检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫细胞和细胞因子在口蹄疫免疫应答中的作用

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中国人兽共患病学报 2009年第10期25卷 1017-1020页

作者：杜进鑫王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

口蹄疫是由小RNA病毒科口蹄疫病毒属的口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、热性、高度接触性的传染病。已有一百多年的历史,至今尚未在全球范围得到消灭。[第一段]

关键词：口蹄疫病毒免疫应答细胞因子免疫细胞小RNA病毒科传染病接触性

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口蹄疫病毒株AF72 VP2的结构模拟与分析

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华北农学报 2009年第4期24卷 64-69页

作者：陈启伟王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮周鹏张中旺张昱张淑刚杜进鑫李正丰王刚中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为了分析FMDV AF72VP2蛋白结构和功能的关系。以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-Teasy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和SpeⅠ、SphⅠ双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结... 详细信息

为了分析FMDV AF72VP2蛋白结构和功能的关系。以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增目的基因,PCR纯化产物与pGEM-Teasy载体连接并转化JM109菌株,用凝胶电泳、PCR和SpeⅠ、SphⅠ双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72 VP2的核苷酸序列,利用同源建模的方法建立AF72 VP2结构蛋白的3D结构,在此基础上,综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72 VP2结构蛋白的B细胞抗原表位。分析表明,口蹄疫病毒VP1,VP2,VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0.05）;而他们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0.05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP2氨基酸序列比对发现其保守区主要位于第1-23、37-51、66-76、85-101、124-142、165-199、205-219位。保守区氨基酸残基在维持VP2蛋白的空间构象和功能方面具有重要作用,其中1-10、129-140、165-176氨基酸区段是AF72 VP2结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域,该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供更有价值的参考信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP2结构蛋白 3D结构 B细胞表位

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建

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华北农学报 2009年第1期24卷 83-86页

作者：赵娜田宏吴锦艳满自萍尚佑军何生虎刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF5序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃LZH株的ORF5基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF5... 详细信息

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF5序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃LZH株的ORF5基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF5,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBacHTA-ORF5转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF5;并成功构建了PRRSV LZH株ORF5基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因克隆杆状病毒表达

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口蹄疫病毒株AF72 VP3的结构模拟与分析

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微生物学通报 2009年第11期36卷 1716-1722页

作者：陈启伟王永录张永光潘丽方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺张昱张淑刚杜进鑫李正丰王刚中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

以口蹄疫病毒株AF72RNA为模板，反转录并扩增目的基因，PCR纯化产物与pGEMT—Easy载体连接并转化JM109菌株，用凝胶电泳、PCR和SpeI／SphI双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72VP3的核苷酸序列，利用同源建模的... 详细信息

以口蹄疫病毒株AF72RNA为模板，反转录并扩增目的基因，PCR纯化产物与pGEMT—Easy载体连接并转化JM109菌株，用凝胶电泳、PCR和SpeI／SphI双酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序。比对测序结果确定AF72VP3的核苷酸序列，利用同源建模的方法建立AF72VP3结构蛋白的3D结构，在此基础上，综合亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数预测AF72VP3结构蛋白的B细胞抗原表位。分析表明，口蹄疫病毒VP1、VP2、VP3和VP4在核苷酸水平上的变异率是无差异的（P〉0．05）；而它们在氨基酸水平上的变异率差异显著（P〈0．05）。该毒株与20株源于GenBank中的VP3氨基酸序列比对发现其保守区主要位于第1～24、24～35、36～42、45～56、65～122、124～172、177～210、211～219位。AF72VP3结构蛋白三维空间结构可分为A、B和c3个结构区域，蛋白呈现较规则的空间构象，其中18～23、30～44、60～75、113～124、130～142、193～220氨基酸区段是AF72VP3结构蛋白可能的B细胞抗原表位区域，该结果将为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供更有价值的参考信息。

关键词：口蹄疫病毒 VP3结构蛋白 3D结构 B细胞表位

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猪生殖与呼吸综合征病毒NX／ZhW／07株的分离鉴定及其ORF5、Nsp2基因特性分析

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中国兽医科学 2009年第6期39卷 498-502页

作者：满自萍田宏吴锦艳赵娜尚佑军杨春生何生虎刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

将2007年宁夏送检的疑似猪高热病病料处理后接种于Marc-145细胞,结果Marc-145细胞出现典型的细胞病变,应用猪生殖与呼吸综合征(PRRS)病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,将其命名为NX/ZhW/07。采用RT-PCR方法扩增该分离株的ORF5和... 详细信息

将2007年宁夏送检的疑似猪高热病病料处理后接种于Marc-145细胞,结果Marc-145细胞出现典型的细胞病变,应用猪生殖与呼吸综合征(PRRS)病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,将其命名为NX/ZhW/07。采用RT-PCR方法扩增该分离株的ORF5和Nsp2基因,并进行序列分析。结果表明,NX/ZhW/07株的ORF5基因与GXHP-5、Hainan-1、HUB1、Hunan-1、JIANGSU、Jiangxi-1、LN-5和SHH-5株的核苷酸序列的同源性分别为92%～94%,其中与CH-1a株的核苷酸序列的同源性最高,达99.2%。Nsp2基因序列分析显示,出现30个氨基酸的不连续缺失,与国内高热病分离株JXA1的缺失位置完全一致。由此推测NX/ZhW/07株属于PRRSV美洲型变异株。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 NX/Zhw/07株 ORF5基因 Nsp2基因序列分析

