检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年第6期43卷 633-638页

作者：陈艳王飞飞杨焕良乔传玲陈化兰张秀英东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小... 详细信息

为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用血凝抑制(HI)试验和ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIV HA1蛋白MAb的杂交瘤细胞株(3F8),经ELISA检测结果显示其诱导小鼠产生的腹水效价为1:10^(6);HI试验检测结果显示其效价为12 log2。利用噬菌体随机7肽库对纯化的抗H3N2亚型SIV HA1蛋白的MAb 3F8进行了4轮筛选,经DNA测序得到3个7肽序列,分别是"HPRRRRV"(E1)、"WPFHHHR"(E2),"IERGRTS"(E3),3个7肽序列经比对显示与H3N2 SIV HA1蛋白有部分同源区,为HA蛋白的模拟表位,分别位于HA1蛋白序列的157、158位(E1)、196、199、200位(E2)、276、279、282位(E3),即位于流感病毒HA蛋白5个抗原位点中的B位点与C位点,且均位于HA1段上,与制备的抗HA1段蛋白的MAb鉴定结果一致。本研究制备了SIV H3N2亚型的HA蛋白MAb,并利用噬菌体短肽库技术获得该SIV HA模拟表位,为进一步设计具有广谱保护性的SIV表位疫苗提供了数据支持。

关键词： H3N2 猪流感病毒单克隆抗体噬菌体展示抗原表位

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宿主因子ZFAT影响抗流感病毒固有免疫因子MxA表达的研究

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1201-1206,1213页

作者：黄海翔宋洋铭施建忠赵东明杨孝朴陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

黏病毒抵抗蛋白A(MxA)是哺乳动物体内对H5N1高致病性禽流感病毒有着较高敏感度的固有免疫因子,本实验首先对BioGrid数据库的蛋白质互作组学信息进行分析,结果显示包含AT钩结构域锌指蛋白(ZFAT)可能影响MxA的表达活性。为了探究ZFAT对抗... 详细信息

黏病毒抵抗蛋白A(MxA)是哺乳动物体内对H5N1高致病性禽流感病毒有着较高敏感度的固有免疫因子,本实验首先对BioGrid数据库的蛋白质互作组学信息进行分析,结果显示包含AT钩结构域锌指蛋白(ZFAT)可能影响MxA的表达活性。为了探究ZFAT对抗流感病毒因子MxA表达调节的分子机制,本实验利用siRNA干扰技术下调A549细胞中ZFAT蛋白的表达,再通过流感病毒滴定试验检测ZFAT沉默对流感病毒复制的影响,荧光定量PCR和蛋白免疫印迹试验检测ZFAT沉默对MxA和干扰素等其他固有免疫因子表达活性的影响。结果显示:下调ZFAT蛋白表达可以显著降低流感病毒的复制能力(p<0.05),且无论流感病毒感染与否,下调ZFAT蛋白表达均可以显著激活A549细胞中MxA的转录与翻译活性(p<0.01);此外,对MxA表达具有严密调控作用的I型(IFNA1、IFNB1)和III型干扰素(IFNL1)以及下游信号分子的转录活性在6 hpi也因ZFAT表达的下调而显著提升(p<0.05)。以上结果表明下调ZFAT蛋白的表达可以提高宿主细胞抗病毒因子的转录水平,并且激活抗流感病毒因子MxA的蛋白表达。本实验为探寻宿主固有免疫系统抵抗流感病毒侵入的分子机制提供了新的视角和依据。

关键词： H5N1高致病性禽流感病毒含AT钩结构域锌指蛋白黏病毒抵抗蛋白固有免疫调节

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蛋白激酶R的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

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甘肃农业大学学报 2016年第1期51卷 7-12页

作者：张涛罗维玉姜水涛朱鹏阳李呈军陈化兰孙晓林姜丽甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21... 详细信息

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度0.5mmol/L IPTG诱导表达GST-PKR融合蛋白,SDS-PAGE分析表明融合蛋白获得稳定表达.表达产物经Glutathione-sepharose 4B亲和层析初步纯化后,用凝血酶切除GST标签,而后经离子交换层析及分子筛在AKTA Explorer上进一步纯化,得到高纯度无标签的PKR蛋白.以纯化后的PKR蛋白为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,斑点杂交试验检测其效价达到1∶50 000以上,Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明制备的多抗与PKR蛋白的反应具有高度特异性.【结论】PKR蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多克隆抗体可用于PKR蛋白的检测,从而为研究PKR在病毒感染过程中的作用提供了重要的工具.

