检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2008年第4期24卷 358-361页

作者：独军政高闪电常惠芸丛国正林彤邵军军刘湘涛才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

目的:克隆猪FMDV受体β3亚基的配体结合域(LBD)基因,利用原核细胞表达β3亚基的LBD片段,纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:利用RT-PCR方法从FMDV实验感染猪的肺组织中克隆β3亚基的LBD基因,将其与pGEMT-easy载体相连构建pGEM/β3 L... 详细信息

目的:克隆猪FMDV受体β3亚基的配体结合域(LBD)基因,利用原核细胞表达β3亚基的LBD片段,纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体。方法:利用RT-PCR方法从FMDV实验感染猪的肺组织中克隆β3亚基的LBD基因,将其与pGEMT-easy载体相连构建pGEM/β3 LBD,经BamHⅠ/XhoⅠ酶切后回收β3LBD片段,与同样酶切处理的原核表达载体pGEX4T-1相连,构建原核表达质粒pGEX/β3 LBD,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达β3LBD蛋白。纯化目的蛋白后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性。结果:猪β3亚基的LBD基因含有507个核苷酸,编码169个氨基酸,猪β3 LBD基因与牛、人、黑猩猩、猕猴、马、犬、挪威大鼠、家鼠、和鸡的β3 LBD基因核苷酸序列同源性分别为90·3%、92·3%、92·1%、91·3%、90·5%、90·3%、87·8%、85·2%、79·5%。哺乳动物的β3亚基LBD基因同源性较高,与鸡的同源性较低。实现了重组猪β3LBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为44000,制备的兔多克隆抗体效价达1∶12800以上。结论:实现了猪FMDV受体β3 LBD的基因克隆、原核表达和多克隆抗体的制备,为深入研究受体β3亚基在FMDV感染过程中的作用机制奠定了基础。

关键词： FMDV病毒受体猪β3LBD基因原核表达多克隆抗体

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布鲁氏菌S2、M5及A19疫苗不同免疫程序对细胞因子的影响

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免疫学杂志 2020年第11期36卷 984-993页

作者：孙晶晶吴锦艳陈妍曹小安尹双辉周建华兰喜李学瑞刘永生尚佑军中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室730046

目的通过对不同布鲁氏菌疫苗免疫接种途径与免疫效果之间的关系来评价商品化布鲁氏菌疫苗免疫羊后非应答组与应答组之间细胞因子分泌水平的影响,进一步探索其合理的免疫方案。方法采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RBPT)方法检... 详细信息

目的通过对不同布鲁氏菌疫苗免疫接种途径与免疫效果之间的关系来评价商品化布鲁氏菌疫苗免疫羊后非应答组与应答组之间细胞因子分泌水平的影响,进一步探索其合理的免疫方案。方法采用试管凝集试验(SAT)和虎红平板凝集试验(RBPT)方法检测羔羊进行疫苗免疫后是否产生抗体分为非应答组和应答组,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测羊血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ细胞免疫水平。结果羔羊灌服接种S2疫苗免疫14 d内,非应答组细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均高于对照组,且IL-10表达量极显著升高(P<0.01),在免疫14 d时MCP-1的表达量显著升高(P<0.05);与非应答组相比,应答组IL-2、IL-4、IL-6和IL-10表达量均降低,MCP-1表达量升高,IFN-γ表达量则差异不大,且IL-2表达量极显著降低(P<0.01),在免疫7 d时IL-4和IL-6的表达量显著降低(P<0.05)。灌服接种M5疫苗免疫14 d内,非应答组与对照组相比,细胞因子IL-2、IL-4、IL-6和MCP-1的表达量先降低后升高,IL-10和IFN-γ表达量高于对照组;与非应答组相比,应答组IL-6和IFN-γ表达量升高,IL-4、IL-10和MCP-1先升高后降低,IL-2表达量则极显著降低(P<0.01),IL-4、IL-10、在免疫7 d时MCP-1和IFN-γ的表达量极显著升高(P<0.01)。皮下接种M5疫苗免疫14 d内,非应答组细胞因子IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均高于对照组,IL-2和IL-4,IL-6表达量先降低后升高,IFN-γ和MCP-1表达量显著升高(P<0.05);与非应答组相比,应答组IL-2、IL-6和IL-10的表达量均降低,IL-4的表达量升高,MCP-1和IFN-γ表达量则差异不大,且IL-2表达量极显著降低(P<0.01),在免疫14 d时IL-4的表达量显著升高(P<0.05)。皮下接种A19疫苗免疫14 d内,非应答组IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1表达量均低于对照组,IL-2和IFN-γ表达量先升高后降低;与非应答组相比,应答组IL-4、IL-10、MCP-1和IFN-γ表达量均升高,IL-6表达量先升高后降低,IL-2的表达量则显著降低(P<0.05),在免疫7 d时IL-4和MCP-1的表达量显著升高(P<0.05),在免疫14 d时IL-4的表达量极显著升高(P<0.01),IL-10、MCP-1和IFN-γ的表达量显著升高(P<0.05)。结论 M5疫苗皮下注射接种免疫效果优于灌服接种;在灌服接种方面:S2疫苗免疫效果优于M5疫苗;在皮下注射接种方面:M5疫苗免疫效果优于A19疫苗。本研究为制定羊布鲁氏菌病合理的疫苗免疫方案提供了科学依据。

