验条件优化，组装成胶体金快速诊断试纸条。结果：本试验研制的口蹄疫O型试剂金具有良好的灵敏度，O型可检测到的3.9×10 4LD50的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同，说明其具有较好的重复性；特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原，如猪水疱病抗原(SVD)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)等病毒时无交叉反应；试剂金对53份阳性参考样本及78份阴性参考样本做了符合率试验，阳性样品和阴性样本的符合率分别为92.45％和100％，样品检出率为96.95％。试剂盒在4℃下可保存6个月。结论：建立的检测O型口蹄疫病毒(FMDV)胶体金免疫层析法是一种快速、灵敏、特异的FMD O型抗原检测方法，对基层现场具有广泛应用价值．

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A型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达及其产物免疫原性分析

A型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达及其产物免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会暨第三届中国兽药大会

作者：李志勇易咏竹殷相平张韵刘明张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081

蹄疫病毒A/WH株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm(P12A...

蹄疫病毒A/WH株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中，构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞，经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm(P12A3C)。将获得的重组病毒rBm(P12A3C)感染家蚕蚕蛹，通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛，免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天用同源强毒攻击，其PD50值达到4.33PD50/头份。

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微生物添加剂的研究进展

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中国饲料添加剂 2010年第5期 12-14页

作者：祁光宇王宇李娟中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 山东省化工研究院济南250014

微生物添加剂作为无毒、无污染生物制品类饲料添加剂，在调节动物机体微生态平衡、预防疾病、提高饲料转化率、促进动物健康和保护生态环境等方面有着其它抗生素类添加剂不可替代的作用，而且随着对其作用机理研究的深入，应用效果的进... 详细信息

微生物添加剂作为无毒、无污染生物制品类饲料添加剂，在调节动物机体微生态平衡、预防疾病、提高饲料转化率、促进动物健康和保护生态环境等方面有着其它抗生素类添加剂不可替代的作用，而且随着对其作用机理研究的深入，应用效果的进一步凸显，应用也越来越广泛。本文对微生物添加剂的概念、种类、国内外研究和应用概况及应用前景进行了综述。

关键词：微生物添加剂概念种类应用前景

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口蹄疫病毒泛亚型O／CHINA／99株全长cDNA分子克隆构建和感染性鉴定

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病毒学报 2009年第1期25卷 58-62页

作者：吕建亮张永光王永录潘丽刘力宽方玉珍蒋守田张维德中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利... 详细信息

设计并合成了O型口蹄疫泛亚型代表毒株O/CHINA/99基因组9条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,酶切后连到pOK-12载体上,经酶切、PCR和序列测定表明,O/CHINA/99全基因组由8 200个核苷酸组成,构建的感染性cDNA与原毒株的序列同源性为99.1%;利用T7 RNA聚合酶系统进行体外转录,转录产物RNA用脂质体转入BHK-21细胞传代培养,可观察到典型的FMDV致细胞病变效应;拯救病毒接种2日龄乳鼠后,可出现典型的临床症状,并于16～48h内死亡。以上结果表明,O/CHINA/99株全长cDNA分子克隆构建成功,并从构建的全长cDNA拯救出了口蹄疫病毒。

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA 反向遗传学

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细胞型朊蛋白PrP^C与浮舰蛋白flotillin功能的研究进展

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中国农业大学学报 2009年第3期14卷 12-16页

作者：刘永生张杰马丽娜陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

朊蛋白和脂筏是当今研究的热点。细胞型朊蛋白(PrPC)能够通过构象转变生成致病型的朊病毒(PrPSc),导致海绵状脑病的发生,但是目前关于PrPC的转变机制还不清楚。PrPC也是重要的信号转导蛋白,引发众多的信号转导事件。Flotillin属于新被... 详细信息

朊蛋白和脂筏是当今研究的热点。细胞型朊蛋白(PrPC)能够通过构象转变生成致病型的朊病毒(PrPSc),导致海绵状脑病的发生,但是目前关于PrPC的转变机制还不清楚。PrPC也是重要的信号转导蛋白,引发众多的信号转导事件。Flotillin属于新被命名为SPFH(stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C)的蛋白家族,是重要的脂筏标识性蛋白,它们不仅被动地担当着非胞膜窖脂筏的脚架,为蛋白质的相互作用和蛋白质复合体的组装以及信号转导提供平台,而且本身还主动地扮演着信号蛋白的角色,在许多的细胞事件中发挥重要作用。PrPC与flotillin能够发生相互作用,flotillin蛋白为PrPC的跨膜信号转导和PrPC转变成PrPSc提供了环境。本文重点综述了近5年来关于PrPC和flotillin蛋白功能的研究进展,尤其是信号转导方面的研究。

关键词：浮舰蛋白海绵状脑病细胞型朊蛋白信号转导脂筏蛋白

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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达

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畜牧兽医学报 2009年第3期40卷 376-382页

作者：李炯刘艳红安芳兰刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室兰州730046

为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病... 详细信息

为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳前体基因绿色荧光蛋白基因 BHK-21细胞

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副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2009年第7期39卷 597-601页

作者：冯小明储岳峰贺英高鹏程赵萍郭晗樊祜卿逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体... 详细信息

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1∶15000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min。待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性。特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。

关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

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