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MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路抑制剂在诱导恶性黑色素瘤细胞凋亡中的协同作用

四川大学学报（医学版） 2014年第3期45卷 355-361页

作者：王馨苑承尧杜吉佩陈德高杨雪杉杨志梅黄宁四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室成都610041

目的通过联合抑制MEK和AKT信号通路关键靶点分子,探讨克服细胞耐药性的靶向治疗方法。方法体外培养和新鲜分离恶性黑色素瘤细胞株,分别在0.5%和5%血清浓度下单独或同时抑制靶点MEK(U0126,20μmol/L)和AKT(LY294002,20μmol/L),MTT法检... 详细信息

目的通过联合抑制MEK和AKT信号通路关键靶点分子,探讨克服细胞耐药性的靶向治疗方法。方法体外培养和新鲜分离恶性黑色素瘤细胞株,分别在0.5%和5%血清浓度下单独或同时抑制靶点MEK(U0126,20μmol/L)和AKT(LY294002,20μmol/L),MTT法检测细胞增殖,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果当培养液血清浓度从0.5%提高到5%时,U0126和LY294002对肿瘤细胞增殖的抑制效应明显降低。LY294002以抑制细胞增殖为主,U0126主要诱导细胞凋亡,二者作用效果与细胞是否具备该通路关键靶点活化变异无关。联合用药时诱导细胞凋亡普遍增强,LY294002和U0126具有协同效应。结论联合抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路可较好地克服恶性黑色素瘤细胞的耐药性。

关键词：恶性黑色素细胞瘤协同效应 MEK ERK P13K AKT

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降低细胞内GSH浓度对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响

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四川大学学报（医学版） 2007年第5期38卷 770-774页

作者：韩晓群李华张敬各姜怡邓彭克军王丽珍王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 泸州医学院病理生理学教研室

目的探讨肿瘤细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)浓度对肿瘤细胞药物敏感性及在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法以马来酸二乙酯(DEM)处理人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM和敏感细胞株MCF-7/S,以消耗细胞内GSH,MTT法检测DEM处理前后两种细胞存活率... 详细信息

目的探讨肿瘤细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)浓度对肿瘤细胞药物敏感性及在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法以马来酸二乙酯(DEM)处理人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM和敏感细胞株MCF-7/S,以消耗细胞内GSH,MTT法检测DEM处理前后两种细胞存活率的变化,并采用荧光分光光度法同步检测其细胞内GSH的消耗程度,分析细胞内GSH浓度的变化与MCF-7细胞对ADM敏感性变化间的相关关系。结果0.1μmol/L DEM使MCF-7/ADM细胞内GSH浓度减少37.4%(P<0.01),使MCF-7/S细胞内GSH浓度减少29.7%(P<0.01);ADM亦使细胞内GSH含量呈ADM浓度依赖性的下降;DEM与ADM合用时,GSH浓度显著下降,其下降程度大于DEM和ADM单独应用之和。随着细胞内GSH数量的减少,无论是MCF-7/ADM细胞,还是MCF-7/S细胞,细胞存活率均下降,即对ADM的敏感性均增强(P<0.01)。结论DEM耗竭细胞内GSH的作用与ADM有协同效应,耗竭细胞内GSH可增强人乳腺癌MCF-7/S细胞对ADM的敏感性,部分逆转MCF-7/ADM细胞对ADM的耐药性。

关键词：还原型谷胱甘肽马来酸二乙酯 MCF-7/ADM细胞株 MCF-7/S细胞株阿霉素

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人脑源性神经营养素-6基因的克隆及在原核细胞中的表达

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中华医学遗传学杂志 2002年第6期19卷 476-478页

作者：张承武蔡青松庄旭翟朝阳郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

目的　克隆人脑源性神经营养素 - 6 (neurotrophin- 6 ,NT- 6 )基因 ,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法　从流产胎儿大脑皮层提取总 RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的 NT- 6基因c DNA片段 ;经酶切回收后克隆进 p BK- CMV质粒 ... 详细信息

目的　克隆人脑源性神经营养素 - 6 (neurotrophin- 6 ,NT- 6 )基因 ,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法　从流产胎儿大脑皮层提取总 RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的 NT- 6基因c DNA片段 ;经酶切回收后克隆进 p BK- CMV质粒 ,构建 NT- 6的表达载体。通过诱导 ,使 NT- 6基因在大肠杆菌中表达。结果　分离克隆了人脑源性 NT- 6基因 ,含该基因的大肠杆菌在异丙基 -β- D-硫代半乳糖苷诱导的情况下 ,表达了特异性的蛋白质。结论　人脑源性 NT- 6基因的克隆表达为进一步研究 NT- 6的结构、功能及临床应用奠定了基础。

