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低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞抗成熟特性的研究

中华烧伤杂志 2004年第6期20卷 327-329页

作者：王强彭毅志第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的　观察内毒素 /脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF α)、干扰素γ(IFN γ)等促成熟物质对低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rmGM CSF)诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞 (DC)成熟特性的影响。　方法　制备小鼠骨髓细胞 ,分别用不同... 详细信息

目的　观察内毒素 /脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF α)、干扰素γ(IFN γ)等促成熟物质对低剂量粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rmGM CSF)诱导的小鼠骨髓未成熟树突状细胞 (DC)成熟特性的影响。　方法　制备小鼠骨髓细胞 ,分别用不同剂量rmGM CSF培养 ,6d后收集悬浮细胞进行检测。用LPS、TNF α、IFN γ与小剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMlowDC)共同孵育 3d后 ,行混合淋巴细胞反应 ,观察其诱导未致敏脾淋巴细胞增殖的情况 ,并与大剂量rmGM CSF培养获得的DC(GMhighDC)进行比较。　结果　GMlowDC不能激活未致敏脾淋巴细胞 ,且在与LPS、TNF α和IFN γ共同培养 3d后 ,仍不能有效诱导未致敏脾淋巴细胞增殖 ,刺激指数 (SI)均 <2 .0 0 ;而GMhighDC刺激未致敏脾淋巴细胞增殖的能力较强 ,SI为 4 .71。　结论　GMlowDC具有对LPS、TNF α和IFN γ刺激不敏感的抗成熟特性。

关键词：致敏 GM-CSF LPS 诱导粒细胞巨噬细胞集落刺激因子脾淋巴细胞增殖未成熟树突状细胞成熟特性肿瘤坏死因子α(TNF-α) 悬浮细胞

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大鼠烟雾吸入性损伤肺组织浸润出血和渗出的变化

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中华烧伤杂志 2004年第3期20卷 145-147页

作者：罗奇志杨天德杨宗城第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400038

目的　探讨烟雾吸入性损伤大鼠红细胞 (RBC)、中性粒细胞 (PMN)和白蛋白从血管进入肺组织的不同机制。　方法　采用Wistar大鼠烟雾吸入性损伤模型 ,分别于伤后 1、3、6、12、2 4h处死 ,处死前 1h分别注射13 1I 牛血清白蛋白 (BSA)、99mT... 详细信息

目的　探讨烟雾吸入性损伤大鼠红细胞 (RBC)、中性粒细胞 (PMN)和白蛋白从血管进入肺组织的不同机制。　方法　采用Wistar大鼠烟雾吸入性损伤模型 ,分别于伤后 1、3、6、12、2 4h处死 ,处死前 1h分别注射13 1I 牛血清白蛋白 (BSA)、99mTc PMN、99mTc RBC。经等渗盐水灌洗 ,去除体循环内血液 ,取肺组织进行γ计数并称重 ,计算单位时间内单位重量肺组织中13 1I BSA、RBC的渗出量和PMN的浸润量 ;应用磷酸邻联茴香胺法测定髓过氧化物酶 (MPO)含量。　结果　伤后 1h大鼠RBC渗出量达高峰值 ,为 (3.5 7± 0 .6 3)× 10 6个 / g,后逐步下降 ,伤后 2 4h恢复正常 ;PMN浸润量在伤后 3h明显升高 ,伤后 6h略有降低 ,但仍高于正常 ,伤后 12h再度升高 ;伤后 1h起大鼠肺组织MPO的含量逐渐升高 ,直到伤后 2 4h;伤后 1h肺组织中13 1I BSA渗出明显增高 ,6h达高峰值 ,为(16 4 .1± 5 1.7)放射性荧光闪烁计数·min-1·g-1,2 4h时仍高于正常。　结论　伤后大鼠肺组织中出血、PMN的浸润和BSA渗出均升高 ,但峰值时间不同。炎症不是红细胞渗出的前提 ,但继发性炎症反应可能是肺水肿的主要原因。

