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动物医学进展 2010年第10期31卷 68-71页

作者：郑宝亮边传周王秀荣宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目... 详细信息

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取***肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码***49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的***相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为***49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。

关键词：本地毛形线虫旋毛形线虫 49ku排泄分泌蛋白基因序列

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本地毛形线虫49 Ku ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达

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中国预防兽医学报 2007年第7期29卷 510-514页

作者：郑宝亮王秀荣路义鑫李冬梅闫清波宋铭忻郑州牧业工程高等专科学校生物工程系河南郑州450011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院预防医学系寄生虫学教研室黑龙江哈尔滨150030

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为9... 详细信息

提取Trichinella nativa(***)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码*** 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(***)相应的序列P49同源性为97.68%,所推导的氨基酸序列同源性为95.24%。将目的基因TNPG插入到原核表达载体pET-30a的BamHⅠ酶切位点处,并转化到感受态表达菌中进行诱导表达。结果显示TNPG在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8 Ku的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot分析,表达产物可以被小鼠***和***阳性血清以及它们的中国地理株的小鼠血清特异性识别。

关键词：旋毛虫 nativa种旋毛虫 spiralis种 49 Ku ES蛋白基因序列 Westem blot分析

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H9N2亚型猪流感病毒HA基因的克隆及体外表达

H9N2亚型猪流感病毒HA基因的克隆及体外表达

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会

作者：韩庆功乔传玲杨焕良陈艳辛晓光陈化兰赵玉军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室暨兽医生物技术国家重点实验室沈阳农业大学畜牧兽医学院

从2004年全国动物流感调查分离到的一株猪流感病毒经亚型鉴定确定为H9N2,命名为 A／Swine／Zhejiang／7／2004(H9N2),利用RT-PCR扩增HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGSk, 转染293T细胞,PAWestern-blot检测所克隆的载体pCAGGHA... 详细信息

从2004年全国动物流感调查分离到的一株猪流感病毒经亚型鉴定确定为H9N2,命名为 A／Swine／Zhejiang／7／2004(H9N2),利用RT-PCR扩增HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGSk, 转染293T细胞,PAWestern-blot检测所克隆的载体pCAGGHA在体外能够瞬时表达具有免疫学活性的HA蛋白,这将为下一步开展DNA疫苗的免疫奠定基础。

关键词：猪流感病毒 HA基因克隆表达

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禽流感病毒通用型RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 383-386页

作者：石霖王秀荣孙阮洋李雁冰程荣华于学武曹东薛树山赵培徐晓龙马勇郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110164 吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062

为建立一种禽流感病毒（AIV）的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术（LAMP）原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检... 详细信息

为建立一种禽流感病毒（AIV）的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术（LAMP）原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检测结果均为阳性,而对其他禽类病毒的扩增均为阴性,具有良好的特异性。对AIV的最低检测限为13.43 EID50/m L,灵敏度为普通一步RT-PCR的10倍;扩增反应可以在恒温水浴内60 min内完成;在反应体系中添加荧光染料后,肉眼即可判定检测结果。该检测方法与RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR方法对临床样品检测的符合率均为81.8%。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AIV。

关键词：禽流感 RT-LAMP 诊断方法

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株血凝素基因分子演化的研究

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家畜传染病学会第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕申之义陈化兰于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室内蒙古农业大学动物科学与医学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室华南农业大学动物科学学院

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树。研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的血凝素(HA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树。研究结果表明,15株H1N1 SIV的HA基因核甘酸全长为1778bp,共编码566个氨基酸;而且,15株H1N1亚型SIV的HA1蛋白在10、11、23、87、287位都存在高度保守的糖基化位点,此外,在276位多了一个“-NTT-”糖基化位点,与参考毒株SW/IW/930/01一致,这可能是近期H1N1亚型SIV的一个分子特征。本研究进一步发现,15株H1N1亚型SIV的HA基因切割位点氨基酸组成为IPSIQSR↓G,具有非高致病力毒株分子特征;而其受体结合位点在HA蛋白上第226位是Q,第228位为G,可能具有感染禽的潜力。经同源性比较,15株H1N1亚型SIV的HA基因与古典型H1N1猪谱系中的WIS/4754/94的同源性相对最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别达到95.7-96.1%和96.5-97.2%。由同源性比较结果和进化树分析可见。15株H1N1亚型SIV的HA基因皆属于古典型H1N1猪谱系。

关键词：猪流感病毒血凝素 H1N1亚型序列分析分子演化

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株核蛋白基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株核蛋白基因分子演化的研究

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕陈化兰李泽君于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的核蛋白(NP)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NP基因核甘酸全长为1565bp,共编码498个氨基酸.经同源性比较结果中知,除SW/HLJ/395/01外,其余14株H1N1亚型SIV的NP基因核苷酸序列与参考毒株SW/BJ/94/91保持相对最高的同源性,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为96.5~97.4﹪、97.8~99.0﹪;并且与类猪人流感病毒WIS/3523/88和NJ/8/76核苷酸序列的同源性也可分别达到95.5~96.5﹪、92.7~93.7﹪,推导氨基酸序列的同源性分别为96.8~99.0﹪、94.6~97.2﹪,相对较高.但是,SW/HLJ/395/01与类禽型H1N1猪谱系的代表毒株SW/GER/2/81同源性最高,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为93.9﹪和99.0﹪.经进化树分析可见,SW/HLJ/395/01属于类禽H1N1猪谱系,其它14株H1N1亚型SIV的NP基因皆属于古典型H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒核蛋白序列分析分子演化