关键词：人神经营养素-6 克隆原核表达蛋白质

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不同还原性巯基氨基酸对人脐静脉内皮细胞的损伤作用研究

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华西医科大学学报 2002年第3期33卷 372-374页

作者：杨志梅王玉芳张霁顾玲王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医医学院物证教研室

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)... 详细信息

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)不仅促进脂质过氧化 ,而且可诱导细胞凋亡并可致细胞坏死。 2谷胱甘肽(GSH)呈还原性 ,对细胞有全面的保护作用。 3Hcy的氧化性最强 ,GSH则呈现出完全的还原性 ,半胱氨酸 (Cys)可能处于二者之间。结论　同型半胱氨酸可能是通过特异的抑制谷光甘肽过氧化物酶并减弱了细胞内的还原缓冲能力等机制 ,发挥与 Cys和 GSH不同的生物学效应 ,从而导致内皮细胞出现坏死和凋亡等损伤性的改变。

关键词：同型半胱氨酸半胱氨酸谷胱甘肽内皮细胞脐静脉

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银杏内酯B对局灶性脑缺血时星形胶质细胞GFAP表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2007年第2期38卷 284-286,301页

作者：张敬各李树清王树人李凡四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 昆明医学院病理生理教研室

目的观察血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)对局灶性脑缺血时星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,并探讨其作用机制。方法建立光化学诱导树局灶性脑缺血模型,用HE染色和电镜技术观察缺血后不同时间脑组织星形胶质... 详细信息

目的观察血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)对局灶性脑缺血时星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,并探讨其作用机制。方法建立光化学诱导树局灶性脑缺血模型,用HE染色和电镜技术观察缺血后不同时间脑组织星形胶质细胞的形态学改变;用免疫组织化学法观察脑缺血后4h、24h、72h及给予GB后24h半暗区及对侧皮层星形胶质细胞GFAP的表达,并测定其平均灰度值。结果光镜下可见,HE染色显示树局灶性脑缺血后,随缺血时间延长,星形胶质细胞形态有不同程度改变;电镜观察显示缺血24h时星形胶质细胞明显肿胀。免疫组织化学染色可见,半暗区星形胶质细胞GFAP表达在4h时没有明显改变,24h时增加(P<0.01),72h时仍维持在较高水平(P<0.01);对侧皮层星形胶质细胞GFAP表达于72h时开始增加(P<0.05)。缺血后6h舌下静脉注射GB至缺血24h时,星形胶质细胞GFAP表达少于缺血组(P<0.05),但仍较假手术组高。结论脑缺血后星形胶质细胞GFAP表达增强,GB可通过减少星形胶质细胞GFAP的表达而起脑保护作用。

关键词：银杏内酯B 光化学脑缺血星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白

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人源性神经营养素-6对大鼠面运动神经元逆行溃变的保护作用

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中国应用生理学杂志 2005年第4期21卷 397-400,i0010页

作者：张承武李自成李丽郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室四川成都610041

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据。方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起... 详细信息

目的:探讨人源性神经营养素-6对受损伤神经元的保护作用,为全面了解人源性NT-6的神经生物学特性以及为临床上退行性神经病变的治疗提供实验依据。方法:将健康成年SD大鼠随机分为两组,即不做任何处理的正常对照组和切断一侧面神经后引起面运动神经元逆行溃变的实验组;实验组又根据面肌内注射物的不同分为空白对照组、人源性NT-6实验组和生理盐水对照组。动物饲养两周后,取脑干切片,行尼氏染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组化染色,观察人源性NT-6对逆行溃变的面运动神经元的保护作用。结果:与空白对照组和生理盐水对照组相比,NT-6实验组面神经核尼氏染色的强度值和面神经核内ChAT阳性神经元数目显著增加。结论:人源性NT-6对由于轴突损伤引起逆行溃变的神经元具有保护作用。

关键词：神经营养素-6 运动神经元逆行溃变保护

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阻断猫基底动脉引起的延髓缺血和呼吸血压效应的研究

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中国应用生理学杂志 2003年第4期19卷 323-327页

作者：庄旭郭俊霞张承武郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室四川成都610044

目的 :通过结扎基底动脉主干不同节段观察脑干缺血范围和神经元形态学变化以及呼吸活动和动脉血压的变化 ,为进一步探讨脑干缺血影响呼吸和循环等功能活动的机制和防治措施提供依据。方法 :以猫为实验对象 ,结扎基底动脉主干不同节段 ,... 详细信息