关键词：大鼠烟雾吸入性损伤肺组织浸润出血渗出的变化肺水肿

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腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染对大鼠移植肾存活的影响

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第三军医大学学报 2004年第5期26卷 390-392页

作者：黄赤兵吴军易绍萱罗高兴贺伟峰陈希炜方玉华张银甫第三军医大学新桥医院泌尿外科全军肾脏病中心重庆400037 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400038

目的　探讨CTLA 4Ig基因重组腺病毒 (AdvCTLA 4Ig)有效转染大鼠肾脏的方法并初步观察该基因转染对移植肾存活的影响。方法　AdvCTLA 4Ig对大鼠肾脏分别转染 3h ,包括 :4℃下转染 (A组 )、经肾动脉注射在体转染 (B组 )、阻断肝脏血流以... 详细信息

目的　探讨CTLA 4Ig基因重组腺病毒 (AdvCTLA 4Ig)有效转染大鼠肾脏的方法并初步观察该基因转染对移植肾存活的影响。方法　AdvCTLA 4Ig对大鼠肾脏分别转染 3h ,包括 :4℃下转染 (A组 )、经肾动脉注射在体转染 (B组 )、阻断肝脏血流以及肾血管以下躯体血流后经肾动脉注射在体转染 (C组 )以及对照 ;以免疫荧光法检测基因转染效率 ;以转染效率最高组肾脏行同种移植 ,未转染组为对照 ,观察移植肾存活时间。结果　A组、B组以及对照组肾脏内未见荧光显示 ,C组肾小管显示阳性荧光 ,肾小球内未见荧光显示 ;各组肾脏光镜下结构正常 ;转染组移植肾存活时间较对照组明显延长 ( 2 6 6± 6 9)dvs ( 8 1± 1 60 )d ,P <0 0 1。结论　高滴度CTLA 4Ig基因重组腺病毒可使在体肾脏中肾小管获得有效转染 ;

关键词：基因转染肾脏移植

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小鼠全身照射后血中造血祖细胞水平变化

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第三军医大学学报 2004年第4期26卷 363-364页

作者：宫立众孙士红程天民粟永萍罗成基郭朝华第三军医大学西南医院血液内科重庆400038 第三军医大学新桥医院肝胆外科重庆400037 第三军医大学预防医学系全军复合伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400038

射线照射是核战争、核事故和医疗性照射中的常见事件,人们对照射后血中白细胞的变化有了较深的了解[1],但对血中造血祖细胞的变化还了解不多,我们探讨了受照后小鼠血中造血祖细胞的变化,现报告如下.……

关键词：辐射损伤粒细胞巨噬细胞集落形成单位早期红系祖细胞

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缺氧复合烧伤后血清诱导心肌细胞凋亡变化中p38激酶的作用

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中国临床康复 2004年第35期8卷 7991-7993页

作者：张家平黄跃生杨宗城解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市400038

目的:观察缺氧复合烧伤血清作用条件下心肌细胞的凋亡变化,探讨p38激酶、caspase-3在其中的作用.方法:采用乳鼠心肌细胞原代培养,检测缺氧复合烧伤血清作用后心肌细胞p38激酶的磷酸化程度,对比观察使用SB203580抑制p38激酶前后,心肌细胞... 详细信息

目的:观察缺氧复合烧伤血清作用条件下心肌细胞的凋亡变化,探讨p38激酶、caspase-3在其中的作用.方法:采用乳鼠心肌细胞原代培养,检测缺氧复合烧伤血清作用后心肌细胞p38激酶的磷酸化程度,对比观察使用SB203580抑制p38激酶前后,心肌细胞caspase-3活性、酶前体蛋白表达及心肌细胞凋亡率变化.结果:缺氧复合烧伤血清使心肌细胞p38激酶迅速、持续活化,使用SB203580可降低心肌细胞caspase-3活性、稳定caspase-3酶前体和减少心肌细胞凋亡.结论:p38激酶途径参与缺氧复合烧伤血清诱导的心肌细胞凋亡过程,促进caspase-3活化是其介导凋亡的重要机制.

