检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2007年第16期52卷 1903-1907页

作者：李志勇易咏竹殷相平张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒***-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功... 详细信息

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒***-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得携带有FMDV全长ORF的重组病毒Bm-ORF.免疫荧光技术证明,重组病毒能够正确表达插入的外源基因.将获得的重组病毒Bm-ORF感染家蚕5龄起幼虫,双抗体夹心ELISA法和电子显微镜观察证明,目的基因在蚕体中获得较高水平表达并组装成空衣壳.用蚕表达产物作抗原制备疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体.免疫后21d进行病毒攻击保护实验,获得了2/4的完全保护.

关键词： FMDV ORF 家蚕杆状病毒载体免疫原性疫苗

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牛流行热病毒糖蛋白G_1抗原表位在毕赤酵母中的表达和抗原性鉴定

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微生物学通报 2007年第5期34卷 843-847页

作者：郑福英蔺国珍邱昌庆原魁章宋军英中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,亚克隆进表达载体pPIC9K,构建重组载体pPIC9K-G1,线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418压力和PCR法筛选阳性重组酵母进行诱导表达。经SDS-PAGE、脱糖基化分析、Western ... 详细信息

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,亚克隆进表达载体pPIC9K,构建重组载体pPIC9K-G1,线性化后电转化毕赤酵母GS115,通过G418压力和PCR法筛选阳性重组酵母进行诱导表达。经SDS-PAGE、脱糖基化分析、Western blot、ELISA、兔体免疫实验和特异性分析,表明该基因在GS115中表达并进行了适度的糖基化,表达蛋白有良好的生物学活性和特异性,可作为包被抗原,开发ELISA诊断试剂盒。

关键词：牛流行热病毒 G1抗原表位毕赤酵母表达鉴定

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小反刍兽疫病毒的N、M、F及H基因的序列测定和分析

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动物医学进展 2007年第11期28卷 8-11页

作者：赵文华杨仕标蒋梅朱建波李华春肖雷张念祖农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF... 详细信息

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。

关键词：小反刍兽疫病毒 N M F及H基因逆转录-聚合酶链反应同源性疫苗株

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转亚洲Ⅱ型口蹄疫病毒VP1基因烟草研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第1期35卷 33-36页

作者：王文秀顾节清陈德坤邓文潘丽王宝琴王永录张永光西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行... 详细信息

将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因克隆到植物表达质粒pB in438中,构建了植物表达载体pB in-VP 1,通过根癌农杆菌叶盘转化法,将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒结构蛋白VP 1基因导入NC 89烟草基因组中,对经卡那霉素筛选获得的20株抗性植株,进行PCR和RT-PCR检测。结果表明,抗性烟草植株中已整合了VP 1基因。

关键词：亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 VP1基因植物表达载体

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重组猪瘟病毒E2基因逆转录病毒载体的构建及其表达活性

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中国兽医学报 2007年第4期27卷 460-463页

作者：田宏刘湘涛林彤吴锦艳龚真莉郑海学代兴国孙世琪尚佑军谢庆阁张彦明中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒... 详细信息

从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,并在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选表达猪瘟E2基因的细胞株。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA检测表明,所筛的细胞细胞系能稳定表达猪瘟E2基因,而且表达产物具有良好的生物学活性。

关键词：猪瘟C株E2基因重组逆转录病毒载体 PK15细胞基因表达

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猪流行性腹泻病毒纤突蛋白基因克隆与序列分析

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农业生物技术学报 2007年第4期15卷 562-566页

作者：李建强柳纪省兰喜程杰杨敏吴润殷相平李宝玉李学瑞杨彬甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)DX株纤突蛋白基因进行了克隆与测序。结果表明,该基因核苷酸序列长为4152bp,推导氨基酸序列为1383aa,与比较毒株氨基酸同源性都在90%以上。系统发生树分析结果表明,比较毒株... 详细信息

对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)DX株纤突蛋白基因进行了克隆与测序。结果表明,该基因核苷酸序列长为4152bp,推导氨基酸序列为1383aa,与比较毒株氨基酸同源性都在90%以上。系统发生树分析结果表明,比较毒株可分为3个基因群,而且每个群的毒株均来自同一个国家。利用生物软件分析结果表明PEDV发生微小的变异,尤其在韩国变异明显,而DX株与中国JS-2004-2株亲缘关系很近。

