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表达Asia 1型口蹄疫病毒P1-2A和3C基因的重组山羊痘病毒弱毒株的构建

中国兽医科学 2009年第3期39卷 209-213页

作者：张强鞠厚斌吴国华颜新敏李健朱海霞马维民郑海学朱彩珠才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

为构建表达Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A和3C基因的重组山羊痘病毒(GTPV)弱毒株,将Asia 1型FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因、蛋白酶3C基因、绿色荧光蛋白(EGFP)基因、痘苗病毒启动子(p7.5)相连,构建成一整体基因表达盒p7.5-EGFP-P12A3C。... 详细信息

为构建表达Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A和3C基因的重组山羊痘病毒(GTPV)弱毒株,将Asia 1型FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因、蛋白酶3C基因、绿色荧光蛋白(EGFP)基因、痘苗病毒启动子(p7.5)相连,构建成一整体基因表达盒p7.5-EGFP-P12A3C。以GTPV胸苷激酶基因序列中的KpnⅠ酶切位点为插入位点,将整体基因表达盒插入转移载体骨架pUC119-TK中,构建GTPV转移载体pTK-p7.5-EGFP-P12A3C。将转移载体转染GTPV弱毒株AV 41感染的BHK-21细胞,转染后24 h就可见到绿色荧光,表明,成功获得了能表达目的蛋白的重组山羊痘病毒株TK-/EGFP+/FMDV P1-2A3C+/GTPV。

关键词：口蹄疫病毒山羊痘病毒 P1 2A基因 3C基因胸苷激酶基因

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杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达的研究进展

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1876-1881页

作者：田飞鹏曹轶梅卢曾军高云英刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒,可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白,制备疫苗。研究发现,在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳... 详细信息

杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒,可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白,制备疫苗。研究发现,在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳动物细胞中增值,对细胞毒性小,转导成功的细胞可以稳定传代并有效表达外源基因,哺乳动物细胞比昆虫细胞对蛋白质具有更好的翻译后修饰,表达出的蛋白结构更接近天然蛋白。因此,杆状病毒可作为一种新型的哺乳动物细胞基因转移载体,用于表达外源基因及作为一种基因治疗载体,具有巨大潜力,日益受到人们的关注。本文对杆状病毒作为一种表达载体在哺乳动物细胞中表达的研究进展进行了综述。

关键词：杆状病毒外源基因哺乳动物细胞

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口蹄疫病毒受体羊源整联蛋白β6亚基配体结合域的原核表达、纯化及鉴定

引用

华北农学报 2009年第5期24卷 55-58页

作者：薛霜独军政高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHT... 详细信息

利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRO/β6LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达重组羊β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达并利用镍离子亲和树脂对其纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法分析鉴定表达产物。成功构建了pPRO/β6LBD原核表达载体,实现了羊FMDV受体整联蛋白亚基β6LBD在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为33 kDa,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。用本试验室保存的抗FMDV受体猪源整联蛋白β6亚基LBD的单克隆抗体进行ELISA和Western blot检测,显示该单抗可与重组目的蛋白发生特异性反应,证明纯化后的蛋白与特异性抗体具有良好的特异性反应及抗原活性。为深入研究整联蛋白受体β6亚基在羊体内的分布及其在FMDV致病过程中的作用机制奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域原核表达

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猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

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生物技术通报 2009年第4期25卷 95-98页

作者：李建强柳纪省程杰兰喜殷相平李宝玉李学瑞杨彬娄忠子吴润中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

以猪源冠状病毒(Porcine coronavirus)TGEV纤突蛋白基因序列为基础,利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型,4株中国分离株... 详细信息

以猪源冠状病毒(Porcine coronavirus)TGEV纤突蛋白基因序列为基础,利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型,4株中国分离株分别归属于以上3个基因型,属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异,而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH-98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近,而所有中国分离株抗原表位没有明显差别,表明TGEV在中国没有显著的变异。

关键词：猪源冠状病毒猪传染性胃肠炎纤突蛋白生物信息学分析

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羊痘病毒载体研究进展

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中国畜牧兽医 2009年第5期36卷 98-101页

作者：朱学亮张强杨帆才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘病毒基因组较大,可容纳较大的外源基因。重组病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达载体主要有取代型的重组病毒载体和重组的病毒... 详细信息

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘病毒基因组较大,可容纳较大的外源基因。重组病毒载体是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达载体主要有取代型的重组病毒载体和重组的病毒-质粒载体。作者综述了羊痘病毒载体构建策略和羊痘病毒活载体疫苗研究的最新进展。