关键词：布鲁氏菌病绵羊布鲁氏菌疫苗细胞因子

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口蹄疫病毒O、A、AsiaⅠ型定型诊断胶体金免疫层析方法的建立

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中国农业科学 2008年第11期41卷 3801-3808页

作者：蒋韬梁仲陈涓何继军吕律马维民刘在新刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室

【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、AsiaI型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法(GICA)。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O、A、AsiaI型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/... 详细信息

【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、AsiaI型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法(GICA)。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O、A、AsiaI型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/AF72and AsiaⅠ/China05抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。经试验条件优化,组装形成胶体金定型诊断试剂盒。【结果】本试验研制的口蹄疫定型试剂盒具有良好的灵敏度,可检测到7.8×104LD50(1﹕128倍稀释乳鼠毒)的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同,说明其有较好的重复性;特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原,如猪水疱病抗原(SVD)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)等病毒时无交叉反应;试剂盒对206份已知血清型田间及实验室样品的符合率试验,O、A、AsiaⅠ型和阴性样本的符合率分别为92.45%、91.66%、92.75%、100%定型准确率94.58%。试剂盒在4℃下可保存6个月。【结论】本试验研发的口蹄疫病毒胶体金定型诊断试剂盒是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。

关键词： O、A、AsiaI型口蹄疫病毒胶体金免疫层析法

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山羊支原体山羊肺炎亚种甘肃株的分离及鉴定

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中国兽医学报 2011年第3期31卷 352-356页

作者：郭晗储岳峰赵萍高鹏程贺英樊祜卿冯小明逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

2007年甘肃某地羊场山羊发生以呼吸困难、咳嗽和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病,经临床诊断为羊支原体性肺炎。用改良的Thiaucourt's培养基对病山羊的肺组织进行病原分离,成功分离到1株支原体M1601,经菌落形态观察、生化试验、PCR鉴... 详细信息

2007年甘肃某地羊场山羊发生以呼吸困难、咳嗽和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病,经临床诊断为羊支原体性肺炎。用改良的Thiaucourt's培养基对病山羊的肺组织进行病原分离,成功分离到1株支原体M1601,经菌落形态观察、生化试验、PCR鉴定、以16S rRNA基因序列构建的分子进化树分析和动物致病性试验,证明该分离株属于山羊支原体山羊肺炎亚种。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种山羊传染性胸膜肺炎 PCR鉴定 16S rRNA

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我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病研究进展

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植物保护学报 2005年第1期32卷 97-103页

作者：陈声祥张巧艳浙江省农业科学院农业部病毒学与生物技术重点开放实验室杭州310021

上世纪60年代初我国华东和华北地区分别发现了水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病,后来都分别发生了2次大流行,同时都以病害防治为目标分别开展了研究,探明了当地病害发生规律,提出了相应的防治方法,获得了不同程度的防病效果。80年代以来,水... 详细信息

