检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 887-892页

作者：姜金庆杨雪峰王自良常新耀王三虎刘兴友河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数... 详细信息

为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10%和30%;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93%～108%、96%～110%、92.5%～104%和93%～102%。

关键词：环丙沙星多克隆抗体间接竞争ELISA 氟喹诺酮药物多残留检测

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H3N2 SIV河南分离株NS1基因的克隆及原核表达

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中国生物制品学杂志 2011年第6期24卷 665-667页

作者：赵朴赵坤贾贝贝王三虎刘兴友姚四新郑玉姝河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

目的克隆并原核表达猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)基因,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定基础。方法从 H3N2 SIV河南分离株中提取病毒RNA,RT-PCR扩增NS1基因,克隆至... 详细信息

目的克隆并原核表达猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)基因,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定基础。方法从 H3N2 SIV河南分离株中提取病毒RNA,RT-PCR扩增NS1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果测序结果表明,扩增的NS1基因与国内外多株SIV NS1基因序列同源性达98%以上,表达的重组蛋白相对分子质量约为27 000,能与SIV感染猪阳性血清发生特异性反应。结论已成功克隆了H3N2 SIV河南分离株NS1基因,并在*** BL21(DE3)中表达了重组NS1蛋白,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定了基础。

关键词：流感病毒A型病毒非结构蛋白质类克隆分子原核细胞基因表达

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猪呼吸道疾病综合征常见病毒多重PCR方法的建立及应用

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华北农学报 2014年第3期29卷 64-67页

作者：赵朴郑玉姝赵坤李任峰胡建和王三虎刘兴友陈金山刘俊伟河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)4种病毒的多重PCR,分别针对PRRSV、SIV、PCV2和PRV保守序列设计4对特异性引物,建立同时检测这4种病毒的多重PCR,并对采自呼吸障碍病猪的病料进行检测。结果显示,PRRSV、SIV、PCV2、PRV扩增产物分别是275,650,482,359 bp,检测最小DNA量分别是1.5,7.5,4.3,2.7 pg;检测采自河南省的100份样品,总阳性率为95%(95/100),其中PRRSV、SIV、PCV2和PRV阳性率分别是62.1%(59/95),33.7%(32/95),66.3%(63/95),26.3%(25/95),混合感染率达69.5%(66/95)。表明建立的多重PCR方法敏感、特异、快速,可用于猪呼吸道疾病综合征常见病毒的检测。

关键词：猪呼吸道疾病综合征猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流感病毒伪狂犬病病毒猪圆环病毒2型多重PCR

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诺氟沙星免疫学检测方法的建立及优化

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食品科学 2011年第21期32卷 148-151页

作者：姜金庆李广领王自良刘兴友杨雪峰黄华国河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。对NOR的线性检测范围为0.07～31.8ng/mL,半数抑制质量浓度(IC50)和最低检测限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.04ng/mL。检测缓冲液... 详细信息

采用优化的碳二亚胺法制备诺氟沙星(NOR)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。对NOR的线性检测范围为0.07～31.8ng/mL,半数抑制质量浓度(IC50)和最低检测限(LOD)分别为1.5ng/mL和0.04ng/mL。检测缓冲液中pH值和磷酸根离子浓度的最佳参数分别为7.4和10mmol/L;对甲醇和NaOH溶液(30mmol/L)的最佳调整体积分数分别为30%和10%。抗体具有广谱特异性,与环丙沙星(83.3%)、培氟沙星(78.9%)、依诺沙星(68.2%)、恩诺沙星(51.7%)和洛美沙星(41.7%)有较高的交叉反应率,可用于氟喹诺酮类药物(FQs)多残留检测方法研究。

关键词：诺氟沙星氟喹诺酮间接竞争ELISA 多残留检测

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牛磺酸对海兰褐雏鸡抗氧化及免疫功能的影响

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中国兽医科学 2015年第8期45卷 867-872页

作者：赵振升位治国杨帆王国永郝雪琴孔涛潘耀谦河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 河南科技学院动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

选取10日龄海兰褐雏鸡240只,随机将其分为8组。在牛磺酸处理试验中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为正常给药组,分别在日粮中添加牛磺酸0、0.5、1.0、2.0g/kg。在地塞米松(Dex)牛磺酸处理试验中A、B、C、D组为地塞米松处理组(混饮,25mg/L),并分别添加... 详细信息