目的 :通过结扎基底动脉主干不同节段观察脑干缺血范围和神经元形态学变化以及呼吸活动和动脉血压的变化 ,为进一步探讨脑干缺血影响呼吸和循环等功能活动的机制和防治措施提供依据。方法 :以猫为实验对象 ,结扎基底动脉主干不同节段 ,分析脑干缺血区血管密度和神经元形态学变化 ,以膈肌肌电和股动脉血压为指标 ,观察呼吸活动和血压的变化。结果 :结扎基底动脉可引起延髓血管密度减小 ,引起延髓缺血。结扎基底动脉不同节段引起的缺血范围有明显重叠 ,缺血区主要位于闩平面吻端的延髓。缺血区神经元胞体肿胀 ,尼氏染色着色变浅 ,尼氏体减少。动物的吸气时程 (TI)和呼气时程 (TE)缩短 ,呼吸频率 (RF)增快 ,平均动脉血压 (MBP)下降 ,均P <0 .0 5,呼吸幅度 (A)无明显变化。结论 :基底动脉不同节段对延髓的血液供应有明显重叠 ,延髓缺血可引起呼吸和血压改变 ,延髓缺血性神经元损伤是引起呼吸。

关键词：延髓基底动脉缺血呼吸血压猫脑缺血

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同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响

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卫生研究 2007年第3期36卷 291-294页

作者：王丽珍张敬各王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血症相关浓度及极高浓度的Hcy(0、3... 详细信息

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血症相关浓度及极高浓度的Hcy(0、30、100、200、500和1000μmol/L),并孵育72h,以MS-PCR分析MTHFR启动子区域甲基化状态,采用RT-PCR测定MTHFR mRNA的表达水平。结果不同浓度Hcy处理人血管平滑肌细胞后,其MTHFR基因启动子区域出现去甲基化,甲基化水平明显降低。RT-PCR结果显示MTHFR mRNA表达增加。结论Hcy可促进人血管平滑肌细胞MTHFR启动子区域去甲基化,并使MTHFR mRNA表达增加。

关键词：同型半胱氨酸 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶 DNA甲基化

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17β雌二醇对人精子功能的非基因组调节效应及其机制的研究

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生殖与避孕 2007年第1期27卷 6-11页

作者：顾雪蓓岳利民张金虎何亚平四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

目的：探讨17β雌二醇对人精子功能非基因组效应的可能机制。方法：运用计算机辅助精子分析系统与人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精实验,评价17β雌二醇对精子功能的调节作用；精子经信号转导途径抑制剂处理后,再采用流式细胞... 详细信息

目的：探讨17β雌二醇对人精子功能非基因组效应的可能机制。方法：运用计算机辅助精子分析系统与人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精实验,评价17β雌二醇对精子功能的调节作用；精子经信号转导途径抑制剂处理后,再采用流式细胞术检测精子胞内Ca^(2+)浓度的变化。结果：1μmol/L和5μmol/L E_2-BSA能提高人精子的A级精子百分比、平均曲线运动速度、平均直线运动速度、平均路径速度(P＜0．05)；自身受精率偏低的继发不育患者精子经1μmol/L和5μmol/L E_2-BSA作用后受精率提高(P＜0．05),但对本身受精率较高的精子影响不大(P＞0．05)；应用腺苷酸环化酶、磷脂酶C和酪氨酸蛋白激酶特异性抑制剂分别作用后均明显抑制E_2-BSA引起的胞内Ca^(2+)浓度的上升(P＜0．05)。结论：17β雌二醇能显著提高精子的运动能力和受精率,17β雌二醇可能通过腺苷酸环化酶、磷脂酶C或酪氨酸蛋白激酶信号转导途径实现对人精子功能调节的非基因组效应,为改善人精子功能提供了可能的新途径。

关键词：人精子 17β雌二醇非基因组效应跨膜信号转导途径

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酸敏感的背景钾通道TASK-1的功能及其相关调控

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生理科学进展 2007年第3期38卷 265-268页

作者：高蕊呼海燕郑煜石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832002 四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

酸敏感的背景钾通道TASK-1[TWIK(tandem of P domains in a weak inwardly rectifying K+ channel)-related acid-sensitive K+channels-1]是一类对细胞外生理状态pH敏感的开放-整流型漏钾离子通道。该通道在中枢神经系统和外周组织广... 详细信息

关键词：酸敏感的背景钾通道呼吸调节调控

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