关键词： PKR 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

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一株新型三源重配H1N2亚型猪流感病毒的进化分析及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2020年第9期42卷 861-866页

作者：钟秋张丹丹宋祖晨孟飞陈艳乔传玲陈化兰曹允考杨焕良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分... 详细信息

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分子进化分析,结果显示其8个节段均与2015年~2016年在美国分离的H1N2亚型SIV有高度同源性(98.9%~99.7%),其中HA基因可能来自于2009年之前的人季节性H1N1亚型流感病毒,PB2、PB1、PA、NP、NA和NS可能来自北美三重配H1N2亚型SIV,M基因可能来自H1N1/2009。以106 EID50 SIV GX238株病毒鼻腔感染BALB/c小鼠后记录小鼠的体质量变化及死亡情况,感染后第3 d检测小鼠各脏器病毒复制情况。结果显示,感染组小鼠体质量与PBS对照组小鼠相比有明显下降趋势,感染小鼠40%死亡;在小鼠肺脏和鼻甲中病毒滴度分别达6.3 Log10EID50/mL、4.8 Log10EID50/mL,表明该病毒对小鼠表现出中等的致病力。本研究结果表明输入型SIV持续对我国猪群造成威胁,凸显了在世界范围内开展猪流感监测的必要性。

关键词：猪流感病毒 H1N2亚型序列分析致病性

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H5N1亚型禽流感病毒A／Anhui／2／2005活候选疫苗株的构建及其对鸡致病性的研究

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 831-835页

作者：樊树芳许传田索永兵陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型。本研究利用基因工程技术体外合成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,从A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株... 详细信息

A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型。本研究利用基因工程技术体外合成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,从A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株获得HA、NA,并对HA基因上的多个连续碱性氨基酸基序进行了缺失修饰。将上述8个基因片段分别克隆至pBD双向表达载体中测序鉴定。利用质粒反向遗传操作系统,将构建正确的8个重组pBD质粒转染Vero细胞拯救病毒。经RT-PCR和序列测定鉴定,结果表明本试验成功获得了一株H5N1亚型A/Anhui/2/2005重组病毒,将其命名为AH/AAca,救获的重组病毒具有预期的温度敏感性和冷适应性生物学特性。随后进行了AH/AAca人工感染SPF鸡的感染性和致病性试验,结果表明其对鸡既无感染性,也无致病性。AH/AAca的获得为评价其在小鼠、非人类灵长目等动物模型上的保护效力的研究打下了坚实基础,为我国预防人禽流感的流行建立了技术储备。

关键词：禽流感病毒反向遗传操作救获病毒冷适应性温度敏感性

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H5N1亚型人禽流感病毒A/Anhui/2/2005株反向遗传操作系统的建立

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 135-138页

作者：冯华朋钟功勋张月梅李旭勇李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致... 详细信息

为建立H5N1亚型人源禽流感病毒A/Anhui/2/2005(W-AH05)反向遗传操作系统,本研究构建了W-AH05的8重组质粒,拯救出人源禽流感病毒R-A/Anhui/2/2005(R-AH05)。全基因序列测定结果表明,救获病毒R-AH05与野生病毒W-AH05的核苷酸序列完全一致;动物试验证实,R-AH05保持了W-AH05的对BALB/c小鼠呈高致病力的特性,其MLD50分别为1.5log10EID50和1.2log10EID50。R-AH0与W-AH05分别以106EID50剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度基本相同。由此可见,R-AH05保持了W-AH05的生物学特性,从而为进一步研究人源禽流感病毒的致病机理及跨宿主传播机制等提供了操作平台。

