检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王全英乔传玲张洪波陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室内蒙古农业大学动物医学系

从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NA1基因的质粒PMD18-TNA1中切下NA1基因片段,将其亚克隆到pSY538的EcoRI位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的SmaI位点,然后切下同时含有NA1及LacZ基因的片段再亚克... 详细信息

从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NA1基因的质粒PMD18-TNA1中切下NA1基因片段,将其亚克隆到pSY538的EcoRI位点,将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因平端克隆到该质粒的SmaI位点,然后切下同时含有NA1及LacZ基因的片段再亚克隆到禽痘病毒载体pSY681的NotI位点,从而构建出表达AIV NA1基因的重组禽痘病毒转移载体。应用脂质体介导的方法将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经过蓝白斑筛选、数轮蚀斑纯化、PCR和Western-blot检测等,结果获得了能稳定表达NA1蛋白的重组禽痘病毒。从含有禽流感病毒A/Chicken/Guangdong/21/02(H9N2)NA2基因的质粒PBD-NA2中扩增出NA2基因片段,将其克隆到PCAGG的SmaI位点,同时将pSY538用EcoRI和BamHI进行双酶切,然后用EcoRⅠ和BglⅡ将NA2基因切下,将其粘端亚克隆到pSY538的EcoRI和BamHI位点,以下同NA1的重组禽痘病毒的构建,结果获得了能稳定表达NA2蛋白的重组禽痘病毒。实验结果表明所获得的重组病毒rFPV-NA1和rFPV-NA2遗传性状稳定,并能够对其重组的单个外源基因进行表达,且在培养细胞中的表达产物具有与AIV蛋白相似的生物学特性。

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶基因重组禽痘病毒

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两株H5N1亚型禽流感病毒诱导鸡胚成纤维细胞凋亡的初步研究

两株H5N1亚型禽流感病毒诱导鸡胚成纤维细胞凋亡的初步研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

作者：余丹丹张书霞陈化兰南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室

目的:为了弄清禽流感病毒的毒力强弱与细胞凋亡的关系,我们进行了生物学特性差异明显的A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型禽流感病毒对鸡胚成纤维细胞的感染实验,并检测了细胞凋亡指标,以期为... 详细信息

目的:为了弄清禽流感病毒的毒力强弱与细胞凋亡的关系,我们进行了生物学特性差异明显的A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)两株H5N1亚型禽流感病毒对鸡胚成纤维细胞的感染实验,并检测了细胞凋亡指标,以期为该两株病毒的致病机理及相关比较研究提供参考依据。方法:用灭菌PBS将含有两株病毒的尿囊液分别以十倍比稀释到10-4,置于冰上。接种100μl禽流感病毒稀释液于鸡胚成纤维细胞上,37℃吸附30min,PBS洗涤3次,加入5ml 2%DMEM维持液。置37℃5%CO2培养箱培养,逐日观察,出现细胞病变时收集细胞供DNA抽提及流式细胞仪测试。

关键词：鸡胚成纤维细胞禽流感病毒初步研究

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两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

两株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因诱导细胞凋亡的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会

目的:研究A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(简称DKGX/35/01)两株H5N1亚型禽流感病毒的NS1基因对Hela细胞凋亡的影响,为该两株病毒的致病机理提供依据。材料与方法:病毒株A/Duck/Guangdong/40/2000(H5N1)(简称DKGD/40/00)和A/Duck/Guangxi/35/2001(H5N1)(简称DKGX/35/01)由哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室保存;10日龄的SPF鸡胚由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供;引物参照NS1基因序列保守区设计。并引入EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ两个酶切位点,由上海博亚生物技术有限公司合成;病毒NS1基因的克隆与表达

关键词：禽流感病毒 NS1 细胞凋亡

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禽流感病毒H9N2亚型分离株的全病毒基因序列分析

禽流感病毒H9N2亚型分离株的全病毒基因序列分析

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中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会

作者：李建伟崔尚金孟庆文于康震金红唐秀英田国斌刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感中心东北农业大学动物医学院

本研究对一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)—A/Chick/Shandong/6/96(H9N2)进行了全病毒基因序列分析。分析结果表明,该毒株8个基因的核苷酸序列皆与1994年分离株—A/Chicken/Bei jing/1/94(H9N2)具有很高的同源性(96.0—98.6％),推导其血凝... 详细信息

本研究对一株H9N2亚型禽流感病毒(AIV)—A/Chick/Shandong/6/96(H9N2)进行了全病毒基因序列分析。分析结果表明,该毒株8个基因的核苷酸序列皆与1994年分离株—A/Chicken/Bei jing/1/94(H9N2)具有很高的同源性(96.0—98.6％),推导其血凝素(HA)裂解位点处的氨基酸序列为A-R-S-S-R,完全符合H9 AIV欧亚分支中的A/Chicken/Beijing/1/94类亚系的特征;虽然其神经氨酸酶(NA)基因与

