检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2007年第9期37卷 737-741页

作者：施程洪张强吴国华颜新敏鞠厚斌李健朱海霞朱彩珠谢芳韩若婵才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同... 详细信息

提取山羊痘病毒温度敏感株基因组DNA，用HindⅢ酶切，随机克隆到pUC18质粒中，限制性内切酶片段电泳分析和序列测定结果表明，克隆到4个不同大小的HindⅢ片段pUA、pUB、pUC和pUD。随后，将它们和羊痘病毒Pellor（AY077835）株进行了同源性比较，发现核苷酸同源性为90。0％～94．5％，氨基酸同源性为83．0％～91．4％。选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入P11P7.5-LacZ报告基因，构建了pUAl、pUBl、pUCl和pUDl共4个重组载体质粒。通过脂质体分别转染山羊痘病毒感染的BHK-21细胞，在X-gal存在条件下经蓝白斑筛选重组病毒，获得1株重组病毒，证明筛选出了1个复制非必需区片段。

关键词：山羊痘病毒非必需区基因克隆序列分析转染

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T7 RNA聚合酶表达系统的真核化及其偶联表达系统的建立

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生物工程学报 2007年第5期23卷 947-952页

作者：郑海学靳野尹双辉郭慧琛尚佑军白兴文刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院研究生院北京100081

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型... 详细信息

为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定向克隆进原核载体pET-40a-c(+)的T7启动子下游,得到的重组质粒pIERS-EGFP-E。用该质粒分别转染上述两种细胞,在紫外显微镜下都能够观察到绿色荧光,表明真核化的T7RNAP偶联表达系统建立。并利用流式细胞仪对偶联表达水平进行了分析。这为利用该系统真核高效表达外源蛋白奠定了坚实的基础。用实验证明了FMDV5′端含有IERS具有介导非帽依赖性的翻译的功能,为以IERS为基础的双顺反子表达系统的建立及深入研究IERS与相关蛋白的功能奠定了基础。T7RNAP偶联表达体系是一种良好的外源基因表达体系。

关键词：口蹄疫病毒 IERS T7RNA聚合酶表达系统偶联表达系统

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猪口蹄疫病毒受体β8亚基的基因克隆与分子特征

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畜牧兽医学报 2007年第11期38卷 1267-1272页

作者：独军政高闪电常惠芸丛国正邵军军林彤刘湘涛才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨... 详细信息

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨基酸,其中信号肽由42个氨基酸组成,胞外域由637个氨基酸组成,含有7个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和49个半胱氨酸残基,跨膜区由30个氨基酸组成,胞浆域由58个氨基酸组成,猪β8基因与牛、人、犬、猕猴、家鼠和挪威大鼠的β8基因核苷酸序列同源性分别为94.3%、91.4%、91.7%、91.4%、83.5%、83.5%,推导的氨基酸序列同源性分别为95.0%、91.8%、92.8%、91.5%、84.0%、84.8%。猪与牛β8亚基同源性最高。猪β8亚基存在复杂多变的二级结构,其中1-42、680-709位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较小,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究β8亚基在口蹄疫感染过程中所扮演的角色奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体猪β8基因分子特征

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双峰驼口蹄疫病毒受体β6亚基基因的分子特征

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中国生物工程杂志 2007年第8期27卷 63-68页

作者：独军政常惠芸高闪电王景锋邵军军丛国正林彤才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。研究表明,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染偶蹄动物,且αvβ6是主要的口蹄疫病毒受体。首次从健康双峰驼肺组织中克隆到了β6亚基基因并进行了比较... 详细信息

病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。研究表明,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染偶蹄动物,且αvβ6是主要的口蹄疫病毒受体。首次从健康双峰驼肺组织中克隆到了β6亚基基因并进行了比较分析。结果显示,双峰驼β6基因的编码区含有2367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,其中信号肽由26个氨基酸组成;胞外域由681个氨基酸组成,含有8个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和58个半胱氨酸(Cys)残基;跨膜区由29个氨基酸组成(708～736aa);胞浆域由52个氨基酸组成,含有一个NPLY核心基序和一个潜在的糖基化位点(NVT),该基因在GenBank中的登录号为EF613220。双峰驼β6基因与牛、猪、羊、人、小鼠、挪威大鼠β6基因的核苷酸序列同源性分别为91.1%、91.8%、90.6%、90.5%、83.7%、84.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.3%、93.4%、93.4%、93.7%、88.7%、88.6%。偶蹄动物(双峰驼、牛、羊、猪)的β6基因同源性较高,在遗传进化树上同属于一个亚群,表明β6亚基可能与口蹄疫病毒的宿主范围有关。

关键词：口蹄疫病毒受体双峰驼β6基因分子特征

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口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测

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生物工程学报 2007年第3期23卷 540-545页

作者：马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细... 详细信息

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌性表达

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牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及分子特征

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畜牧兽医学报 2007年第2期38卷 190-195页

作者：独军政常惠芸丛国正邵军军林彤高闪电刘湘涛才学鹏谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基... 详细信息