关键词：羊痘病毒转移载体重组病毒载体疫苗

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口蹄疫疫苗研究新进展

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生物技术通报 2009年第3期25卷 1-5页

作者：杜进鑫王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一。接种疫苗是预防该病的重要手段之一,而研制高质量、安全有效的疫苗,不但是决定疫苗免疫效果的关键,也是成功预防、控制直至最终消灭口蹄疫的先决条件。目前,除传统疫苗仍然在口蹄疫防控中扮演重要角色... 详细信息

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一。接种疫苗是预防该病的重要手段之一,而研制高质量、安全有效的疫苗,不但是决定疫苗免疫效果的关键,也是成功预防、控制直至最终消灭口蹄疫的先决条件。目前,除传统疫苗仍然在口蹄疫防控中扮演重要角色以外,国内外诸如亚单位疫苗、载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、可饲疫苗和多表位疫苗等的研究和探索已全面展开,有望为口蹄疫的有效防控提供新的途径。

关键词：口蹄疫疫苗进展

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羊痘病毒P32蛋白的研究进展

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中国畜牧兽医 2009年第10期36卷 129-132页

作者：赵志荀王建科张强中国农业科学院兰州兽医研究所家畜病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

P32蛋白是所有羊痘病毒具有的结构蛋白之一,含有重要的免疫原性决定簇。P32蛋白既是致病的关键因素,也是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分。作者就羊痘病毒P32蛋白的基因组结构、抗原表位及P32蛋白应用于羊痘病毒诊断和免疫... 详细信息

P32蛋白是所有羊痘病毒具有的结构蛋白之一,含有重要的免疫原性决定簇。P32蛋白既是致病的关键因素,也是激发机体产生抗体并产生保护性免疫的主要成分。作者就羊痘病毒P32蛋白的基因组结构、抗原表位及P32蛋白应用于羊痘病毒诊断和免疫方面的研究进展作一综述。

关键词：羊痘病毒 P32蛋白诊断免疫

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RNA干扰及其抗口蹄疫病毒复制的研究进展

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中国畜牧兽医 2009年第7期36卷 197-201页

作者：陈启伟王永录中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)介导的序列特异性RNA降解作用。已经证明,在植物和昆虫细胞中RNAi是其主要的抗病毒机制,但迄今为止,几乎没有发现哺乳动物细胞感染病毒后能自发诱导有效的抗病毒R... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)介导的序列特异性RNA降解作用。已经证明,在植物和昆虫细胞中RNAi是其主要的抗病毒机制,但迄今为止,几乎没有发现哺乳动物细胞感染病毒后能自发诱导有效的抗病毒RNAi反应。为此,通过人工方法在哺乳动物细胞中建立有效的抗病毒RNAi便成了国内外学者孜孜探索的重要抗病毒策略之一。目前,RNAi的分子机制及其功能仍然有待更加深入地研究与阐明,但它作为一种反向遗传学手段已经在基因组结构与功能研究中得到广泛运用,不仅在抗多种哺乳动物病毒的研究方面取得了令人振奋的结果,而且已作为一种治疗策略运用于人类抵抗重大遗传性和病毒性疾病的研究当中。笔者对RNAi的分子机制,及其抗口蹄疫病毒复制的相关研究进展作了有关介绍。

关键词： RNA干扰口蹄疫病毒抗病毒

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口蹄疫细胞免疫研究进展

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生物技术通报 2009年第5期25卷 14-17,20页

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着对口蹄疫疫苗及其免疫特性的深入研究和探讨,许多学者对口蹄疫细胞免疫机制的研究更进了一步,就参与口蹄疫细胞免疫的各类细胞及细胞免疫与新疫苗设计的研究进... 详细信息

口蹄疫是世界性重大动物疫病之一,接种疫苗是预防该病的重要策略之一。随着对口蹄疫疫苗及其免疫特性的深入研究和探讨,许多学者对口蹄疫细胞免疫机制的研究更进了一步,就参与口蹄疫细胞免疫的各类细胞及细胞免疫与新疫苗设计的研究进展作一综述。

关键词： FMD 细胞免疫进展

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猪繁殖与呼吸综合征病毒兰州分离株ORF3基因的克隆及杆状病毒载体的构建

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西北农业学报 2009年第3期18卷 1-5页

作者：赵娜田宏祁燕蓉满自萍吴锦艳尚佑军何生虎刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 宁夏大学农学院宁夏银川750021

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA... 详细信息

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF3序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃Lanzhou株的ORF3基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBac HTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac HTA-ORF3,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac HTA-ORF3转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF3。成功构建了PRRSV Lanzhou株ORF3基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF3基因克隆杆状病毒表达载体

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