关键词：心肌/细胞学蛋白激酶类 Caspase类

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心肌细胞牵张模型建立的实验研究

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中国临床康复 2004年第33期8卷 7410-7411页

作者：李晓东黄跃生解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆市400038

目的:机械信号的转导与感受成为生命科学研究的理论前沿,如何对细胞施加机械刺激是进行此领域研究的前提.建立体外培养的心肌细胞牵张模型是研究的目的.方法:实验于2003-11/2004-01在解放军第三军医大学创伤烧伤复合伤国家重点实验完成... 详细信息

目的:机械信号的转导与感受成为生命科学研究的理论前沿,如何对细胞施加机械刺激是进行此领域研究的前提.建立体外培养的心肌细胞牵张模型是研究的目的.方法:实验于2003-11/2004-01在解放军第三军医大学创伤烧伤复合伤国家重点实验完成.采用胰酶消化法分离培养乳鼠心肌细胞,纯化后接种于硅酮膜上,依照10%的牵张强度对心肌细胞施加机械刺激,观察心肌细胞形态、培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量及碘化丙啶染色阳性细胞比例的变化.结果:10%牵张过程中,细胞沿受力方向排列.10%牵张后心肌细胞进一步铺展,伪足数目明显增加.牵张前后培养液中LDH含量[培养12 h(710.6±69.5)IU/L,牵张12 h(769.8±66.7)IU/L]及碘化丙啶染色阳性细胞比(牵张前0.53%,牵张12 h后0.54%)无明显变化.结论:建立了较好模拟体内刺激强度的模型,并证实10%牵张对心肌细胞不是一种损伤因素,在某些方向还可能上调细胞功能.

关键词：心肌细胞培养机械牵张

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反义p38α基因转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞炎性因子的表达

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第三军医大学学报 2004年第23期26卷 2097-2101页

作者：郑军黄跃生黄晓元范鹏举贺伟峰张小容蒋建新粟永萍第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 中南大学湘雅医院烧伤整形外科长沙430008

目的探讨反义p38α基因转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞炎性因子的表达.方法建立缺氧复合烧伤血清培养心肌细胞模型,分对照组、缺氧复合烧伤血清组(非转染组)和反义p38α基因转染组(转染组).烧伤血清采自40%TBSA Ⅲ度烧伤Wistar大鼠... 详细信息

目的探讨反义p38α基因转染对缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞炎性因子的表达.方法建立缺氧复合烧伤血清培养心肌细胞模型,分对照组、缺氧复合烧伤血清组(非转染组)和反义p38α基因转染组(转染组).烧伤血清采自40%TBSA Ⅲ度烧伤Wistar大鼠;采用含1%O2的混合气体造成缺氧模型;采用基因重组技术构建反义p38α基因重组体;用免疫印迹法和RT-PCR法分别检测不同时相点p38α激酶蛋白及TNFα、IL-1β mRNA表达变化,并作统计学分析.结果成功构建反义p38α基因重组体;缺氧复合烧伤血清迅速、持续激活心肌细胞p38α激酶,心肌细胞TNFα、IL-1β表达增多;反义p38α基因显著抑制p38α激酶过度活化(P＜0.01),下调 TNFα、IL-1β表达(P＜0.01).结论 p38α激酶途径介导了缺氧和烧伤血清所致心肌细胞损伤,抑制p38α激酶的持续活化能有效下调炎性因子TNFα、IL-1β表达,减轻该条件下心肌细胞损害.