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宁夏地区猪生殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆及其变异分析

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中国兽医科学 2009年第1期39卷 1-5页

作者：满自萍田宏吴锦艳赵娜尚佑军刘湘涛杨春生何生虎中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

参考GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Jiangxi株和CH—la株的ORF5基N序列，设计并合成了1对引物，对宁夏回族自治区送检的18份PRRS阳性分离毒株进行RT—PCR扩增，获得约750bp的DNA片段，将其分别克隆入pMD18-T载体中，... 详细信息

参考GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Jiangxi株和CH—la株的ORF5基N序列，设计并合成了1对引物，对宁夏回族自治区送检的18份PRRS阳性分离毒株进行RT—PCR扩增，获得约750bp的DNA片段，将其分别克隆入pMD18-T载体中，进行测序。应用DNAStar软件分析所测序列，并与ATCCVR-2332，BJ-4，RespPRRSMLV等毒株的ORF5序列进行比较，发现其核苷酸同源性为85．4％～89．0％，与CH—1a之间的核苷酸同源性为90．0％～98．2％，与欧洲代表株LV的核苷酸同源性为55．9％～56．6％。基因系统进化树分析表明，发生于宁夏回族自治区的PRRSV属于美洲型，与CH—1a遗传关系较近，归属同-基因亚型。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因变异分析

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口蹄疫病毒抗原保护剂的研究

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安徽农业科学 2009年第14期37卷 6445-6447页

作者：李正丰王永录贾宁张永光方玉珍蒋守田潘丽刘力宽吕建亮张淑刚杜进鑫张昱张中旺周鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州7300462

[目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(... 详细信息

[目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(4#)保护剂配方,以加保护剂A(已申请专利)的病毒为对照,比较其在不同条件下的TCID50和146s抗原的含量。[结果]通过方差分析4#保护剂保存病毒测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9。将4#保护剂加入被保存的病毒抗原中,分别于4℃下保存90、120、150 d,其logTCID50分别为5.3、5.0和4.5,而加保护剂A(已申请专利)的对照病毒则为5.0、4.5和4.3;在37℃下保存40、50和60 h,其logT-CID50分别为4.5、2.5和1.0;而加保护剂A的对照病毒则为3.5、1.5和0.5,为了进一步验证保护剂对FMDV抗原的保护性能,进行了FMDV146s抗原含量的测定。分别于4℃下保存150 d,37℃下保存40 h,测得结果分别为0.796、0.462μg/ml,而加保护剂A的对照病毒则为0.602、0.307μg/ml。[结论]该复合配方保护剂I(4#)对FMDV有效抗原的保护作用优于保护剂A,尤其是病毒保护剂对提高FMDV的冷冻保存时间和耐热效能作用明显。

关键词：口蹄疫病毒抗原保护剂

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狂犬病病毒核蛋白的原核表达及纯化

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贵州农业科学 2009年第12期37卷 136-139页

作者：焦文强胡永浩殷相平李志勇柳纪省甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046

采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因,并将目的基因亚克隆入原表达载体pET-28a(+)中,经PCR、双酶切以及序列分析,结果表明:已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化至大肠埃希氏菌Rossetta(DE3),在37℃,1 mmol/LIPTG条... 详细信息

采用RT-PCR方法扩增出狂犬病病毒(RV)CVS株核蛋白(N)基因,并将目的基因亚克隆入原表达载体pET-28a(+)中,经PCR、双酶切以及序列分析,结果表明:已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化至大肠埃希氏菌Rossetta(DE3),在37℃,1 mmol/LIPTG条件下进行诱导表达。诱导产物经SDS-PAGE分析,在分子量约为54 KD附近出现较粗的目的带,与预期的目的蛋白分子量相符合。经表达条件优化,用1 mmol/LIPTG在37℃诱导表达5h,表达量达到最高,Western-Blotting鉴定目的蛋白有较强的免疫原性。为狂犬病毒的N蛋白的新型疫苗的制备奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒核蛋白原核表达

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山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达

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中国兽医学报 2009年第8期29卷 982-985页

作者：谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染... 详细信息

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31000的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。

关键词：山羊痘病毒 P32基因毕赤酵母诱导表达

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口蹄疫A型病毒AF/72株标准细胞毒株的研制

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华北农学报 2009年第3期24卷 74-77页

作者：杜进鑫王永录张永光方玉珍蒋守田吕建亮潘丽刘力宽中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠继续适应3代后,转适BHK-21细胞,获得该毒株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为10-8.0/mL;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于8... 详细信息

用口蹄疫A型病毒AF/72株的第3代乳鼠组织毒,通过乳鼠继续适应3代后,转适BHK-21细胞,获得该毒株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为10-8.0/mL;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他6株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/mL,远大于22 ng/mL的国际标准。综合纯净性检验结果、特异性检验结果和146S含量,确定AF/72/MF6/BF12为口蹄疫A型病毒株AF/72的标准细胞毒。

关键词：口蹄疫A型病毒 FMD 毒株

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