关键词：禽流感病毒基因序列分析分离株

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲张建林于康震刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分析和PCR鉴定后,利用脂质体转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒疫苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化,获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：禽流感 HA基因重组禽痘病毒

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表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：陈普成李奇蒙姜永萍柳金雄田雨王笑梅胡永浩陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建重组质粒pENTR-VP2.采用GatewayLR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒pFosC-ccdBK+共同参与基因片段进行互换反应,构建重组粘粒pFosC-VP2.通过将pFosC-VP2与其它4个相互重叠并且覆盖HVT全基因组的粘粒酶切线性化后共同转染CEF细胞,拯救重组病毒rHVT-VP2.将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,利用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达.动物试验结果表明通过一次免疫rHVT-VP2即可诱导针对传染性法氏囊的完全保护力.

关键词：火鸡疱疹病毒传染性法氏囊病毒基因重组蛋白表达

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H5N1亚型禽流感病毒HA基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究

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动物医学进展 2008年第7期29卷 13-18页

作者：陈浩刘明刘春国杨涛李洪涛杜金玲孙恩成东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

采用RT-PCR技术扩增了高致病性禽流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)HA基因,然后将其克隆到真核表达载体pCI-neo中,获得重组质粒pCI-HA。在脂质体介导下转染Vero细胞,单抗免疫组化IPMA结果表明,HA蛋白在VeroE6细胞上大量表达。pCI-HA质... 详细信息

采用RT-PCR技术扩增了高致病性禽流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)HA基因,然后将其克隆到真核表达载体pCI-neo中,获得重组质粒pCI-HA。在脂质体介导下转染Vero细胞,单抗免疫组化IPMA结果表明,HA蛋白在VeroE6细胞上大量表达。pCI-HA质粒在有或无脂质体佐剂存在下以50μg剂量免疫接种Balb/c小鼠和SPF鸡,对照组只接种50μgpCI-neoDNA,各组以相同剂量加强免疫两次,每次免疫间隔3周。每次免疫前采集血清用ELISA检测抗体效价。最后一次免疫后3周用106EID50的高致病性流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)进行攻毒试验。免疫组小鼠抗体效价与对照组相比明显升高,但脂质体佐剂免疫组与非脂质体免疫组小鼠抗体效价差异不显著,基因免疫组小鼠能够抵抗H5N1高致病性禽流感病毒的致死性攻击。该核酸疫苗虽然能够诱导SPF鸡产生抗体应答,但抗体产生缓慢,效价较低。

关键词：禽流感病毒 HA基因核酸疫苗免疫效力

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重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘春国刘明刘大飞李洪涛杨涛孙恩成杜金玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室东北农业大学动物医学学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院

为评价不同佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以利用反向遗传操作技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒疫苗株为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTMISA 70M VG(简称70M)和MontanideTMISA 206 VG(简称206)三种佐剂制备的灭活... 详细信息

为评价不同佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以利用反向遗传操作技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒疫苗株为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTMISA 70M VG(简称70M)和MontanideTMISA 206 VG(简称206)三种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡免疫攻毒试验。结果表明国产矿物油佐剂组与70M佐剂组都能对SPF鸡100%保护,206佐剂组仅能保护40%SPF鸡不死亡;从抗体水平上比较发现70M佐剂组稍好于国产矿物油佐剂组,但两组差异不显著,而两组与206佐剂组差异极显著。该三种佐剂组免疫鸭均能够诱导产生较高的抗体水平,70M佐剂组优于国产矿物油佐剂组和206佐剂组,但三者差异不显著。用70M系的8种佐剂MontanideTMISA 70 essaiMi(i=1-8)(简称70Mi)佐剂乳化的疫苗免疫SPF鸡,结果表明70M佐剂组效果最好,攻毒后免疫鸡不排毒、不发病、不死亡,统计学分析显示70M佐剂组与所有70Mi佐剂组差异均显著。试验结果表明70M佐剂可以作为新型疫苗佐剂用于流感疫苗的制备。

关键词：禽流感 H5N1亚型细胞苗佐剂

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H5N1亚型AIV NS1基因在大肠杆菌中的表达

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畜牧与饲料科学 2007年第4期28卷 21-23页

作者：刘畅焦培荣刘威龙侯勇跃陈化兰内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农牧业科学院动物医学研究所内蒙古呼和浩特010030

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的... 详细信息

根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子。转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约45.0kD的NS1融合蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。用West-ern-Blotting证实重组融合蛋白可以特异性地被标准阳性血清所识别。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白克隆表达

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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 178-页

作者：乔传玲乔传玲于康震于康震贾永清刘明刘明孟庆文孟庆文田国彬唐秀英中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 详细信息

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素基因神经氨酸酶基因重组禽痘病毒

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