关键词：反义p38α基因心肌细胞缺氧烧伤血清细胞因子

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烧伤血清加缺氧条件下高牵张对心肌细胞的影响

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第三军医大学学报 2004年第23期26卷 2102-2104页

作者：范鹏举黄跃生黄晓元郑军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 中南大学湘雅医院烧伤整形外科长沙430008

目的研究烧伤血清加缺氧条件下,高牵张对心肌细胞的影响,探讨高负荷在严重烧伤后对心肌细胞的作用.方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞,给予正常血清(SN组)、烧伤血清+缺氧(1%O2)(SH组)、烧伤血清+缺氧(1%O2)+10%轴向静态牵张(SHS组)3种刺... 详细信息

目的研究烧伤血清加缺氧条件下,高牵张对心肌细胞的影响,探讨高负荷在严重烧伤后对心肌细胞的作用.方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞,给予正常血清(SN组)、烧伤血清+缺氧(1%O2)(SH组)、烧伤血清+缺氧(1%O2)+10%轴向静态牵张(SHS组)3种刺激, MTT法检测心肌细胞活力、并测定培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活力来反映心肌细胞受损程度.结果和正常血清比较,烧伤血清+缺氧刺激在1、3 h对心肌细胞活力无明显影响,6 h明显降低心肌细胞活力(P<0.01), LDH和CK活力在1 h已经明显升高(P<0.01);和前两者比较,烧伤血清+缺氧+牵张刺激对细胞活力影响在1 h就已经明显(P<0.01),LDH和CK活力呈现出爆发式的增高,最高可为正常组的50倍,同时相点烧伤SH组的5～6倍.结论在烧伤血清合并缺氧条件下,高负荷加剧了心肌细胞的损伤.

关键词：烧伤缺氧牵张心肌细胞

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机械牵张对缺血缺氧离体培养心肌细胞形态的影响

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中国临床康复 2004年第36期8卷 8206-8207页

作者：李晓东黄跃生张东霞解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆市400038

目的:在严重缺血缺氧时,细胞形态已受损的基础上,细胞接受力学刺激其形态变化如何?探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞形态学的影响.方法:建立离体培养的心肌细胞机械牵张模型,以缺氧加无糖培养模拟烧伤早期缺血缺氧损害,心肌细胞形态变化... 详细信息

目的:在严重缺血缺氧时,细胞形态已受损的基础上,细胞接受力学刺激其形态变化如何?探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞形态学的影响.方法:建立离体培养的心肌细胞机械牵张模型,以缺氧加无糖培养模拟烧伤早期缺血缺氧损害,心肌细胞形态变化采用F-actin荧光染色,利用图像分析系统分析细胞面积、长度.结果:缺氧3 h后微丝破坏,失去正常网络状结构;缺氧12 h部分微丝断裂,细胞收缩变形,细胞失去正常铺展外观.牵张3 h细胞形态完好,与周边界限清楚,细胞面积增加,微丝沿细胞受力方向排列,局部呈增强趋势;牵张12 h可见微丝沿受力方向排列,核周明显增强,胞体宽大.缺氧牵张3 h微丝破坏明显,细胞形态不规则,胞浆内见空泡;缺氧牵张12 h细胞形态严重受损,微丝结构几乎完全破坏,细胞铺展面积变小,细胞完整性严重受损.牵张12 h细胞面积增加达22.4%,长度增加19.59%,缺氧牵张12 h后细胞面积则减少22.1%.结论:机械牵张加重了缺血缺氧对心肌细胞的破坏.

关键词：心肌细胞培养低氧微丝

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大鼠反义p38αMAPK腺病毒载体的构建

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第三军医大学学报 2004年第23期26卷 2165-2167页

目的构建大鼠反义p38αMAPK腺病毒载体.方法用RT-PCR法扩增大鼠p38αcDNA片段,连接到T载体进行测序,经测序正确后与pAdtrack-cmv vector重组,最后转入AdEasy(tm) XL Adenoviral Vector System系统中,得到p38α基因腺病毒载体.结果成功... 详细信息

目的构建大鼠反义p38αMAPK腺病毒载体.方法用RT-PCR法扩增大鼠p38αcDNA片段,连接到T载体进行测序,经测序正确后与pAdtrack-cmv vector重组,最后转入AdEasy(tm) XL Adenoviral Vector System系统中,得到p38α基因腺病毒载体.结果成功构建大鼠p38α腺病毒载体.结论为在基因水平研究p38α的作用提供了良好工具.

关键词： p38αMAPK 重组腺病毒基因

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