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H9亚型禽流感病毒分离株A/Chick/Shandong/6/96的基因序列分析

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中国兽医科技 2001年第11期31卷 23-25页

作者：李建伟崔尚金于康震金红唐秀英孟庆文田国斌刘宝全 Y.Guan K.F.Shortridge J.S.M.Peiris 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感中心黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 香港大学微生物系

对 1株H9N 2亚型禽流感病毒 (AIV)A/Chick/Shandong/ 6/ 96(H9N2 )进行了全病毒基因序列分析。结果表明 ,该毒株 8个基因的核苷酸序列皆与 1994年分离株A/Chicken/Beijing/ 1/ 94(H9N2 )具有很高的同源性 (96.0 %—98.6% ) ;推导其血凝... 详细信息

对 1株H9N 2亚型禽流感病毒 (AIV)A/Chick/Shandong/ 6/ 96(H9N2 )进行了全病毒基因序列分析。结果表明 ,该毒株 8个基因的核苷酸序列皆与 1994年分离株A/Chicken/Beijing/ 1/ 94(H9N2 )具有很高的同源性 (96.0 %—98.6% ) ;推导其血凝素 (HA)裂解位点处的氨基酸序列为A R S S R ,完全符合H9AIV欧亚分支中的类A/Chicken/Beijing/ 1/ 94亚分支的特征 ;虽然其神经氨酸酶 (NA)基因与A/Chicken/Beijing/ 1/ 94(H 9N2 )相比 ,出现了 9个核苷酸的缺失 ,然而其同源性仍然较高 ,为 97.3 % ;而与欧亚分支中的类A/Chicken/Korea/ 3 2 3 / 96和类A/Quail/HongKong/G1/ 97亚分支的同源性却相对较低 ,分别为 92 .0 %和 84.2 % ;其它基因的比较情况也大体相近。提示该毒株是由 1994年分离株进化而来 ,在遗传演化上属于H9亚型流感病毒欧亚分支中的类A/Chicken/Beijing/ 1/ 94(H9N2 )亚分支。

关键词：禽流感病毒基因序列分析 H9N2亚型分离株

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以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：王艳丽李俊辉姜永萍夏俊裴磊冉多良陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室新疆农业大学动物医学院

禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用,转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和... 详细信息

禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用,转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅠ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt的效果,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到此载体构建了转移载体pSY681-gfp-gpt-HA,应用TransIT-LT1 Transfection Reagent将此转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化构建了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、Western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达AIV HA蛋白的重组禽痘病毒r-FPV-gpt-gfp-HA9。

关键词：重组禽痘病毒绿色荧光蛋白黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶 HA基因

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DNA疫苗制备工艺研究

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新疆农业大学学报 2007年第4期30卷 38-40页

作者：夏俊姜永萍简子健左青山王岳陈化兰新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

以禽流感DNA疫苗pCAOH5转化大肠杆菌JM109后,利用发酵罐进行发酵培养。将菌体悬浮裂解中和后,经澄清和浓缩处理,利用阴离子交换色谱对其进行纯化。结果表明实验室规模的技术路线完全能够为质粒DNA的工业化制备奠定技术基础。

关键词： DNA疫苗禽流感发酵色谱质粒

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H1N1亚型猪流感病毒中国分离株神经氨酸酶基因分子演化的研究

H1N1亚型猪流感病毒中国分离株神经氨酸酶基因分子演化的研究

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：陈君彦李海燕陈化兰杨焕良李泽君于康震毕英佐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 内蒙古农业大学动物科学与医学学院(呼和浩特) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨) 全国畜牧兽医总站(北京) 华南农业大学动物科学学院(广州)

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA... 详细信息

本研究对2001年中国华南及东北地区的15株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株的神经氨酸酶(NA)基因进行了序列测定和分析,并绘制了进化树.研究结果表明,15株H1N1亚型SIV的NA基因核甘酸全长为1458bp,共编码477个氨基酸.15株H1N1亚型SIV的NA蛋白在58、63、68、88、146位都存在糖基化位点;但是,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01在50位存在一糖基化位点,为"-NQS-",其余13株H1N1亚型SIV在50位无糖基化位点,却在44位存在"-NHS-"的糖基化位点;而且,SW/GD/714/01、SW/GD/771/01和其余13株H1N1亚型SIV的NA蛋白头部抗原位点,在328、332、334、339、340位的氨基酸不同;但是,15株H1N1亚型SIV在366位的氨基酸均为N,与所有参考毒株在此位的S不同.经同源性比较结果和进化树分析可见,SW/GD/714/01和SW/GD/771/01的NA基因明显属于类禽型H1N1猪谱系,其余13株H1N1亚型SIV的NA基因皆属于古典型H1N1猪谱系.

关键词：猪流感病毒神经氨酸酶序列分析分子演化正粘病毒科

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