选取10日龄海兰褐雏鸡240只,随机将其分为8组。在牛磺酸处理试验中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为正常给药组,分别在日粮中添加牛磺酸0、0.5、1.0、2.0g/kg。在地塞米松(Dex)牛磺酸处理试验中A、B、C、D组为地塞米松处理组(混饮,25mg/L),并分别添加牛磺酸0、0.5、1.0、2.0g/kg。在给药后第15天和第30天测定各项抗氧化指标。结果显示,在牛磺酸处理试验中,与对照组(Ⅰ)相比,超氧化物歧化酶(SOD)活性在第15天Ⅲ和Ⅳ组显著升高(P<0.05);在第30天Ⅱ组显著升高(P<0.05),Ⅲ和Ⅳ组极显著升高(P<0.01)。过氧化氢酶(CAT)活性在第15天Ⅲ组显著升高(P<0.05),Ⅱ和Ⅳ组变化不显著(P>0.05);在第30天Ⅲ组极显著升高(P<0.01),Ⅳ组显著升高(P<0.05),Ⅱ组变化不显著(P>0.05)。丙二醛(MDA)含量,在第15天和第30天Ⅱ组极显著降低(P<0.01),Ⅲ和Ⅳ组显著降低(P<0.05)。胸腺指数、脾指数和法氏囊指数,在第15天Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组均无显著变化(P>0.05);在第30天Ⅲ组胸腺指数显著增大(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组脾指数均显著增大(P<0.05),Ⅲ和Ⅳ组法氏囊指数显著增大(P<0.05)。抗体效价在第15天和第30天Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组均显著提高(P<0.05)。在Dex牛磺酸处理试验中,血清SOD活性在第30天C和D组显著提高(P<0.05)。血清CAT活性在第30天B组极显著降低(P<0.01),C组极显著升高(P<0.01),D组显著降低(P<0.05)。血清MDA含量在第15天C组显著降低(P<0.05),在第30天B组显著降低(P<0.05)。胸腺指数、脾指数、法氏囊指数和抗体效价各组均无显著变化(P>0.05)。上述结果提示,牛磺酸可提高正常海兰褐雏鸡的抗氧化作用和免疫功能,对经过Dex处理的海兰褐雏鸡,牛磺酸也表现出抗氧化作用,但对免疫功能影响尚不能确定。

关键词：牛磺酸地塞米松抗氧化免疫

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兔脑炎原虫性脑肉芽肿的病理学发生及形态特点

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中国兽医学报 2016年第6期36卷 979-984页

作者：李瑞珍宋高杰刘志科梁莹莹郝军红潘耀谦河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

为了研究兔脑炎原虫(EC)性脑肉芽肿的病理学发生及形态特点,通过特殊染色、TUNEL染色、anti-GFAP染色和anti-NGF染色对26只病兔和10只健康对照兔的脑组织进行了详细地观察与分析。结果显示,EC能侵入血管内皮细胞引起血管损伤,可被单核... 详细信息

为了研究兔脑炎原虫(EC)性脑肉芽肿的病理学发生及形态特点,通过特殊染色、TUNEL染色、anti-GFAP染色和anti-NGF染色对26只病兔和10只健康对照兔的脑组织进行了详细地观察与分析。结果显示,EC能侵入血管内皮细胞引起血管损伤,可被单核细胞吞噬但不被消灭,并随之进入脑组织,导致大量星状胶质细胞增生,包围脑炎原虫集落或带虫的巨噬细胞,从而形成肉芽肿。EC性肉芽肿主要有3种形态,即细胞性肉芽肿、增生性肉芽肿和坏死性肉芽肿。构成脑肉芽肿的主要细胞为上皮样细胞、小胶质细胞、星状胶质细胞及内皮细胞,而淋巴细胞较少。结论,EC可侵入血管内皮破坏血脑屏障或随单核细胞的浸润而进入脑组织;脑肉芽肿的形成限制了EC的扩散;3种形态的脑肉芽肿实际上是一个病理过程的不同发展阶段。

关键词：兔脑炎原虫脑肉芽肿特殊染色肉芽肿分型胶质细胞

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荧光定量PCR方法的原理及其在研究病毒在动物体内分布规律的应用

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中国畜牧兽医 2010年第4期37卷 63-65页

作者：高均伟郭延锋王三虎潘耀谦王丽荣朱国坡刘兴友河南科技学院动物科技学院新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心新乡453003