关键词：猪源冠状病毒猪流行性腹泻病毒纤突蛋白基因克隆特征分析

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O型口蹄疫病毒OA58株3C基因的克隆与真核表达

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中国兽医科学 2007年第1期37卷 20-23页

作者：刘萍丛国正杨孝朴沈小燕邵军军独军政林彤王光华易华山常惠芸谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒... 详细信息

利用RT-PCR技术扩增获得了长度约640 bp的口蹄疫病毒目的基因,回收片段后与pMD18-T载体进行连接,测序结果表明获得了口蹄疫病毒3C基因。将重组质粒pMD18-3C与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切后,进行定向亚克隆,对重组表达质粒pEGFP-3C进行PCR、酶切鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒所含的3C基因读码框正确。用pEGFP-3C转染BHK-21细胞,荧光显示目的基因EGFP发出绿色荧光;对3C转录的mRNA进行RT-PCR鉴定,证实3C基因在BHK-21细胞中得到了表达。

关键词：口蹄疫病毒 3C基因真核表迭

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高山冰缘植物粗脂肪、可溶性糖和类黄酮的含量变异与环境适应关系的研究

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冰川冻土 2007年第6期29卷 947-952页

作者：刘艳红安黎哲郭凤霞徐世健中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 兰州大学教育部干旱与草地农业生态重点实验室甘肃兰州730000 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所甘肃兰州730000

以乌鲁木齐河源区3个植被垂直分布带的22种主要冰缘植物花期叶片为实验材料,分析了叶片的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮的含量.研究结果表明:同一植被带有些植物之间的这3种生理抗性物质含量接近,有些植物的含量却存在显著差异,与植物自身... 详细信息

以乌鲁木齐河源区3个植被垂直分布带的22种主要冰缘植物花期叶片为实验材料,分析了叶片的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮的含量.研究结果表明:同一植被带有些植物之间的这3种生理抗性物质含量接近,有些植物的含量却存在显著差异,与植物自身的遗传特性和采取的生态对策有关.从样品平均含量值的统计分析看,高山流石堆植被的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮含量高于垫状和高山草甸植被的含量,3个分布带植物的可溶性糖平均含量存在显著差异,类黄酮平均含量不存在显著差异.多数高山冰缘植物积累高含量的粗脂肪、可溶性糖和类黄酮,提高了植物的抗冻和抗紫外线辐射的能力,是植物适应冰缘环境的物质基础,这些生理抗性物质在含量上的差异说明可溶性糖是增加冰缘植物抗冻性的关键物质.

关键词：高山冰缘植物生理抗性物质含量变异环境适应

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牛朊蛋白27-30基因的克隆与表达

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 277-281页

作者：路伟张鹏张杰刘永生卫广森陈豪泰姜海霞朱小玲中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110161 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶... 详细信息

利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp-T中扩增出约420 bp的目的基因(PrP^(27-30)基因)。将PrP^(27-30)基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoR I和Not I进行双酶切,T4 DNA连接酶作用后,转化至*** JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^(27-30) pPIC9K-boPrP^(27-30)经限制性核酸内切酶Sal I线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^(27-30)。GW115/pPIC9K_boPrP^(27-30)经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^(27-30)基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27 Ku。能够被单克隆抗体SAF-70识别。

关键词：牛PrP^27-30基因克隆表达

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以T7 RNA聚合酶为基础的病毒拯救系统研究进展

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动物医学进展 2007年第11期28卷 62-65页

作者：郑海学常艳艳靳野刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述。介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一... 详细信息

文章界定了与病毒拯救相关的一些概念,对T7RNA聚合酶(RNAP)为基础的病毒拯救系统研究进行概述。介绍了体外拯救方法及其缺点,并以最常用的痘病毒载体表达T7RNAP为基础的体内拯救方法为例,介绍了该方法对病毒拯救的研究进展及缺点,进一步介绍了无痘病毒表达T7RNAP细胞系的RNA病毒拯救体系的建立和研究,为病毒拯救,特别是以T7RNAP为基础的病毒拯救试验方案提供参考。

关键词： T7 RNA聚合酶病毒拯救感染性克隆反向遗传操作技术

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