研究发现,4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主,其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示,牛αv亚基基因的编码区含有3147个核苷酸,编码1048个氨基酸,其中信号肽由30个氨基酸组成,胞外域由957个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由32个氨基酸组成;在890和891位氨基酸之间有1个蛋白酶裂解位点(KR-D);胞外域含有13个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)、2个Ca2+结合位点[DX(D/N)XDGXXD]、18个半胱氨酸残基。该基因在GenBank中的登录号为DQ871215。牛αv基因与猕猴、家鼠、犬、人、鸡的αv基因的核苷酸序列同源性分别为91.0%、85.7%、90.1%、91.2%、73.1%,推导的氨基酸序列同源性分别为94.7%、91.6%、96.3%、95.0%、81.6%。牛αv亚基存在复杂多变的二级结构,这是其具有多种生物学功能的分子基础,其中1-30位、988-1017位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较差,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究口蹄疫病毒与宿主细胞的相互关系奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒受体牛αv基因克隆分子特征

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口蹄疫病毒P1+3CD基因重组腺病毒的构建

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中国人兽共患病学报 2007年第3期23卷 222-226页

作者：李志勇柳纪省张兴旺王辉殷相平兰喜李宝玉谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的构建包含有O型口蹄疫病毒(FMDV)强毒结构蛋白(P1)基因及弱毒非结构蛋白(3CD)基因的重组腺病毒,为进一步研制FMD活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1、3CD编码区的目的基因。P1基因经BglⅡ和XhoⅠ,3CD基因经... 详细信息

目的构建包含有O型口蹄疫病毒(FMDV)强毒结构蛋白(P1)基因及弱毒非结构蛋白(3CD)基因的重组腺病毒,为进一步研制FMD活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1、3CD编码区的目的基因。P1基因经BglⅡ和XhoⅠ,3CD基因经XhoⅠ和XbaⅠ双酶切后与经BglⅡ和XbaⅠ双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV连接。将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌内同源重组获得重组腺病毒质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观测细胞病变及报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒。结果在pAd Track-CMV载体中成功克隆了P1+3CD基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞后可观测到典型的细胞病变与绿色荧光蛋白的表达。结论成功获得了含有FMD P1+3CD基因的重组腺病毒,为FMD活载体疫苗的研制提供了依据。

关键词：口蹄疫病毒 P1+3CD基因重组腺病毒

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口蹄疫病毒P12A-3C免疫原基因在百脉根中的遗传转化与表达

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中国人兽共患病学报 2007年第3期23卷 236-239,247页

作者：王炜张永光潘丽王永录方玉珍蒋守田张维德吕建亮孙元智晓莹黄振华刘力宽中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

目的利用植物反应器研究口蹄疫转基因植物疫苗是近些年来科学家研究的热点,本研究以豆科牧草百脉根为转化受体,将口蹄疫病毒P12A-3C基因通过根癌农杆菌介导法导入百脉根基因组。方法百脉根外植体经过浸菌,抗性培养基上愈伤、出芽和生根... 详细信息

目的利用植物反应器研究口蹄疫转基因植物疫苗是近些年来科学家研究的热点,本研究以豆科牧草百脉根为转化受体,将口蹄疫病毒P12A-3C基因通过根癌农杆菌介导法导入百脉根基因组。方法百脉根外植体经过浸菌,抗性培养基上愈伤、出芽和生根等阶段。结果最终获得了转基因抗性植株。结论对转基因植株进行PCR、RT-PCR检测,表明外源基因整合在植物染色体基因组,并且具有转录活性,ELISA检测表明,转基因植株表达出外源目的蛋白。

关键词：口蹄疫百脉根转基因植物疫苗

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丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2007年第11期37卷 940-943页

作者：储岳峰逯忠新赵萍高鹏程贺英中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma ***,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他... 详细信息

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma ***,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他病原菌不能扩增出任何条带,它最低能够检测出10 pg的Mmc DNA,说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示,对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段,表明,该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。

关键词：丝状霉形体山羊亚种巢式PCR 山羊传染性胸膜肺炎

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用原位杂交技术对牛组织中FMDV RNA检测和定位

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畜牧兽医学报 2007年第12期38卷 1341-1344页

作者：邵军军常惠芸林彤丛国正独军政谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等... 详细信息

采用原位杂交技术对6头试验牛易感染组织中的FMDVRNA进行了检测和定位。结果显示，接毒后7～28d4头牛舌上皮组织、7～21d的喉咽部有强阳性染色；接毒后35d的牛及正常对照牛舌上皮没有阳性染色；接毒牛及对照牛的扁桃体、淋巴结和蹄叉等其他组织中均没有阳性染色，表明牛舌上皮和喉咽部上皮组织中感染了FMDV，本研究为进一步阐明FMDV在宿主体内的持续感染机理提供极有价值的线索。

关键词： FMDV 原位杂交牛

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