关键词： H5N1 人源禽流感病毒反向遗传操作

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H7亚型禽流感病毒HA基因在杆状病毒系统中的表达

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中国预防兽医学报 2007年第4期29卷 268-271页

作者：郝婧邓国华姜永萍曲站红王桂芹郝永清陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流... 详细信息

利用PCR反应,以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取基因组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流感病毒HA基因的重组杆状病毒opti-H7HA-Bac。重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞,细胞裂解产物经血凝试验、SDS-PAGE及Western blot分析证实。密码子优化的H7 HA基因在重组杆状病毒opti-H7HA-Bac感染Sf9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。

关键词：禽流感 H7亚型 HA基因重组杆状病毒

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禽流感DNA疫苗重组质粒组织分布的实时荧光定量PCR方法建立

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中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 203-207页

作者：熊杰彭广能王国俊李俊平姜永萍陈化兰四川农业大学动物医学院四川雅安625014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究禽流感病毒(AIV)DNA疫苗重组质粒在组织中的分布情况,本研究以AIV DNA疫苗pCAGGoptiHA 5HA基因为检测对象,分别建立检测AIV DNA疫苗重组质粒的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法和TaqMan MGB实时定量PCR方法。经优化比较两种方法的特... 详细信息

为研究禽流感病毒(AIV)DNA疫苗重组质粒在组织中的分布情况,本研究以AIV DNA疫苗pCAGGoptiHA 5HA基因为检测对象,分别建立检测AIV DNA疫苗重组质粒的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法和TaqMan MGB实时定量PCR方法。经优化比较两种方法的特异性、敏感性、重复性和污染率。结果表明,两种方法的标准曲线线性关系均较好,相关系数均达到0.999;最低检测量为42 copies,特异性强;探针法的重复性优于染料法,污染率低于染料法,因此采用TaqMan MGB实时定量PCR方法检测AIV DNA疫苗重组质粒组织分布情况。

关键词：禽流感 DNA疫苗组织分布实时荧光定量PCR

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运用反向遗传学培养产生高成长性的猪流感疫苗(英文)

运用反向遗传学培养产生高成长性的猪流感疫苗(英文)

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者： Tao Yang Ming Liu Chunguo Liu Yun Zhang Dafei Liu Hao Chen BiotechnologyAnimal Influenza Laboratory of the Ministry Agriculture and National Key Laboratory of Veterinary,Harbin Veterinary Research Institute of CAAS,Harbin 150001,China 动物流感生物技术实验室兽医学国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

H3N2 subtype influenza A virus can leads severe respiratory diseases in infected swine *** this study,a high-yield swine influenza vaccine candidate for large-scale vaccine production in cell culture was generated by ... 详细信息

关键词：反向遗传学流感疫苗高成长性

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H5N1亚型禽流感病毒对鸭的致病性研究

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 301-303页

作者：许静宋家升苏胜杰李雁冰施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感开放实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goos... 详细信息

为评估H5N1亚型禽流感病毒(AIV)在实验室环境下对鸭的致病力,本研究以无特殊病原(SPF)鸭为模型,对我国近年分离的7株病毒进行了致病力分析。结果发现其中4株病毒对鸭致死率为100%,2株病毒对鸭的致死率分别为60%和80%,另外1株病毒,A/goose/Hubei/51/05(GS/HB/51/05),对鸭无致病力。本研究还发现,与高致病力毒株一样,GS/HB/51/05也可在鸭体内呈全身性复制,并且可通过喉头和泻殖腔向外排泄。我们推测GS/HB/51/05可能是中国南方出现的其他对鸭呈高致病力的H5N1病毒的祖先,对这些病毒的系统研究,可揭示H5N1亚型AIV对鸭的致病力遗传机制。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型感染鸭

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