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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：卢曾军曹轶梅刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

构建了两株O型口蹄疫病毒(FMDV)基因重组腺病毒,分别带有O/China／99 P1-2A-3C(adv-p12x3c)和P1- 2A-3CD(adv-p12x3cd)基因。用这两株重组腺病毒分别免疫豚鼠,结果adv-p12x3c重组腺病毒可以刺激豚鼠产生保护性的免疫反应,1×108-2&#... 详细信息

构建了两株O型口蹄疫病毒(FMDV)基因重组腺病毒,分别带有O/China／99 P1-2A-3C(adv-p12x3c)和P1- 2A-3CD(adv-p12x3cd)基因。用这两株重组腺病毒分别免疫豚鼠,结果adv-p12x3c重组腺病毒可以刺激豚鼠产生保护性的免疫反应,1×108-2×108pfu的重组腺病毒肌肉注射免疫豚鼠,可以保护豚鼠抵抗10 000豚鼠半数感染量(GID50)的同型口蹄疫强毒的攻击,保护率分别达到5／6(83．3％)和6/6(100％)。而相同免疫剂量的adv-p12x3cd重组腺病毒免疫组仅产生了部分的免疫保护,保护率仅为1/6。Ad5野生型腺病毒和PBS注射对照组均未产生任何的免疫保护效果。用5×108pfu 的adv-p12x3c重组腺病毒肌肉注射免疫猪,并以健康非免疫猪作为对照组。用液相阻断ELISA方法检测FMDV特异性抗体变化,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况。在免疫后第28天,经肌肉接种攻击100个猪半数感染量(PID50)的FMDV猪体适应毒。经过11d的临床观察,结果,非免疫对照组猪于攻毒后24h即开始发病,至72h后对照组所有猪均出现典型的口蹄疫临床症状。而重组腺病毒免疫猪在攻毒后第7天仍表现正常,至第8天时其中的一头猪出现轻微的临床症状,其余的 3头猪至第11天试验结束时仍表现正常,达到3／4保护。重组腺病毒免疫猪后可出现特异性的体液和细胞免疫应答。

关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒载体疫苗豚鼠猪

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奶牛布病与衣原体病混合感染的PCR诊断

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中国动物保健 2006年第6期8卷 32-33页

作者：邱昌庆周继章曹小安程淑敏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

本文采用PCR技术对发生在甘肃某奶源基地一奶牛场的群发性怀孕母牛流产进行病原检测,证明是此次流产由布鲁氏菌和衣原体混合感染所致。

关键词：奶牛流产布鲁氏菌衣原体 PCR 诊断

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感染动物口蹄疫病毒3ABC抗体的变化规律

感染动物口蹄疫病毒3ABC抗体的变化规律

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：杨苏珍卢曾军曹轶梅李冬贾宁刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室

利用间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种口蹄疫病毒(FMDV)牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的早期变化。试验结果表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48h后全部发病,第3d 3ABC抗体可疑,第5d 3ABC抗体检测阳性,至第8d 3... 详细信息

利用间接ELISA方法(3ABC-I-ELISA),检测了接种口蹄疫病毒(FMDV)牛、羊、猪和同居牛、羊、猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体的早期变化。试验结果表明,4头牛在舌面接种感染FMDV 48h后全部发病,第3d 3ABC抗体可疑,第5d 3ABC抗体检测阳性,至第8d 3ABC抗体全部为阳性;10头同居牛(分别与接种感染猪和羊同居)在同居第7d时未检出 3ABC抗体,在同居15d时,3ABC抗体阳性率仅为30％(3／10表现临床症状)。肌肉接种病毒羊3ABC抗体产生时间与接种病毒牛基本一致。同居羊3ABC抗体产生时间推迟至同居后第8d,至第14d时所有表现临床症状的羊3ABC抗体全部为阳性。肌肉注射感染和同居感染猪,3ABC抗体与临床症状具有很好的对应关系;发病猪最早可于接种病毒后第7d检测到

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC抗体

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禽流感病毒免疫研究进展

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上海畜牧兽医通讯 2006年第1期 16-18页

作者：信爱国宋学林高华峰农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650224 云南省兽医防疫总站 650051

禽流感(avian influenza, AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类全身性或呼吸器官性疫病.禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)为带包膜、分节段的单股负链RNA病毒.该病自然宿主是野生水禽、海鸥和各种海鸟,在野生鸟类中存在15种H... 详细信息

禽流感(avian influenza, AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类全身性或呼吸器官性疫病.禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)为带包膜、分节段的单股负链RNA病毒.该病自然宿主是野生水禽、海鸥和各种海鸟,在野生鸟类中存在15种HA和9种NA亚型,大部分的HA和全部的NA亚型存在野鸭体内[1,2].从迁徙性水禽体内分离到的禽流感病毒是家禽流感的主要感染来源.在哺乳动物、鸡和火鸡体内感染的流感病毒,呈现出高进化率和高变异率[3],说明流感病毒在新的宿主体内生长而导致的适应性变化.鸭子在把流感病毒从自然宿主传播给家禽和哺乳动物中起着重要的作用.随着对流感病毒感染的宿主免疫反应研究的深入,可能为防治AI提供帮助.