研究病毒在动物体内的分布情况,主要是为了掌握病毒在动物体内的生长繁殖规律,找到病毒的靶细胞和靶器官,为进一步研究其致病机理和防制技术提供试验依据。荧光定量PCR法具有定量准确、特异性强、自动化程度高等特点,是研究病毒分布规... 详细信息

研究病毒在动物体内的分布情况,主要是为了掌握病毒在动物体内的生长繁殖规律,找到病毒的靶细胞和靶器官,为进一步研究其致病机理和防制技术提供试验依据。荧光定量PCR法具有定量准确、特异性强、自动化程度高等特点,是研究病毒分布规律的主要方法之一,作者综述了此方法的原理及应用。

关键词：荧光定量PCR 病毒分布规律原理应用

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兔脑炎原虫引起脑细胞凋亡与血脑屏障破坏的关系

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中国兽医学报 2016年第7期36卷 1151-1156页

作者：潘耀谦李瑞珍梁莹莹郝军红张中华全锁配河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

为了研究兔脑炎原虫如何破坏血脑屏障,侵入脑组织并引起脑肉芽肿形成,本试验采用IG染色、MGP染色,TUNEL染色和anti-GFAP染色等方法对26只有典型脑炎原虫病神经症状的病兔和10只健康兔的脑组织进行了详细研究。结果显示:病兔大脑皮质有... 详细信息

为了研究兔脑炎原虫如何破坏血脑屏障,侵入脑组织并引起脑肉芽肿形成,本试验采用IG染色、MGP染色,TUNEL染色和anti-GFAP染色等方法对26只有典型脑炎原虫病神经症状的病兔和10只健康兔的脑组织进行了详细研究。结果显示:病兔大脑皮质有少部分锥体细胞、血管内皮细胞及星形胶质细胞发生不同程度的凋亡。病损的血管旁有时检出兔脑炎原虫集落,附近的脑组织有巨噬细胞和小胶质细胞聚集形成的细胞性肉芽肿。用特殊染色可在血管内皮细胞、单核细胞和巨噬细胞中检出大量脑炎原虫和集虫泡。大量星形胶质细胞在病损的脑组织部位增生,包绕在聚集的巨噬细胞和小胶质细胞周围形成了肉芽肿。其粗大的足突在血管周围形成了厚层血脑屏障。总之,兔脑炎原虫通过导致血管内皮细胞和星形胶质细胞凋亡的方式而破坏了血脑屏障;通过侵入血管内皮细胞和单核细胞的方式进入脑组织,引起脑损伤。

关键词：兔脑炎原虫脑细胞凋亡血脑屏障胶质细胞肉芽肿

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猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及应用

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中国畜牧兽医 2010年第8期37卷 66-68页

作者：郑玉姝赵朴刘俊伟陈金山姚四新赵坤李任峰王三虎刘兴友张智勇河南科技学院动物科学学院新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心新乡453003

根据GenBank登录的PCV2的保守序列,设计1对引物,建立了PCV2的PCR检测方法。试验结果表明,该PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为PCV2的临床诊断和流行病学调查奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型 PCR 临床诊断流行病学调查

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石蜡切片TUNEL法检测肉仔鸡法氏囊细胞凋亡的条件优化

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动物医学进展 2010年第4期31卷 64-67页

作者：郭延锋李雪华付登峰胡建和王丽荣王三虎潘耀谦刘兴友河南科技学院动物科学学院．河南新乡453003 动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心河南新乡453003

从蛋白酶K的浓度、DAB显色时间、苏木素复染时间等对采用石蜡切片TUNEL法检测10日龄健康ROSS308肉仔鸡法氏囊组织内细胞凋亡的条件进行了优化。结果表明,TUNEL法最佳条件蛋白酶K浓度为20μg/mL,DAB显色时间为8 min,苏木素复染时间为10 ... 详细信息

从蛋白酶K的浓度、DAB显色时间、苏木素复染时间等对采用石蜡切片TUNEL法检测10日龄健康ROSS308肉仔鸡法氏囊组织内细胞凋亡的条件进行了优化。结果表明,TUNEL法最佳条件蛋白酶K浓度为20μg/mL,DAB显色时间为8 min,苏木素复染时间为10 s。优化后的石蜡切片TUNEL法,即60℃烤片5 h,20μg/mL蛋白酶K 37℃消化30 min,DAB显色8 min,苏木素复染10 s时,能特异地显示凋亡细胞为棕黄色,其他细胞核为蓝色,且对比明显,背景浅,组织结构完整清晰。

关键词： TUNEL法细胞凋亡法氏囊

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