上世纪60年代初我国华东和华北地区分别发现了水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病,后来都分别发生了2次大流行,同时都以病害防治为目标分别开展了研究,探明了当地病害发生规律,提出了相应的防治方法,获得了不同程度的防病效果。80年代以来,水稻黑条矮缩病的发生报道仅限于华东地区局部地市,玉米粗缩病的发生涉及华北、东北、西北、西南和华中地区13个省市。根据各地对两病病原形态、寄主及症状、介体昆虫及传病特性等方面相似性的报道,提出了我国玉米粗缩病与水稻黑条矮缩病病原异同性问题。经近10年来对两病用生物学和分子生物学方法进行比较鉴定,证明我国玉米粗缩病和水稻黑条矮缩病病原同属水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。同时基本探明了水稻黑条矮缩病在浙江杂交稻区和华北玉米区的再次流行成灾的原因,提出了相应的防治措施.并有效地控制了病害的流行危害。

关键词：玉米粗缩病研究进展水稻黑条矮缩病毒分子生物学方法病害发生规律 60年代病害防治防治方法防病效果 80年代华东地区华中地区病原形态介体昆虫比较鉴定防治措施华北流行相似性寄主成灾稻区

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副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2009年第7期39卷 597-601页

作者：冯小明储岳峰贺英高鹏程赵萍郭晗樊祜卿逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体... 详细信息

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL,37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1∶320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1∶15000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min。待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性。特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。

关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

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筛选细菌毒力基因方法的研究进展

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中国兽医学报 2011年第2期31卷 288-291页

作者：张念章储岳峰贺英逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从... 详细信息

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从生物信息学、筛选差异表达基因等4个方面介绍了筛选细菌毒力基因的方法及其应用,并综合了研究致病菌与宿主间相互作用关系的方法。为发现和研究致病菌新的毒力因子,理顺病原与宿主关系开拓了思路。

关键词：细菌毒力基因筛选方法应用

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口蹄疫病毒的抗原结构学的研究进展

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 253-256页

作者：刘亚丽丁耀忠马小元张杰张永光中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属,完整的病毒粒子由衣壳包裹着单股正链RNA构成。FMDV基因组全长约为8.5 kb,主要分为5＇端非编码区、编码区、3＇端非编码区和多聚腺苷酸（poly（A））。5... 详细信息

口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属,完整的病毒粒子由衣壳包裹着单股正链RNA构成。FMDV基因组全长约为8.5 kb,主要分为5＇端非编码区、编码区、3＇端非编码区和多聚腺苷酸（poly（A））。5＇端非编码区的5端共价连接病毒自身编码的非结构蛋白（VPg）,而且还包含有S-片段、

关键词：口蹄疫病毒 FMDV 抗原结构非结构蛋白衣壳抗原位点正链病毒科病毒粒子编码区

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒结构蛋白的研究进展与应用

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中国农学通报 2010年第23期26卷 1-6页

作者：王猛刘永生张杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室兰州730046

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科的单股正义RNA病毒。病毒基因组共有15kb,编码RNA复制酶(ORF1a和ORF1b)、糖基化蛋白(GP2-GP5)、基膜蛋白M(ORF6)和核衣壳蛋白N(ORF7)。其中每一个PRRSV的结构蛋白在病毒的感染及免疫... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属于动脉炎病毒科的单股正义RNA病毒。病毒基因组共有15kb,编码RNA复制酶(ORF1a和ORF1b)、糖基化蛋白(GP2-GP5)、基膜蛋白M(ORF6)和核衣壳蛋白N(ORF7)。其中每一个PRRSV的结构蛋白在病毒的感染及免疫原性等的作用均不相同。笔者对PRRSV结构蛋白最新的研究进展及应用进行综述。

关键词：糖基化蛋白免疫原性小结构蛋白异源二聚体

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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第10期24卷 975-978页

作者：高闪电常惠芸独军政王景锋周建华赵建勇谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒... 详细信息

目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价,并以Western blot鉴定其特异性。结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42000的GST-β6LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性。结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体,为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒受体整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体

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