关键词：禽流感病毒免疫研究负链RNA病毒 A型流感病毒自然宿主病毒感染野生水禽哺乳动物正粘病毒科 virus

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实时荧光定量RT-PCR技术及其存在的问题和优化方案

实时荧光定量RT-PCR技术及其存在的问题和优化方案

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中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：许小红刘在新包慧芳王雯慧牛继伟中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃农业大学动物医学院甘肃农业大学动物医学院

实时荧光定量RT-PCR技术是近年来发展的一种新型检测技术。由于它具有特异性强、灵敏度高、高通量、定量准确、速度快、全封闭反应以及自动化程度高等特点,目前已成为分子医学和分子生物学研究的重要工具,并在许多领域得到了广泛的应用... 详细信息

实时荧光定量RT-PCR技术是近年来发展的一种新型检测技术。由于它具有特异性强、灵敏度高、高通量、定量准确、速度快、全封闭反应以及自动化程度高等特点,目前已成为分子医学和分子生物学研究的重要工具,并在许多领域得到了广泛的应用。然而,由于诸多因素的限制,该技术还存在一些潜在的问题需要进一步分析、探讨和完善。本文除了对实时荧光定量RT-PCR技术的原理及其在相关领域的应用等做了介绍外,还着重分析、讨论了该技术目前存在的问题及相关优化方案。

关键词：实时荧光定量RT-PCR 原理存在的问题应用

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口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达

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动物医学进展 2006年第4期27卷 72-74,106页

作者：孙德惠独军政常惠芸才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109... 详细信息

将O型口蹄疫病毒Akesu/58株适应细胞培养。用RT-PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白(PEGFPN1)载体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希菌增殖。提取PEGFPN1-3ABC质粒转染入BHK细胞,在荧光显微镜下直接观察表达结果。

关键词：绿色荧光蛋白口蹄疫病毒 3ABC基因表达

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人朊蛋白基因的克隆与原核表达

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甘肃农业大学学报 2006年第3期41卷 11-15页

作者：姜海霞刘永生杨孝朴陈豪泰朱小玲张杰谢庆阁甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．... 详细信息

以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入*** JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化*** BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．

关键词：人朊蛋白基因克隆原核表达

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人成熟叠朊在大肠埃希菌中高效表达

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动物医学进展 2006年第10期27卷 62-65页

作者：路伟张杰刘永生卫广森沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.... 详细信息

以含有人叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒HoPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段homDpl,并将其插入原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pGEX-homDpl。将pGEX-homDpl电转化到宿主菌株BL21(DE3)中,以1.0 mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示人成熟叠朊被大肠埃希菌高效表达。

关键词：成熟叠朊大肠埃希菌表达人

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小RNA病毒基因表达调控研究进展

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动物医学进展 2006年第3期27卷 54-58页

作者：姜明国信爱国杨立芳广西民族学院化学与生态工程学院广西南宁530006 农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650225

小RNA病毒科属于正链RNA病毒,该科各属病毒基因组结构和基因表达机制具有保守性。文章对小RNA病毒科病毒基因表达调控,包括非依赖帽状结构的翻译起始、宿主细胞翻译的关闭、病毒多聚蛋白的加工处理和RNA的复制研究进行综述,为阐明该科... 详细信息

小RNA病毒科属于正链RNA病毒,该科各属病毒基因组结构和基因表达机制具有保守性。文章对小RNA病毒科病毒基因表达调控,包括非依赖帽状结构的翻译起始、宿主细胞翻译的关闭、病毒多聚蛋白的加工处理和RNA的复制研究进行综述,为阐明该科病毒的致病机理和研究真核生物的基因表达调控提供可借鉴的资料。

关键词：小RNA病毒基因表达内部核糖体进入位点 RNA结构元件

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仔猪轮状病毒性腹泻的研究进展

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动物医学进展 2006年第10期27卷 50-54页

作者：王玲蒲万霞常惠芸华兰英索朗斯珠中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050 西藏农牧学院畜牧兽医系西藏林芝860000

仔猪轮状病毒性腹泻是由猪轮状病毒引起的急性肠道传染病,是危害养猪业的主要疾病之一。猪轮状病毒是一种条件性病原,一般情况下呈隐性感染,当环境因素发生变化、免疫力下降时可暴发。目前尚无有效治疗药物,预防该病的有效方法是加强饲... 详细信息

仔猪轮状病毒性腹泻是由猪轮状病毒引起的急性肠道传染病,是危害养猪业的主要疾病之一。猪轮状病毒是一种条件性病原,一般情况下呈隐性感染,当环境因素发生变化、免疫力下降时可暴发。目前尚无有效治疗药物,预防该病的有效方法是加强饲养管理和有效疫苗接种。研制新一代高效、廉价疫苗是重要的研究方向。掌握仔猪轮状病毒性腹泻的动态变化和影响因素,可为其诊断以及疫苗的研制提供科学依据,并为该病发展趋势的科学预测提供数据和信息支持。文章综述了引起仔猪腹泻的猪轮状病毒的分群和分型、培养特性、流行病学、预防治疗及疫苗研制的现状。

关键词：猪轮状病毒仔猪腹泻流行病学病原疫苗接种

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